ALK抑制剂

目的：基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探究黄芪甲苷(ASIV)对球囊损伤后大鼠颈总动脉内膜增殖和炎症反应的作用机制。方法：选用SPF级健康雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠24只，12周龄，约280～300 g，适应性喂养3 d，使用球囊损伤法建selleckchem Liraglutide立大鼠颈总动脉球囊损血管模型，实验共分为4组，假手术(sham)组、模型(model)组、低剂量ASIV(L-ASIV)组和高剂量ASIV(H-ASIV)组，每组6只。L-ASIV给于60 mg·kg-1·d-1的ASIV,H-ASIV给于120 mg·kg~(-1)·d~(-1)的ASIV灌胃治疗，sham组及model组给予相同体积的更多1%羧甲基纤维素钠灌胃。4周后取大鼠损伤处颈总动脉做石蜡切片，光镜下观察血管腔形态，通过图像分析软件评估管腔面积和内膜增生程度、内膜中膜比值；检测血管组织中磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(pAkt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、增殖细胞核抗原(PCNA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和P62的蛋白水平。结果：(1)与sham组相比，model组大鼠颈总动脉内膜显著增殖(P<0.05)，经过ASIV干预后内膜增殖程度显著降低(P<0.05)。(2)与model组相比，L-ASIV组和H-ASIV组CD3和CD68表达水平显著降低(P<0.05)。(3)与model组相比，H-ASIV组p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、PCNA、ICAM-1和P62蛋白水平显著升高(P<0.05),α-SMA和LC3B蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论：黄芪甲苷可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信Iodinated contrast media号通路抑制血管平滑肌细胞自噬来发挥对球囊损伤后大鼠颈总动脉内膜增殖及炎症的抑制作用。

斑叶植物(variegated leaf plants)是彩叶植物的一类,是指叶片腹面存在规则或不规则的斑点、斑块(不包括病斑)的植物。野生虎耳草(Saxifraga stolonifera Curt.)具有三个表型,即绿叶型(G)、白斑型(W)与紫斑型(P)。由于野生虎耳草同时具有沿脉白色掌状斑纹以及脉间紫色云片状斑纹的表型,对其进行叶斑结构特征与形成原因的研究可以推演其对生境的适应策略,并有助于促进对同类植物进行资源保护利用以及园林品种的人工培育。为确定上述三种表型的稳定性,对其进行长期培养观察,确定虎耳草的三种表型在不同光照强度、不同季节以及不同温湿度条件下均保持稳定,且在纤匍枝无性繁殖的后代中也保持亲本的斑纹特性。以上述三种表型的虎耳草叶片为材料进行徒手切片和冷场发射扫描电镜观察比较,获得三种表型叶片的形态结构和色素分布特点,确认白斑型虎耳草为空隙型(air space type)叶斑,紫斑型虎耳草为空隙型叶斑与非光合色素型(pigment type)叶斑的叠加。白斑型虎耳草斑纹区域的栅栏组织细胞形态为倒圆锥状至球状(不同于正常区域的圆柱状),上表皮细胞与栅栏组织细胞及栅栏组织细胞之间存在明显空隙,因而呈现沿脉分布的白色掌状斑纹。紫斑型虎耳草维管束上方的栅栏组织细胞形态为倒圆锥状,上表皮细胞与栅栏组织细胞存在明显空隙,导致沿脉出现狭窄的白色掌状斑纹;脉间区域栅栏组织细胞之下紧邻的海绵组织细胞内存在明显的紫红色色素,确定色素为花青素,花青素的大量积累导致了脉间紫色云片状斑纹的出现。为验证虎耳草的空隙型叶斑中是否具有与红车轴草(Trifolium pratense)一致的空隙型叶斑发育相关基因,同时发掘虎耳草非光合色素型叶斑发育的相关基因,取栽培于相同条件下、长势相同或相近的三种表型虎耳草的成熟叶和幼叶进行2+3全长转录组测序。三代全长转录组测序两池(共12个样品)分别得到46.56Gb、43.71Gb的clean datMobile genetic elementa,二代测序38个样品的数据量均在6.4 Gb以上,经检测、polish和去冗余最终共得到113,433条非冗余转录本。分别以绿叶型成熟叶(G)、绿叶型幼叶(YG)为对照,比较白斑型成熟叶(W)、紫斑型成熟叶(P)以及白斑型幼叶(YW)、紫斑型幼叶(YP)的基因表达水平,以FDR<0.01且|Fold Change|≥2为标准筛选差异表达基因(DEGs)。对DEGs进行GO注释和KEGG代谢通路富集,结合形态解剖数据与Map Man4框架的注释及通路图,确定虎耳草www.selleck.cn/products/d-lin-mc3-dma空隙型叶斑与光合作用、细胞壁途径相关,虎耳草非光合色素叶斑与花青素合成途径相关。使用Map Man筛选出17此网站类与虎耳草空隙型叶斑发育相关的关键候选基因,即纤维素合成途径中的CESA、KOR、STL、CC、CSI、CMU基因,木质素合成途径中的CCo A-OMT基因,半纤维素合成途径中的CSLC、CSLA、IRX14基因,果胶合成途径中的GAUT1、GAUT7、PME、PMEI基因,光合磷酸化途径中的Psb亚基因家族和LHCb亚基因家族以及卡尔文循环途径中的Rbc S基因。与红车轴草的空隙型斑纹相比,上述基因中的CSL、PME、Rbc S、LHCb亚家族基因表达模式相同,CESA基因表达模式相反,其余基因在红车轴草中未见差异表达。筛选出6类可能与虎耳草非光合色素型叶斑发育相关的基因,即花青素合成途径中的4CL、KAT、CHS、F3’H、FLS、DFR基因。本研究基本确定了虎耳草三种表型的稳定性,通过叶片横切面的结构特征和色素分布情况,明确了其叶斑类型。通过转录组测序分析,初步筛选了调控虎耳草空隙型和非光合色素型叶斑的基因,为园艺育种及后续研究虎耳草科其他斑叶植物叶斑性状的结构与演化提供了基础,也为其他空隙型斑叶植物叶斑形成的分子机理研究积累了基础数据。

目的 研究显微镜目镜参数视场数对血涂片法手工计数白细胞和血小板结果的影响，并验证血小板估算计数公式的正确性，探讨规范显微镜用于血细胞计数的参数方法。方法 分别采用全自动血细胞分析仪法、改良牛鲍计数板法、血涂片法3种方法计数白细胞和血小板的数量。其中，血涂片法采用18和26.5两种不同视场数的显微镜分别计数，将白细胞、血小板计数结果分别经过公式(r=2、r=10、r=15、血小板估算公式)换算后与全自动血细胞分析仪法、改良牛鲍计数板进行相关性和秩和检验统计学分析。结果 视场数为18和26.5的显微镜计数白细胞结果之间，血涂片法白细selleck NMR胞估算值与全自动血细胞分析仪、改良牛鲍计数板结果之间，视场数为18和26.5的显微镜计数血小板结果之间差异均有统计学意义(P<0.05)。当r=10和r=15时2种视场数的显微镜血涂片法计数血小板差异均有统计学意义(P<0.05)。视场数为18的显微镜计数高值血小板与全自动血细胞分析仪法之间，视场数为26.5的显微镜血涂片法计数3种浓度的血小板与全自动血细胞分析仪法、改良牛鲍计数板法之间差异均有统计学意义(P<0.05)。视场数为18时的血小板估算公式估算低值血小板，视场数为26.5时的血小板估算公式估算正常值血小板与全自动血细胞分CP-690550核磁析仪、改良牛鲍计数板之间差异均有统计学意义(P<0.05),其余均无Empirical antibiotic therapy统计学意义(P>0.05)。结论 不同视场数的显微镜对于血涂片法计数白细胞和血小板存在一定程度的影响，可按照公式应用于细胞估算和计数，将会极大解决复检问题，值得推广使用。

目的结合网络药理学、分子对接技术和多公共数据库挖掘,并通过体内、体外的实验与验证,深入研究臭壳虫及其联合用药顺铂对肺腺癌的影响及其机制,以期为臭壳虫的临床药物研发提供理论依据。方法通过网络药理学方法和分子对接技术来分析臭壳虫抗非小细胞肺癌的分子靶点和作用机制。将20只Sprague-Dawley雄性大鼠按人与大鼠体表面积换算剂量灌胃臭壳虫汤剂,按照血清药理学方法制备臭壳虫含药血清,通过CCK-8实验、细胞划痕、Transwell小室实验、蛋白免疫印迹(Western blot)实验等体内细胞实验来研究臭壳虫及其联合用药顺铂对非小细胞肺癌A549细胞生长增殖、迁移和侵袭的影响。本实验采用C57BL/6小鼠皮下成瘤模型,将48只C57BL/6 Lewis非小细胞肺癌小鼠按平均瘤体随机分为4组(n=12),分别是:模型对照组、臭壳虫组、顺铂组和联合用药(臭壳虫+顺铂)组,连续用药14天,记录C57BL/6非小细胞肺癌小鼠的体质量、肿瘤的长径和短径,观察并记录C57BL/6非小细胞肺癌小鼠体质量的变化及其肿瘤生长情况;治疗结束后,取材称重肿瘤组织、脾脏及胸腺器官,计算实体瘤的生长抑制率、免疫器官指数;各组肿瘤组织行HE染色和IHC染色,观察各组肿瘤的组织形态及各组目的蛋白的阳性表达情况。通过网络药理学及分子对接,分析臭壳虫抗肺腺癌的分子作用机制;通过TCGA、GTEx等公共数据库,分析臭壳虫对肺腺癌差异预后的影响;通过NCBI、Gene Cards和KEGG等公共数据库,分析臭壳虫抗肺腺癌及其增强化疗药顺铂敏感性的铁死亡机制。结果(1)通过网络药理学分析得到臭壳抗非小细胞肺癌的潜在核心靶点有11个:ALB、HSP90AA1、SRC、CASP3、MAPK1、AR、CDC42、PGR、NOS3、CTSB、GSTP1。基因本体(GO)富集分析结果显示:生物过程主要与参与血管内皮生长因子受体信号通路、吞噬作用的Fcγ受体信号Gefitinib-based PROTAC 3使用方法通路、外源性凋亡信号通路的负调控等生物过程相关;细胞组分主要涉及胞浆、质膜、膜小凹、蛋白质复合体、核、外泌体、细胞质;分子功能主要涉及蛋白质结合、Rho-GDP解离抑制剂结合、相同蛋白质结合、丝裂原活化蛋白激酶结合、酶结合(P均<0.05)。基因组百科全书(KEGG)富集分析发现与非小细胞肺癌相关的条目有:VEGF信号通路、Estrogen信号通路、Adheren Junction信号通路、Rap1信号通路和MAPK信号通路等(P均<0.05)。分子对接结果显示各核心成分与潜在核心靶点之间具有较好的结合活性。(2)体外细胞实验方面,CCK-8实验结果显示,与空白对照组比较,臭壳虫含药血清组、顺铂组和联合用药组细胞增殖降低明显;与顺铂组比较,联合用药组细胞增殖降低明显(P均<0.05)。迁移侵袭实验结果显示,与空白对照组比较,臭壳虫含药血清组、顺铂组及联合用药组细胞划痕愈合面积、细胞迁移侵袭个数均减小;与顺铂组比较,联合用药组细胞划痕愈合面积、细胞迁移侵袭个数均减小(P均<0.05)。Western blot结果显示,与空白对照组相比,臭壳虫含药血清组、顺铂组及联合用药组中VEGF、SRC、CDC42和Bcl-2蛋白表达下调,CASP3和Bax的蛋白表达增加(P均<0.05)。(3)体内动物实验方面,在体质量变化上,臭壳虫组与模型对照组相比较无显著性差异(P>0.05);与模型对照组和臭壳虫组比较,顺铂组以及联合用药组小鼠体质量下降(P均<0.05)。在肿瘤生长上,模型对照组小鼠皮下瘤生长最快,联合用药组皮下瘤生长最慢。在免疫器官指数上,与模型对照组比较,臭壳虫组、顺铂组和联合用药组的免疫器官指数均下降(P均<0.05)。在肿瘤生长抑制率上,与模型对照组比较,臭壳虫组、顺铂组和联合用药组的瘤重均下降,抑瘤率均高于模型对照组;与顺铂组比较,联合用药组的瘤重减轻,抑瘤率高于顺铂组(P均<0.05)。肿瘤组织苏木精-伊红(HE)染色结果显示,模型对照组的肿瘤细胞核大圆,核质比高,各治疗组肿瘤细胞较多出现胞核behavioral immune system固缩深染或碎裂、边缘化、空泡化病理性核分裂明显减少。肿瘤组织免疫组化(IHC)染色结果显示,与模型对照组比较,臭壳虫组、顺铂组及联合用药组中VEGF、SRC、CDC42、Bcl-2蛋白阳性表达高,CASP3和Bax蛋白阳性表达低。(4)通过网络药理学分析得到臭壳虫治疗肺腺癌的潜在核心靶点有13个:SPHK1、PDGFRB、CXCR4、MAPK1、CCNE1、NFE2L2、CDK5、HIF1A、GSK3B、PTGS2、MMP9、CDK1、STAT1。基因本体富集分析结果显示:生物过程主要与平滑肌细胞增殖的正调控、蛋白质进入细胞核的正调节、凋亡过程的负调控、细胞迁移的正调节、蛋白质磷酸化、肽酰丝氨酸磷酸化和肽基苏氨酸磷酸化等生物过程相关;细胞组分主要涉及中心体、核质、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶全酶复合物、细胞核和细胞质等细胞组分;分子功能主要涉及激酶活性、蛋白质结合、ATP结合、酶结合、p53结合等分子功能(P均<0.05)。基因组百科全书富集分析发现与肺腺癌相关的条目有:癌症通路、micro RNA癌症通路、IL-17信号通路、趋化因子信号通路、PI3K-Akt信号通路、VEGF信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性等(P均<0.05)。分子对接结果显示各核心成分与潜在核心靶点之间具有较好的结合活性。(5)臭壳虫治疗肺腺癌的潜在核心靶点CCNE1、CDK1、MMPProteases抑制剂9、STAT1、SPHK1、PDGFRB在肺腺癌瘤组织和正常组织间的表达差异具有统计学意义(P均<0.05),CCNE1、CDK1、PTGS2、GSK3B、CXCR4、HIF1A、SPHK1对肺腺癌总生存期的影响有统计学差异(P均<0.05)。臭壳虫治疗肺腺癌的潜在核心靶点SPHK1、PDGFRB、MAPK1、NFE2L2、HIF1A、GSK3B、PTGS2与铁死亡相关。结论(1)臭壳虫能够作用于VEGF、SRC、CDC42、CASP3、Bcl-2和Bax等靶点,调控VEGF信号通路,抑制人肺腺癌A549细胞的生长增殖、迁移和侵袭,抑制小鼠肺腺癌Lewis细胞的增殖;(2)臭壳虫可能作用于SPHK1、PDGFRB、CXCR4、MAPK1、CCNE1、NFE2L2、CDK5、HIF1A、GSK3B、PTGS2、MMP9、CDK1、STAT1等靶点发挥抗肺腺癌的作用;(3)臭壳虫可能作用于CCNE1、CDK1、SPHK1等靶点影响肺腺癌患者的生存预后;(4)臭壳虫可能通过铁死亡作用于SPHK1、PDGFRB、MAPK1、NFE2L2、HIF1A、GSK3B、PTGS2等铁死亡相关基因增强化疗药顺铂的敏感性。

昆虫是自然界中数量及种类最多的一类无脊椎动物。翅膀是昆虫重要的器官之一,其在躲避天敌、相互交流、长途迁徙、觅食与求偶等方面发挥重要作用。基于家蚕(Bombyx mori)具备完善的基因组信息、清晰的遗传背景以及成熟的遗传操作平台,因此,其是研究昆虫翅膀发育的最佳模式生物之一。在家蚕中,翅相关的研究不仅揭示了昆虫翅发育的调控机制,同时也为农林业鳞翅目害虫的生物防治提供理论依据。调控昆虫翅发育的关键信号通路有Wnt/WingINCB28060分子量less(Wg)、Hippo、Hedgehog(Hh)、Decapentaplegic(Dpp)等信号通路,它们作为形态发生蛋白形成浓度梯度,以浓度依赖的方式诱导信号转导和激活基因表达,进而调控翅的发育。已有研究表明,硫酸肝素蛋白聚糖(Heparan sulphate proteoglycans,HSPGs)在细胞信号传导方面发挥着重要的作用,且保守存在于各类细胞膜表面。硫酸肝素(Heparan sulphate,HS)作为共受体介导多种信号因子的传递,参与组织器官发育和正常生理功能,调控几乎所有器官系统的代谢、运输和信息传递。人类EXT(Exostosin)基因家族中的EXT1、EXT2和EXTL3编码参与合成HS的糖基转移酶,研究发现它们在果蝇中的同源基因tout velu(ttv)、sister of tout velu(sotv)和brother of tout velu(botv)的缺失均会导致果蝇翅缺陷,但其详细的调控机制尚不清楚。为了进一步探究EXT家族在翅发育过程中的作用,我们对鳞翅目模式昆虫——家蚕中的EXT基因进行研究。首先,我们克隆了家蚕的EXT2同源基因Sotv(BmSotv),并对其进行了生物信息学分析和表达特征分析;利用CRISPR/Cas9技术获得了具有明显翅缺陷的BmSotv转基因敲除品系;确定了BmSotv在家蚕翅发育的关键作用时期;并最终通过比较BmSotv敲除突变体和野生型个体的蛋白质组差异和细胞相关实验验证,对翅发育调控机制进行了初步的解析。本研究获得的主要结果如下:1、BmSotv的克隆、鉴定和表达特征分析通过序列比对,BmSotv基因位于家蚕23号染色体,其silk DB3.0数据库编号为BMSK0013095,基因全长5945bp,包含4个外显子,3个内含子。PCR扩增及测序结果显示实验证明其CDS序列全长1638bp,共编码545个氨基酸。对预测的蛋白序列分析发现BmSotv包含3个结构域,包括跨膜结构域、EXT蛋白家族特有的Exostosin结构域和糖基转移酶G64结构域,后两个保守域是合成硫酸肝素所必需的。同源序列比对结果显示BmSotv与EXT2和Sotv蛋白的氨基酸序列相似度在45%。进化分析结果显示家蚕BmSotv与其他鳞翅目昆虫聚为一枝,这表明该基因以及鳞翅目昆虫的同源基因可能是由共同的祖先进化而来,且具有高度的保守性。以上结果暗示序列保守的BmSotv可能参与调控翅发育的功能,是研究昆虫翅膀发育调控的一个重要候选基因。为了探索BmSotv在家蚕中的功能,我们通过q PCR检测BmSotv在家蚕5龄3天幼虫中肠、翅原基、表皮、马氏管、气管丛、精/卵巢、脂肪体、头部和丝腺中的表达情况,结果显示BmSotv在家蚕各组织广泛表达,在中肠表达量最高。为了进一步探索BmSotv在家蚕翅发育过程中的功能,我们对5龄幼虫起至化蛾的翅原基进行了时期表达特征分析,结果显示BmSotv在家蚕5龄幼虫阶段稳定低量表达,在游走期开始表达量上升;对BmSotv进行亚细胞定位,结果显示其主要定位于细胞质和细胞膜。2、BmSotv参与家蚕翅原基的发育利用CRISPR/Chuman biologyas9技术,我们在BmSotv第一个外显子上设计了3条sg RNA,构建了其sg RNA敲除载体;通过胚胎显微注射和荧光筛选获得了sg RNA阳性品系后,将其与Cas9品系杂交,通过荧光筛选获得F1代阳性个体;对F1代阳性个体进行敲除效率检测,结果显示在sg RNA-3品系的基因组敲除位点存在小片段碱基的缺失和单碱基的插入,总体编辑效率达85%,其中70%的碱基缺失会导致移码突变,蛋白翻译提前终止;另外的15%的突变会导致氨基酸减少,从而使BmSotv的表达量降低。与野生型相比,BmSotv-KO品系出现以下表型:(1)蛹期和蛾期翅膀发育畸形,呈现出明显的皱缩和翅面变小;(2)触角和附肢存在不同程度的缺陷,蛹期触角变短且呈竖立状,化蛾后观察到触角上的羽状感受器大量脱落;附肢畸形,严重者蛾子难以实现爬行等活动;(3)在化蛾阶段,统计发现能破茧化蛾的仅占10.47%,其余的84.36%的蛹不能破茧化蛾,将后者蚕茧剪开后,发现其中有71.98%的蛹上半部分蜕皮困难,仅在腹部区域能够蜕去蛹皮,而另外的12.38%的蛹完全无法化蛾;(4)蛾子不能正常交配,无法产生后代。为了进一步探究BmSotv在家蚕翅发育过程中发挥作用的关键时期,我们分别观察了从幼虫的5龄到上蔟化蛹阶段野生型和突变型家蚕的翅原基。结果表明与野生型相比,敲除BmSotv家蚕的翅原基在5龄幼虫仅稍小;但发育到游走期后,可以明显观察到敲除个体翅原基发育出现异常,翅脉发育紊乱无序,翅原基形状远小于野生型。随后,通过RT-PCR检测BmSotv敲除品系和野生型在游走期翅原基中已知与翅发育相关的基因的表达情况,结果显示Wg、Hh、Dpp和Wnt均显著下调。利用Western blot检测BmSotv蛋白和Wnt信号通路中关键蛋白Pangolin的表达水平,发现其表达量均显著下调。以上结果表明BmSotv主要在家蚕游走期参与翅膀的发育,敲除该基因导致翅发育缺陷。BmSotv可能通过调控Wnt和Hh信号通路参与家蚕翅原基的发育。3、BmSotv影响家蚕翅发育的分子机制探究为了探究BmSotv影响家蚕翅发育的分子机制,我们对BmSotv敲除系和野生型游走期的翅原基进行了蛋白质组学测序。差异分析结果表明在敲除组和对照组共有的4113个蛋白中有30个蛋白显著差异表达;在二者各自特异表达的蛋白中有32个显著差异蛋白。我们在转录水平针对筛选出的上、下调蛋白TOP4相对应的基因进行了检测,定量结果与蛋白质组学测序结果一致,表明蛋白质组学测序结果可靠。对以上62个显著差异蛋白进行GO功能分析,结果显示差异蛋白主要在细胞膜上发挥作用,并主要涉及到代谢、催化和结合功能;KEGG富集分析发现差异蛋白主要显著富集到糖胺聚糖生物合成-硫酸角质素(Glycosaminoglycan biosynthesiskeratan sulfate,KS)、溶酶体和Hippo信号通路中。我们利用RT-PCR实验检测KS通路、溶酶体通路中显著差异表达蛋白所对应的基因BMSK0010499和BMSK0005666,定量结果显示均显著上调表达,与组学测序结果一致,说明在家蚕中敲除BmSotv,糖胺聚糖通路发生了显著变化。暗示BmSotv可能Cobimetinib体内与sotv/EXT2相似,作为糖基转移酶参与合成HS。同时,我们检测了Hippo信号通路相关基因BMSK0006876(Dachsous,Ds)、Hippo、Mats和Yki,其中Ds、Hippo和Mats均显示在突变体中显著上调表达,而其负调控基因Yki呈现显著下调,表明敲除BmSotv,显著抑制了Hippo信号通路。此外,我们在细胞水平构建了BmSotv转基因稳定敲除细胞系,基因组检测、免疫荧光和Western blot实验,均表明在突变细胞系中BmSotv被成功敲除,且HS的表达量显著降低。接着,我们在蛋白水平检测了Wnt信号通路中关键蛋白Wnt和Pangolin的表达水平,结果表明其表达量显著下调,这与个体水平得到的结果相符合,由此说明BmSotv也通过Wnt信号通路,参与家蚕翅原基的发育。综上,BmSotv主要在家蚕游走期的翅原基中发挥作用,其参与合成的HS具有与Hippo信号通路中膜受体基因Ds相似的功能,介导Hippo信号通路的转导,从而调控家蚕翅发育;同时,该基因的缺失也会抑制Wnt和Hh信号通路,综合影响进而导致翅原基的发育异常,造成翅呈现皱缩的表型。

目的 探讨血清泛连接蛋白1(Pannexin1)、血小板反应蛋白-1(TSP-1)、可溶性共刺激分子B7-H3(sB7-H3)水平与急性脑梗死(ACI)患者丁苯酞治疗效果的关系。方法 选取2021年3月至2022年3月新乡医学院第一附属医院收治的140例急性脑梗死患者作为ACI组，同期行健康体检的健康志愿者100例作为健康组。检测所有研究对象血清Pannexin1、TSP-1、sB7-H3表达水平，分析三者与ACI患者临床特征的关系。ACI患者入院后均使用丁苯酞治疗，分析治疗前后血清Pannexin1、TSP-1、sB7-H3表达差异，并根据治疗效果不同分为治疗有效组(n=91)与治疗无效组(n=49)，比较两组血清Pannexin1、TSP-1、sB7-H3水平，明确与患者治疗效果的关系及预测daily new confirmed cases价值。结果 ACI组血清Pannexin1、TSP-1、sB7-H3表达水平均高于健康组，差异有统计学意义(P <0.05)。疾病重度、大面积梗死、颈动脉重度狭窄ACI患者血清Pannexin1、TSP-1、sB7-H3处于较高水平(P <0.05)。治疗后，ACI患者使用丁苯酞血清Pannexin1、TSP-1、sB7-H3表达水平均低于治疗前，差异有统计学意义(P <0.05)。治疗无效组患者血清Pannexin1、TSP-1、sB7-H3表达水平高于治疗有效组，差异有统计学意义(P <0.05)。血清Pannexin1、Puromycin抑制剂TSP-1、sB7-H3水平与ACI患者丁苯酞治疗效果均表现为正相关关系，差异有统计学意义(r=0.453、0.425、0.466,P <0.05)。Logistic回归分析显示，除受疾病程度、梗死面积、颈动脉狭窄程度的影响外，Pannexin1、TSP-1、sB7-H3同样是影响ACI患者丁苯酞治疗效果的危险因素，差异有统计学意义(P <0.05)。ROC曲线显示，血清Pannexin1、TSP-1、sB7-H3三项联合点击此处曲线下面积为0.934显著高于三项单独预测，且敏感度、特异度均较高。结论 Pannexin1、TSP-1、sB7-H3在ACI患者血清中表达升高，且与患者丁苯酞治疗效果有关，临床可通过早期监测血清Pannexin1、TSP-1、sB7-H3水平早期预测治疗效果，以改善患者预后。

肝细胞核因子1α(hepatocyte nuclear factor 1α,HNF1α)作为一种转录因子在维持胰腺β细胞功能、肝脏脂质代谢等过程中发挥着重要的调控作用。该基因突变是导致青少年起病的成人型糖尿病（matGW4869 IC50urity onset diabetes of the young,MODY）3型的致病原因，目前已报道的该基因的突变位点众多，如P291fsinsC、P112LAntiviral immunity等常见的突变位点，但其具体的分子机制尚不清楚。本研究对前期工作中发现的1例携带有HNF1α基因的c.493T>C位点突变的MODY3患者，通过应用Mutation Surveyor软件分析突变位点的致病性，构建HNF1α野生型和突变型真核表达质粒，采用Western blot检测两种质粒表达的HNF1α蛋白质的量和稳定性变化，结果发现Mutation Surveyor软件分析提示c.493T>C位点Staurosporine供应商突变可能为致病性变异基因，Western blot显示突变型真核质粒表达的HNF1α蛋白质的量和稳定性均明显降低，差异均具有统计学意义（P<0.05）。上述结果表明c.493T>C(p.Trp165Arg)变异显著影响HNF1α的表达量及稳定性，可能为其导致疾病发生的原因，为后续深入探究MODY3的分子致病机制提供了新的方向。

动物源性食品中四环素类药物与氨基糖苷类药物的残留会对人类健康带来潜在危害。本论文旨在制备出四环素类与氨基糖苷类药物的受体,以其为识别元件,建立新型的检测方法,对这两类兽药在动物源性食品中的残留进行检测。首先,本研究合成了一种四环素的光亲和标记-活性导向蛋白谱探针,从耐四环素的大肠杆菌中捕获到了一种天然TetR蛋白。分子对接结果表明,该蛋白与10种四环素类药物(TCs)的结合能在7.58-8.56 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力连接,药物分子主要结合位点在四环素母环上。表面等离子共振实验(SPR)表明,该蛋白与10种TCs的绝对亲和系数在17.672-25.110之间。以该天然TetR蛋白为识别元件建立了一种直接竞争化学发光法,用于检测牛奶中的10种TCs。结果显示,该方法对10种TCs的IC50值为0.084-0.32 ng/mL,检测限为0.002-0.009 ng/mL,在空白牛奶样品中的添加回收率为68.4%-91.3%。然后,研究者对上述天然TetR蛋白进行了定点突变,将139位组氨酸突变为色氨酸。分子对接结果表明,TetR单点突变体与10种TCs的结合能在7.13-9.26 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力与Pi-Pi键连接,药物分子主要结合位点在四环素母环上。SPR结果表明,TetR单点突变体与10种TCs的绝对亲和力在23.941-33.327之间。以该TetR单点突变体为识别元件www.selleck.cn/products/mcc950-sodium-salt建立了一种荧光偏振法,用于检测牛奶中的10种TCs。结果显示,10种TCs的IC50值为15.5-55.2 ng/mL,检测限为0.4-1.5 ng/mL,在空白牛奶样品中的添加回收率为71.5%-95.4%。当上述天然TetR蛋白的135位丝氨酸突变为苯丙氨酸,142位亮氨酸突变为赖氨酸时,受体的稳定性有明显提升。分子对接结果表明,TetR双点突变体与10种TCs的结合能在8.03-9.64 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力与氢键连接,药物分子主要结合位点在四环素母环上。以TetR双点突变体为识别元件建立了一种半均相竞争荧光法,用于检测牛奶中10种TCs。结果显示,对10种TCs的IC50值为9.3-21.1 ng/mL,检测限为0.32-0.94 ng/mL,在空白牛奶样品中的添加回收率为74.9%-92.64%。另外,本研究表达了赖氨酸芽孢杆菌的核糖体S12蛋白(RPSL12)。分子对接结果表明Mollusk pathology,RPSL12与10种氨基糖苷类药物(AGs)的结合能在5.15-5.https://www.selleck.cn/products/SB-431542.html84 kcal/mol之间,它们之间主要通过疏水作用力连接。SPR结果表明,RPSL12与10种AGs的绝对亲和力在11.358-26.102之间。以该RPSL12为识别元件建立了一种荧光偏振法,用于检测猪肉样品的10种AGs。结果显示,对10种AGs的IC50值为47.6-72.2 ng/g,检测限为2.1-12.1 ng/g,在空白的猪肉样品中的添加回收率为74.5-97.6%。然后,研究者将大肠杆菌的RPSL12基因与海肾荧光素酶的基因连接,表达出了一种RPSL12-Rluc融合蛋白。分子对接结果表明,该RPSL12与7种AGs的结合能在5.44-6.32 kcal/moL之间,它们之间主要通过疏水作用力连接。SPR结果表明,RPSL12-Rluc与10种AGs的绝对亲和力在12.502-25.235之间。以该RPSL1 2-Rluc融合蛋白为识别元件,建立了一种间接竞争生物发光法,用于检测猪肉样品中7种AGs。结果显示,对7种AGs的IC50值为43.6-75.5 ng/g,检测限为0.51-1.1 ng/g,在空白的猪肉样品中的添加回收率为73.8%-96.2%。最后,研究者将大肠杆菌的RPSL12基因与大肠杆菌的TetR基因连接,表达了 RPSL12-TetR融合受体。以其为识别元件,建立了一种二重化学发光法和一种二重荧光法,用于检测猪肉样品中10种TCs和10种AGs。结果显示,二重化学发光法对 10 种 TCs 的 IC50 值为 0.0287-0.0427 ng/g,检测限为 0.0016-0.0064 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为71%-92%;对10种AGs的IC50值为3.8-17 ng/g,检测限为0.21-1.8 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为70.3%-92%。二重荧光法对10种TCs的IC50值为35.7-54.7ng/g,检测限为2.7-6.4 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为68.7%-91%;对10种AGs的IC50值为26-106.3 ng/g,检测限为1.4-10.2 ng/g,在空白猪肉样品中的添加回收率为71.3%-90%。综上所述,本论文以受体为识别元件建立了 7种针对AGs与TCs的检测方法。结果表明,这些方法可以对AGs和TCs进行多残留快速检测,对保障动物源性食品安全、维护消费者身体健康具有重要意义。

目的 探究CT引导下椎间孔穿刺射频热凝联合富血小板血浆(PRP)注射治疗对上胸段顽固性带状疱疹后神经痛(PHN)患者的临床治疗效果。方法 回顾性选取2020年1月至2022年10月于四川绵阳四0四医院疼痛科接受治疗的上胸段顽固性PHN患者106例，根据治疗方式不同分为观察组(nCL 318952说明书=51)和对照组(n=55)。对照组采用CT引导下椎间孔穿刺射频热凝治疗，观察组在其基础上联合PRP注射治疗。治疗后2、4、8周，采用视觉模拟评分法(VAS)、匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)、汉密顿抑郁量表寻找更多(HAMD)及皮肤病生活质量指数(DLQL)分别评估所有患者的疼痛、睡眠质量、抑郁程度及生活质量变化。同时记录治疗过程中，患者不良反应发生情况。结果 治疗后4周，观察组VAS评分为(2.60±0.09)分，低于对照组[(3.24±0.53)分],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后2、8周，观察组PSQI评分分别为(11.07±0.96)、(7.50±0.44)分，均低于对照组[(12.04±2.23)、(8.94±0.11)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后2、4、8周，观察组的HAMD评分分别为(9.68±1.23)、(5.67±1.26)、(2.69±0.53)分，低于对照组[(12.74±3..02)、(7.08±0.24)、(3.69±0.17)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后8周，观察组DLQL评分为(3.25±0.73)分，低于对照组[(4.58±1.24)分],差异有统计学意义(P<0.05)。两组均未发生严重不良反应。结论 CT引导下椎间孔穿刺射频热凝oncology (general)联合PRP注射治疗可成功缓解上胸段顽固性PHN患者的症状，可有效减轻患者的抑郁程度，提高其睡眠质量和生活质量，值得临床重视。

目的：探讨免疫及靶向药物联合肝动脉灌注化疗术（hepatic arterial infusion chemotherapy,HAIC）治疗晚期肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的疗效与安全性。方法：回顾性分析2021年4月至2022年4月天津医科大学肿瘤医院收治的34例行HAIC联合信迪利单抗及贝伐珠单抗生物类似物治疗的晚期HCC患者，以首次治疗为起点，以患者死亡、疾病进展及不可耐受的不良反应为终点，按照实体肿瘤的疗效评价（mRECIST）1.1标准进行疗效评估，随访截至2023年4获悉更多月。主要研究终点为客观缓解率（objective response rate,ORR），次要研究终点为疾病控制率（disease control rate,DCR）、总生存期（overall survival, OS）、无复发生存期（disease-free survival,DFS）、手术转化率及安全性。结果：ORR为52.9%,DCR可达到85.3%，手术转化利率为41.1%。部分缓解（partial response,PR）组1年OS及DFS分别为94.4%、50.0%；病变稳定（stable disease,SD）+病变进展（progressive dRNA virus infectionisease,PD）组患者1年OS及DFS分别为66.7%、25.0%，两组差距均有统计学PLX5622化学结构意义（P=0.002及P=0.013）。常见的不良反应有恶心呕吐（38.2%）、高血压（32.4%）及血小板减少（29.4%）等，无治疗相关死亡事件发生。结论：HAIC联合信迪利单抗及贝伐珠单抗生物类似物治疗晚期HCC的客观缓解率高，安全性良好，为后续临床试验的开展奠定了基础。