ALK抑制剂

目的 探究依托咪酯（Eto）调节环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白（CREB）信号通路对糖氧剥夺/复氧（OGD/R）诱导的神经元损伤的影响。方法 将海马神经元细胞HT22随机分为对照组、模型组、Eto低、中、高剂量组、抑制剂组。MTT法计算细胞增殖抑制率，筛选Eto最佳干预浓度；EdU、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡；ELISA法检测细胞中cAMP、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平；全自动生化分析仪检测细胞中乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平；Western blot方法检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及cAMP/PKA/CREB信号通路蛋白表达。结果 与对照组比较，模型组HT22细胞EdU阳性细胞率、cAMP、GSH-Px、PCNA、Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达显著降低，凋亡此网站率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、Bax表达显著升高（P<0.05）；与模型组比较，Eto低、中、高剂量HT22细胞EdU阳性细胞率、cAMP、GSH-Px、PCNA、Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达显著升高，凋亡率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、Bax表达显著降低（P<0.05）;cAMP/PKA/CREB信号通路抑制剂H-89可减弱Eto对神经细paediatrics (drugs and medicines)胞的保护作用（P<0.0Laduviglusib半抑制浓度5）。结论 Eto可能通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路，抑制氧化应激和炎症反应，促进细胞增殖，降低细胞凋亡，减弱OGD/R诱导的HT22细胞损伤。

研究目的:非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种由多种因素引起的临床病理综合征,与人们的生活方式和饮食习惯息息相关,其病程包括单纯性肝脂肪变性(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝脏纤维化和肝硬化。预计NAFLD的发病率在未来将持续增加,且呈现低龄化趋势。”二次打击”假说认为NAFLD发展的病理机制主要归因于脂质代谢紊乱、氧化应激和细胞凋亡。肝脏的氧化应激反应影响肝细胞的正常功能,当活性氧的产生超过了抗氧化能力时,这些分子就会引起正常脂质代谢紊乱。虽然NAFLD的病理作用已被广泛研究,但其分子机制尚不清楚。目前,学者致力于运动干预NAFLD的研究,发现运动可诱导相关蛋白因子的表达,从而达到防治非酒精性脂肪肝的效果。美国肝病研究协会建议将体育锻炼作为治疗NAFLD的一种方法。因此,本文采用自主跑轮运动干预方式探究运动对NAFLD小鼠诱发进程中自主跑轮运动对小鼠肝脏脂质沉积、氧化应激水平、线粒体功能和细胞凋亡的作用机制,为运动干预NAFLD提供理论依据。研究方法:60CL13900浓度只8周龄雄性C57BL/6J (实验动物质量许可证号:SYXK(苏)2018-0027),购自江苏集萃药康科技有限公司,饲养在江苏农业科学院实验动物中心。小鼠一鼠一笼,参照国家啮齿类动物干饲料标准喂养饲料,自由进食、饮水,饲养环境在12/12h光/暗循环且通风良好光照自然条件下,室温在22±2℃,相对湿度在40%-58%,1-2天更换一次小鼠垫料。适应性饲养1周后随机分为两组,分别用普通膳食(normal diet,ND)和高脂肪、果糖和胆固醇膳食(High-fat,fructose and cholesterol,HFFC)饲养,HFFC膳食小鼠在饲养6周和10周后,各分出10只进行自主跑轮运动干预,其余在安静状态下继续进行HFFC膳食饲养。运动组小鼠每天在装有自主跑轮的笼中自由活动,利用磁感应累加计数器记录小鼠跑轮圈数,固定传感器于跑轮顶端,磁铁片装载于转轮顶端,当转轮旋转一圈后与传感器重合即累计1圈,计数频率可达10次/秒。隔日进行跑轮圈数的记录与清零,连续8周。饲养周期14周小鼠分为ND14组、HFFC14组和HFFC6+E8组,同样饲养周期18周小鼠分为ND18组、HFFC18组和HFFC10+E8组,每组各10只。末次训练结束后,恢复24小时测量体重并处死小鼠,取新鲜肝脏组织通过梯度离心法提取肝脏线粒体检测线粒体功能,液相氧电极检测线粒体呼吸控制率(respiratory control rate,RCR),活性氧检测试剂盒检测线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,利用JC-1探针通过流式细胞分析检测线粒体GW-572016细胞培养膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)等;取肝脏样本检测总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物歧化酶(SOD)和抗氧化物丙二醛(MDA)含量;免疫蛋白印迹法测定核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)、一氧化氮岐化酶(SOD1)、血红素氧合酶1(HO-1)、BCL-2相关蛋白X/B淋巴细胞瘤-2(Bax/Bcl2)等氧化应激及凋亡相关蛋白表达量水平和线粒体热休克蛋白70(mtHSP70)、线粒体热休克蛋白60(mtHSP60)、酪蛋白水解肽酶(ClpP)等线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein response,UPRmt)相关分子伴侣蛋白和蛋白酶的表达。数据用SPSS统计软件22.0进行统计分析。氧电极(Hansatech)检测肝脏线粒体呼吸控制率,O2view系统收集数据。流式细胞用流式细胞仪(ACEA Novo CyteTM)检测荧光强度,Novo Express TM软件进行分析。Western blotting结果采用Bio-Rad多色凝胶成像系统,图像分析软件Image Lab Software5.2分析,数据均用GraphPad Prism 8.0.2软件作图,各组间比较采用单因素方差分析,显著性水平选择P<0.05和P<0.01。研究结果:1)与普通膳食小鼠相比,14和18周HFFC膳食小鼠的体重和肝脏重量及肝指数均显著增加(P<0.05),且18周HFFC膳食小鼠的肝脏重量和肝指数较14周显著增高(Pstent graft infection<0.01);运动干预后,与HFFC18相比,HFFC10+E8组体重及肝指数显著降低(P<0.01);2)HFFC14组小鼠T-AOC、CAT和SOD的活性显著低于ND14组(P<0.05),过氧化物MDA含量显著升高(P<0.01),且HFFC18组小鼠肝脏T-AOC水平较HFFC14组显著降低(P<0.05),8周自主跑轮运动干预后SOD活性显著升高(P<0.01);与18周普通膳食小鼠相比,高脂肪、果糖和胆固醇膳食小鼠Nrf2和SOD1的蛋白表达水平均显著下降(P<0.05),而HO-1和Bax/Bcl2表达量显著增加(P<0.05),且HFFC18组较HFFC14组显著增加(P<0.05)。8周自主跑轮运动干预后,HO-1表达量显著增加(P<0.05),Bax/Bcl2显著下降(P<0.01);3)与ND18组相比,HFFC18组小鼠肝脏线粒体含量、RCR水平和高膜电位/低膜电位比例均显著降低(P<0.01),ROS水平显著升高(P<0.05),且较HFFC14组,HFFC18线粒体含量和RCR水平显著降低(P<0.01)、ROS水平显著升高(P<0.05),8周运动干预后小鼠肝脏线粒体含量和RCR水平较HFFC18组显著增多,ROS水平显著降低(P<0.01);4)与ND18相比,18周HFFC膳食组小鼠UPRmt蛋白mtHSP70、mtHSP60和ClpP表达量显著减少(P<0.05),且HFFC18组小鼠mtHSP70、mtHSP60和ClpP蛋白表达水平显著低于HFFC14组小鼠(P<0.05)。18周HFFC膳食小鼠经运动干预后,HFFC10+E8组小鼠mtHSP70和mtHSP60表达量显著增加(P<0.01)。研究结论:1)14周HFFC膳食使小鼠肝脏氧化应激水平增高,同时诱发mtUPR,而18周HFFC膳食导致小鼠肝脏抗氧化系统功能失调、肝损伤加重,线粒体功能受损,mtUPR作用被抑制;2)8周运动干预可显著改善18周HFFC膳食引起的肝脏损伤,上调肝脏抗氧化酶活性及相关基因表达量,提高线粒体功能,并促进mtUPR相关分子伴侣蛋白和线粒体蛋白酶表达,是防治NAFLD发展的有效干预措施。

目的 探讨自拟舒肝健中汤治疗肝胃郁热型幽门螺杆菌(Hp)阳性慢性萎缩性胃炎(CAG)的临床效果。方法选取四川省南充市中医医院2020年9月至2022年9月收治的112例肝胃郁热型Hp阳性CAG患者为研究对象，采用电脑随机抽签法将其分为对照组、观察组，各56例。对照组以四immunesuppressive drugs联疗法治疗，观察组在对照组基础上增加自拟舒肝健中汤内服。两组均以14 d为1个疗程，治疗2个疗程。比较两组临床疗效CL13900价格、Hp一次根除率及治疗前后中医症状评分、胃功能指标，观察治疗安全性。结果 观察组临床疗效优于对照组，Hp一次根除率高于对照组(P<0.05)。治疗后，两组胃脘痞闷、腹痛胀满、反酸嗳气、舌红苔黄评分及胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ、胃泌素-17水平均低于治疗前，且观察组低于对照组(P<0.05)。两组不良反应总发生率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 自拟Decitabine使用方法舒肝健中汤治疗肝胃郁热型Hp阳性CAG可改善患者中医症状和胃功能，提高效果和Hp根治率，安全性较好。

目的：基于网络药理学方法探讨无花果治疗原发性肝癌的作用机制，为进一步证实无花果治疗肝癌的实验及临床研究提供参考，同时为无花果食药产品的进一步开发提供理论依据。方法：通过Herb数据库获取无花果的主要化学成分及其靶点，根据ADME筛选中药活性组分；通过selleckchem GDC-0068Gencards、OMIM数据库获取原发性肝癌主要靶点，利用String平台进行蛋白质相互作用分析，构建PPI网络并进行分析；采用Cytoscape 3.8.0软件构建“无花果-化学成分-靶点”互作网络。结果：无花果治疗原发性肝癌的活性成分包括6-(2-甲氧基，顺-乙烯基)-7-甲基吡喃香豆素、N-甲基莲叶桐碱、7,10,13-十六predictive genetic testing碳三烯酸甲酯、甲基反亚油酸酯、佛手柑内酯、补骨脂素、苯甲醛等，核心靶点有SRC、MAPK1、MAPK3、STAT3、HSP90AA1、AKT1、PIK3CA、MAPK14、RELA、LCK等；无花果治疗原发性肝癌的生物学通路主要作用于神经活性配体-受体相互作用、钙信获悉更多号通路、MAPK信号通路等通路，其功能主要为调节蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性等。结论：本研究初步揭示了无花果治疗原发性肝癌的多成分、多靶点、多通路的作用机制，为无花果食药产品的进一步开发提供基础。

目的：探讨埃索美拉唑+阿莫西林克拉维酸钾+克拉霉素联合双歧杆菌四联活菌片治疗幽门螺杆菌(HpCOVID-19 infected mothers)相关性胃溃疡患者的临床疗效。方法：选取我院在2021年9月—2022年11月收治的Hp胃溃疡患者110例，按照随机摸球法分为A组和B组，各55例，B组行埃索美拉唑为主的三联疗法治疗，A组在B组三联疗法基础上增加益生菌治疗。记录2组患者治疗效果、副作用，治疗前、治疗4周后，临床症状评分值及胃肠道功能指标血清生长抑素(SS)、胃动素(MTL)水平。结果：两组患者溃疡愈合、症状缓解无统计学意义(P>0.05),A组H寻找更多p根除率高于B组，差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后，两组患者腹胀、反酸、嗳气及腹痛症状评分值及MTL水平均较治疗前降低(P<0.05),与B组相比，A组患者治疗效果降低，患者腹胀、反酸、嗳气及腹痛评分值均低于B组患者(P<0.05);两组患者血清SS水平均较治疗前升高(P<0.05),且A组患者高购买Taurine于B组(P<0.05)。A组患者副作用发生率与B组无统计学差异(P>0.05)。结论：与埃索美拉唑为主三联疗法单独治疗Hp相关性胃溃疡患者比较，联合益生菌效果更佳，临床症状及胃肠道功能均恢复情况更佳。

目的 分析不同人群、不同病情、不同病程的抑郁障碍患者中医证素分布特点。方法 纳入抑郁障碍患者127例，记录患者的一般人口学资料，包括年龄、性别等；记录患者的病情资料，包括病情程度、病程。采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评估患者抑郁症状，中医症状调查表评估中医症状，分析不同人群、不同病情、不同病程的抑郁障碍患者中医证素分布特点。结果 127例抑郁障碍患者中医证素主要有14个，其中病位类证素7个，病性类证素7个，病位类证素出现频selleck合成次由高到低为心、脾、肾、胃、肝、胆、营卫，病性类证素出现频次由高到低为火旺、气虚、阴虚、气郁、血虚、气逆、痰湿。男性心、肾、火旺证素出现频次最多，女性心、脾、气虚证素出现频次最多；青少年组病位类证素心、病性类证素气虚出现频率低于成年组，病位类证素肝、病性类证素气郁出现频率高于成年组；病程≥10年病位类证素脾出现CX-5461生产商频次较高，不同抑郁程度的病位类证素均以心、脾出现频次较多。结论 抑郁障碍中医证素在不同年龄、性别、病程、病情患者中的分布频次存在差异，中医治疗抑郁障碍时应考虑年龄、性别、病情及病程等因素concomitant pathology影响。

为分析原发性开角型青光眼（primary open-angle glaucoma,POAG）黏小管成形术后早期短暂性高眼压的发生率及危险因素，本研究纳入了本院顺利完成360°黏小管成GSK2118436使用方法形术的POAG患者。我们收集了以下数据：术后各随访时间点眼压（intraocular pressure,IOP），术后早期是否发生短暂性高眼压（定义：术后1周至3月内IOP>21 mmH g但能回落至≤21 mmH g）及术后一周最低IOP(IOPmin-1w)。根据是否发生术后早期短暂性高眼压，将其分为正常眼压组（normal IOP,NIOP）和短暂性高眼压组（high IOP,HIOP）。此外，我们也对术后早期短暂性高眼压的相关危险因素进行了分析。最终来自57位患者的57只眼纳入分析。他们的平均视野缺损值(mean defect, MD)为(-15.57±10.13) selleck EmpagliflozindB,IOP由术前TEMPO-mediated oxidation(29.43±10.27) mmHg显著降低至术后1年的(14.73±3.60) mmHg(P<0.01)。其中，20只眼发生HIOP(35.1%)。HIOP组的IOPmin-1w显著高于NIOP组（P<0.01），并与较低的1年完全成功率相关。本研究结果提示POAG中黏小管成形术后HIOP组患者可能IOPmin-1w较高，1年手术效果较差，且IOPmin-1w≥12 mmHg可能是HIOP发生的独立危险因素。

目的:探究胡黄连提取物通过miR-26a-5p/NF-κB通路影响缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激的作用。方法:通过缺氧/复氧(H/R)诱导H9C2细胞建立心肌细胞损伤模型,细胞分为空白对照组、模型组、胡黄连提取物低浓度(250μg/mL)组、胡黄连提取物中浓度(500μg/mL)组、胡黄连提取物高浓度(1 000μg/mL)组、miRNC组、miR-26a-5p组、anti-miR-NC+胡黄连提取物高浓度组、anti-miR-26a-5p+胡黄连提取物高浓度组。CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;Western Blot检测cleaved Caspase-3、Bax、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达;ELISA检测MDA、SOD、CAT水平;qRT-PCR检测miR-26a-5p表达。结果:与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率、MDA、p-NF-κB/NF-κB水平及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,细胞增殖能力、SOD、CAT水平及miR-26a-5p表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,胡黄连提取物可显著降低缺氧/复氧诱更多导的心肌细胞凋亡率及MDA、p-NF-κB/NF-κB水平和cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达,显著升高细胞增selleck殖能力、SOD、CAT水平及mi R-26a-5p表达(P<0.05)。抑制anti-miR-26a-5p可逆转胡黄连提取物对缺氧/复氧诱导的心肌细胞、凋亡和氧化应激的影响。结论:胡黄连提取物High-risk medications可能通过调控mi R-26a-5p/NF-κB通路抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激。

目的 基于网络药理学及体内实验探讨射麻止喘液治疗中性粒细胞型哮喘（NA）的分子机制。方法 （1）利用中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）、文献检索及Swiss ADME、Swiss Target Prediction数据库检索、筛选射麻止喘液的活性成分及其作用靶medicinal food点。利用OMIM、Gene Cards、Dis Ge NET及Drug Bank数据库检索、筛选NA疾病相关靶点。通过微生信平台对射麻止喘液活性成分作用靶点与NA疾病相关靶点取交集，得到射麻止喘液治疗NA的潜在作用靶点（共有靶点）。采用Cytoscape 3.8软件构建“中药-活性成分-潜在作用靶点”网络。通过STRING数据库建立潜在作用靶点蛋白互作（PPI）网络，使用内置Mcode插件分析获得核心靶点。使用Metascape平台对潜在作用靶点PUN30119化学结构进行基因本体（GO）、京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。（2）将BALB/C小鼠适应性喂养1周后，随机分为空白组、NA模型组、射麻止喘液低剂量组（2.5 g·kg~(-1)）、射麻止喘液高剂量组（10 g·kg~(-1)）、地塞米松对照组（1 mg·kg~(-1)）；通过腹腔注射致敏剂[鸡卵清白蛋白（OVA）+弗氏完全佐剂（CFA）]并通过雾化吸入激发的方法复制NA小鼠模型，第0、7、14天分别腹腔注射OVA+CFA(20μg OVA+75μg CFA,0.3 m L）致敏，第21～30天采用5%OVA混悬液雾化激发（每次8 m L，每次雾化时间40 min，每天1次）；雾化激发前1 h各组灌胃给药，地塞米松对照组腹腔注射给药，每天1次。采用HE染色法观察小鼠肺组织病理变化；ELISA法检测肺泡灌洗液中IL-8含量；RT-q PCR法检测肺组织中NLRP3、CXCR2 m RNA表达水平；免疫组化法检测肺组织中p-m TOR蛋白表达水平。结果 （1）共筛选得到射麻止喘液活性成分作用靶点826个，NA疾病相关靶点154个，取交集后得到射麻止喘液治疗NA的51个潜在作用靶点（共有靶点）。通过“中药-活性成分-潜在作用靶点”网络分析得到槲皮素、木犀草素、山柰酚、豆甾醇、柚皮素等关键活性成分。通过对潜在作用靶点的PPI网络分析得到29个核心靶点，包括AKT1、IL6、TNF、EGFR、NLRP3、RELA、MIF、CXCR2、VEGFA等。GO功能富集分析得到882个生物学过程条目、33个细胞组分条目、61个分子功能条目；KEGG通路富集分析得到142条信号通路，主要涉及TNF信号通路、甲型流感信号通路、Toll样受体通路、MAPK信号通路、m TOR信号通路等。（2）动物实验结果：与空白组比较，NA模型组小鼠的气道黏膜损伤明显，结构紊乱，有大量炎性细胞浸润，黏膜充血、水肿，肺泡壁明显增厚，肺泡腔缩小；肺泡灌洗液中的炎症因子IL-8水平明显升高（P<0.05）；小鼠肺组织NLRP3、CXCR2 m RNA表达显著上调（P<0.01),p-m TOR蛋白表达水平明显升高。与NA模型组比较，射麻止喘液Galunisertib体内实验剂量低、高剂量组小鼠肺组织支气管上皮细胞结构排列可见少许紊乱，气管及血管周围有少量的炎性细胞浸润，支气管黏膜充血水肿明显减轻；小鼠肺组织CXCR2 m RNA表达显著下调（P<0.01),p-m TOR蛋白表达水平明显降低。射麻止喘液高剂量组小鼠肺泡灌洗液中的IL-8水平明显降低（P<0.05）；射麻止喘液低剂量组小鼠肺组织NLRP3m RNA表达明显下调（P<0.05）。结论 射麻止喘液对NA的治疗作用可能是通过槲皮素、木犀草素、山柰酚等关键活性成分，作用于NLRP3、CXCR2等核心靶点，调控TNF信号通路、MAPK信号通路、Toll样信号通路、m TOR等关键信号通路来实现的。

研究背景:肾纤维化(RF)是几乎所有慢性肾脏疾病(CKD)发展到终末期的病理基础,肾活检可明确诊断RF,且是唯一方法,但此方法具有侵入性,对终末期肾病患者的风险大,可导致出血问题,因此,需寻找更容易获得的特异性肾纤维化生物标志物;其次,尽管在了解该疾病的病因方面取得了重大进展,但肾纤维化的基本机制尚未得到充分研究。STATs的激活可能是肾损伤和瘢痕的重要标志物,许多进行性肾脏疾病以持续炎症为特征,响应和转导炎症信号的主要途径之一是JAK-STAT途径,这说明需进一步研究JAK-STAT通路与RF发病机制的关系。孙伟教授将RF的病机精简概括为“肾虚湿瘀”,基于“护肾延衰”的理念,开创“益肾清利活血”法。中药单体丹参酮ⅡA是活血祛瘀中药丹参的主要成分,具有“清利活血”之效,已证实对肺、肝等脏腑的纤维化均有治疗作用,但于治疗RF机制尚不明晰,需进一步探究。研究目的:1.揭示肾纤维化免疫浸润相关诊断基因;2.阐明丹参酮ⅡA改善RF的作用;3.揭示丹酮ⅡA对JAK2-STAT3通路调控延缓RF的分子机制。研究方法:1.生信分析:差异表达基因(DEG)通过“limma”R包获得,通过CIBERSORT分析计算每个样品中免疫细胞的富集评分,采用加权基因共表达网络分析(WGCNA)分析和ImmPort数据库发现差异浸润的免疫细胞相关模块和基因,通过MCODE插件鉴定蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络的中枢基因,采用受试者工作特征(ROC)曲线验证HuMulti-functional biomaterialsb基因的诊断价值,并利用非编码RNA(miRNA)-Hub基因和转录因子(TF)-hub基因调控网络来解释Hub基因的调控机制,最后检测Hub基因在验证集中的表达。2.网络药理学研究:首先使用中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)检索丹参的有效成分及靶点,并利用UniProt数据库规范靶点蛋白,然后利用GeneCards、OMIM、NCBI为数据库检索人类疾病靶点,与丹参靶点取交集获取丹参治疗RF的可能作用靶点。接着利用Cytoscape软件构建“药物-成分-靶点”网络,通过STRING数据库构建PPI网络并筛选关键靶点,通过仙桃生信分析网站进行丹参与RF共同靶点集的基因本体(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。最后,获取丹参发挥作用的主要化学成分,对主要成分进行GO、KEGG富集,以明确主要成分作用靶点与发挥作用的核心机制。3.实验研究:离体实验研究中,应用马兜铃酸(AAI)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞损伤与纤维化,镜下观察细胞形态,并用MTT法检测AAI造模与AAI+丹参酮ⅡIA干预后的细胞存活率。在体实验研究中,采用AAI腹腔注射建立小鼠肾脏损伤与纤维化模型,造模前与进行药物干预后,观察小鼠一定时间内的一般情况如毛发、体态、体重等。通过收集小鼠尿液与血液,检测尿蛋白、血肌酐、尿酸和尿素氮以评估小鼠肾功能的损伤程度,并通过HE和Masson染色观察小鼠肾脏的病理AY-22989说明书改变与纤维化程度,采用Western blot(WB)技术检验纤维化指IACS-10759体内实验剂量标α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)与核心通路STAT3、JAK2的磷酸化程度。结果:1.生信分析:在42个IFTA样本和99个正常对照组样本之间发现了 2692个DEG。CIBERSORT分析表明,9个细胞的浸润存在显著差异,以CD4记忆激活T细胞和γδT细胞最显著。从基于ImmPort数据库的模块基因中获得161个DEIG,之后,通过PPI网络鉴定出 10 个 Hub 基因,分别是 CD40,TLR2,PTPRC,ICAM1,IL1B,CCL5,STAT1,CD86,CD8A和CCR5,尤以CCL5关系最密切,它们均在外部数据集得到验证。最后,从miRNA-Hub基因网络和TF-hub基因网络分析了 Hub基因的调控机制,65个TFs中STAT1和STAT3是JAK-STAT信号通路的重要组成部分。因此,推测γδT细胞通过CCL5趋化因子途径在RF的发生和发展中起重要作用,并且JAK-STAT通路具有重要意义。2.网络药理学:丹参治疗RF是多种成分、多条途径、多个靶点的网络状调控机制。对丹参与RF共靶点富集分析发现,多条与炎症和炎症因子相关通路、细胞氧化应激相关通路被富集,富集结果与RF特征一致。对丹参主要成分丹参酮ⅡA富集后,核心靶点是C型蛋白酪氨酸磷酸酶受体(PTPRC),KEGG得到TCR通路在RF中的重要性。由此,推测丹参酮ⅡA主要通过PTPRC,使活化的物质去磷酸化,以发挥抗RF作用,丹参发挥抗RF的作用与免疫密不可分。3.实验研究:离体研究:AAI显著降低HK-2细胞存活率,丹参酮ⅡA干预后能维持HK-2细胞形态且提高细胞存活率,并呈剂量依赖性。在体研究:对m于AAI腹腔注射诱导的小鼠肾脏损伤与RF模型,丹参酮ⅡA能显著保护小鼠肾脏功能,尿蛋白、血肌酐、尿酸、尿素氮水平上升,且病理损伤及纤维化程度减轻,尤以高剂量组明显。丹参酮ⅡA还能使上调的pJAK2、pSTAT3、α-SMA蛋白的表达下降,高剂量组尤是。结论:1.研究确定了 10个基因作为RF的Hub基因,γδT细胞通过CCL5趋化因子途径在RF中起重要作用,并发现Hub基因与STAT通路关系密切。这些基因和γδT细胞可作为RF诊断的潜在生物标志物;2.丹参酮ⅡA的主要靶点是PTPRC,富集通路是TCR,它们与JAK-STAT通路关系密切;3.AAI腹腔注射能够建立肾脏损伤与RF动物模型,丹参酮ⅡA在体内外具有抗RF的作用;4.丹参酮ⅡA抗RF的潜在分子机制是调控JAK2-STAT3通路。