ALK抑制剂

本研究共采集大连和丹东地区2016—2020年急性甲肝患者血清标本129份，提取甲型肝炎病毒（Hepatitis A virus,HAV）的RNA后，以获悉更多VP1和VP3区序列作为特异性基因片段进行巢氏PCR扩增反应，将阳性PCR产物进行基因测序，并与Genbank中下载的26条参考序列比对构建系统进化树，分析不同编码区样本序列核苷酸和氨基酸的一致性，并确定基因型。实验结果显示，30岁以上HAV阳性患者占比86.7%(104/120)，男性患者（63.3%）多于女性患者（36.7%）。从血清标本中成功获得72条VP1区序列及84条VP3区序列，序列均与日本HAV序hepatolenticular degeneration列的核苷酸序列一致性最高（VP1区：97.45%～99.79%;VP3区：97.27%～99.76%），系统进化树显示甲型肝炎病毒流行株均属于基因ⅠA获悉更多亚型；序列在VP1区和VP3区氨基酸一致性分别为99.36%～100%和99.29%～100%，均无氨基酸变化。结果表明，大连和丹东地区2016—2020年HAV流行株基因型均为ⅠA型，与日本HAV流行株属于同一基因型。本研究为预防控制大连和丹东地区的甲型肝炎流行提供了分子流行病学依据，并为辽宁地区HAV溯源研究奠定基础。

本研究共采集大连和丹东地区2016—2020年急性甲肝患者血清标本129份，提取甲型肝炎病毒（Hepatitis A virus,HAV）的RNA后，以获悉更多VP1和VP3区序列作为特异性基因片段进行巢氏PCR扩增反应，将阳性PCR产物进行基因测序，并与Genbank中下载的26条参考序列比对构建系统进化树，分析不同编码区样本序列核苷酸和氨基酸的一致性，并确定基因型。实验结果显示，30岁以上HAV阳性患者占比86.7%(104/120)，男性患者（63.3%）多于女性患者（36.7%）。从血清标本中成功获得72条VP1区序列及84条VP3区序列，序列均与日本HAV序hepatolenticular degeneration列的核苷酸序列一致性最高（VP1区：97.45%～99.79%;VP3区：97.27%～99.76%），系统进化树显示甲型肝炎病毒流行株均属于基因ⅠA获悉更多亚型；序列在VP1区和VP3区氨基酸一致性分别为99.36%～100%和99.29%～100%，均无氨基酸变化。结果表明，大连和丹东地区2016—2020年HAV流行株基因型均为ⅠA型，与日本HAV流行株属于同一基因型。本研究为预防控制大连和丹东地区的甲型肝炎流行提供了分子流行病学依据，并为辽宁地区HAV溯源研究奠定基础。

目的:内镜下静脉曲张治疗(endoscopic variceal treatmUrban biometeorologyent,EVT)是肝硬化患者中高危食管胃底静脉曲张和急性静脉曲张出血治疗的主要治疗措施。质子泵抑制剂(proton pump inhibitor,PPI)广泛用于各种胃酸分泌过量的相关疾病。然而,PPI对EVT术后并发症的影响,尤其是消化道出血(gastrointestinal bleeding,GIB),尚存在争议。本研究旨在评估住院期间术后使用PPI对肝硬化患者EVT术后并发症的影响。方法:本研究纳入了2016年1月至2020年6月期间入住北部战区总医院消化内科的肝硬化患者,纳入患者均由一位主治医师诊治并在住院期间接受了EVT手术治疗。采用Logistic回归分析探讨术后使用PPI对住院期间EVT术后并发症发生的影响。计算优势比(odds ratio,OR)和95%置信区间(confidence interval,CI)。结果:本研究最后纳入143例寻找更多肝硬化患者。EVT术后GIB和其他术后并发症的发生率分别为4.90%和46.85%。总体分析结果显示,术后使用PPI并未显著降低EVT术后GIB(OR=0.525,95%CI=0.113-2.438,P=0.411)或其他术后并发症(OR=0.804,95%CI=0.413-1.565,P=0.522)的发生风险。根据入组时间、EVT术后PPI的使用种类和给药途径、EVT术前PPI的使用、EVT术后血管活性药物的使用、EVT的适应证(治疗、一级预防或二级预防)以及门静脉系统血栓、腹水和肝细胞肝癌的存在进行亚组分析,结果表明术后使用PPI对EVT术后GIB或其他术后并发症的发生仍无显著影响。结论:不推荐肝硬化患者在BaricitinibEVT术后常规使用PPI以预防住院期间EVT术后并发症的发生。

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)激动剂GW501516对低氧诱导的肺动脉内皮细胞（PAECs）损伤的影响及机制。方法 通过检测PAECs的相对存活率，观察GW501516的细胞毒性作用；采用Western blot法检测PPARδ蛋白的表达水平。建立低氧条件下PAECs损伤的细胞模型，以抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）为阳性对照，通过检测细胞凋亡率、细胞活力、乳酸脱氢酶（LDH）活性、活性氧（ROS）水平，考察GW501516对细胞损伤及ROS产生的影响。以核因子E2寻找更多相关因子2(NInfection raterf2)激活剂富马酸二甲酯（DMF）为阳性对照，在低氧条件下通过GW501516和（或）Nrf2抑制剂ML385孵育PAECs，以细胞损伤（细胞凋亡、细胞活力、LDH活性）及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、ROS水平及Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、裂解型胱天蛋白酶3(C-caspase-3)蛋白的表达水平，探讨GW501516对低氧致PAECs损伤的作用机制。结果 低氧刺激能够抑制PAECs内PPARδ蛋白的表达（P<0.05），而GW501516可在低氧条件下促进PPARδ蛋白的表达且无明显的细胞毒性作用。GW501516可抑制PAECs凋亡，提高细胞活力，降低LDH活性及ROS水平。GW501516可通过激活Nrf2通路，上调PAECs内HO-1蛋白表达水平及SOD、GBaricitinib采购Px、CAT水平，降低MDA、ROS水平（P<0.05），而Nrf2抑制剂ML385能够逆转GW501516的上述作用（P<0.05）。GW501516下调C-caspase-3蛋白表达，抑制低氧诱导的PAECs损伤的作用与Nrf2激活剂DMF相似（P<0.05），而Nrf2抑制剂ML385能够逆转GW501516抑制PAECs损伤的作用（P<0.05）。结论 GW501516可通过抑制氧化应激来减轻低氧诱导的PAECs损伤，其机制与激活Nrf2有关。

目的：研究异泽兰黄素（Eupatilin,Eptl）对大鼠酒精戒断（Ethanol withdrawal,EtOHWI）焦虑样行为的改善作用及其与腹侧海马（Ventral hippocampus,vHippo）相关机制。方法：将32只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组，分别为生理盐水对照组、EtOHWI模型组、Eptl低剂量治疗组和Eptl高剂量治疗组，每组各8只。EtOHWI模型组、Eptl低、高剂量治疗组每天1次腹腔注射3 g/kg乙醇（Ethanol,EtOH），连续28 d，戒断3 d制备大鼠EtOHWI模型，生理盐水对照组腹腔注射等容积生理盐水。在3 d戒断期间，Eptl低、高剂量治疗组分别每天1次灌胃10和30 mg/kg Eptl，第3次给药30 min后，利用旷场（Open filed,OF）和高架十字迷宫（Elevatedplusmaze, EPM）实验对各组大鼠进行焦虑样行为学检测。利用ELISA检测血清皮质酮（Coritosterone,CORT）浓度、vHippo组织中GABA水平；利用实时荧光定量PCR检测vHippo组织中谷氨酸脱羧酶67(GAD 67)mRNA相对表达量；利用Western blot(WB)检测vHippo组织中GABAaRα1(GABAa receptor α1,GABAaRα1)、GABAaRα2、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达；利用试剂盒检测vHippo组织中MDA、T-SOD、CAT、GSH以及IL-6和TNF-α的含量。利用免疫荧光检测技术观察HT22细胞的核中Nrf2蛋白水平。结果：与EtOHWI模型组相比，Eptl低、高剂量治疗组大鼠在OF中央区活动距离极显著升高（P<0.01），分别为70.62%和124.21%，活动时间显著升高（P购买Tofacitinib<0.05或P<0.01），分别为251.75%和selleck Rapamycin371.62%, EPM的开放臂进入次数百分比显著升高（P<0.05或P<0.01），分别为110.33%和207.32%，滞留时间百分比显著升高（P<0.05或P<0.01），分别为99.56%和184.18%；血清CORT含量极显著降低（P<0.01）;vHippo组织中GABA含量和GAD67mRNA表达显著升高（P<0.05或P<0.01）;GABAaRα1、GABAaRα2、Nrf2和HO-1蛋白表达显著增多（P<0.05或P<0.01）;MDA水平极显著降低（P<0.01），而T-SOD、CAT和GSH的活性或水平显著升高（P<0.05或P<0.01）;IL-6、TNF-α含量显著降低（P<0.05或P<0.01）。体外实验结果显示，与空白对照组相比，200μmol/L H_2O_2刺激的HT22AMP-mediated protein kinase细胞核中Nrf2的水平极显著增多（P<0.01），但30μmol/L Eptl预处理显著抑制了Nrf2水平的增多（P<0.05）。结论：Eptl具有改善大鼠EtOHWI焦虑样行为的作用，其机制可能通过Eptl的抗氧化和抗炎作用而调节EtOHWI大鼠vHippo的GABAaR传递紊乱所介导。

伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)在我国猪群中持续流行,是一种对养猪业危害巨大的病原。2011年biomimetic drug carriers,PRV变异株在我国出现,导致PRV在中国大面积爆发,给我国养猪业带来了巨大经济损失。已有研究证明黄酮类化selleck Regorafenib合物和咔唑类化合物具有广谱抗病毒活性。其中黄芩苷、槲皮素、橙皮苷、儿茶素等大量黄酮类化合物的抗病毒作用都有较为深入的研究。本研究在细胞水平评价了黄芩苷和咔唑类化合物这两类天然植物提取物抗PRV的生物活性,为PRV抗病毒药物的开发打下了基础。具体研究内容如下:(1)本研究首先制备了PRV US3和EP0的多克隆抗体,并用于后续试验。本研究在细胞水平评价了黄芩苷对PRV对细胞的毒性和抑制PRV复制的效率:用不同浓度的黄芩苷处理PK-15细胞,用CCkFerrostatin-1说明书-8试剂盒测得50%细胞毒性浓度(CC_(50))为152.9μM;在PRV感染的过程中添加不同浓度的黄芩苷,在感染后24 h测定PRV的毒价,结果显示黄芩苷能够显著抑制PRV的体外复制,并且呈现剂量依赖性;通过毒价的测定计算出黄芩苷的半数最小抑制浓度(IC_(50))为24.02μM,选择性指数SI=6.37。用Western Blot检测不同浓度的黄芩苷在感染PRV后6 h,9 h,12 h,24 h的PRV US3的表达量,结果显示,黄芩苷显著抑制PRV US3的表达,进一步证明黄芩苷的抗病毒活性具有剂量依赖性。有研究显示黄芩苷对病毒具有灭活作用。将PRV和黄芩苷(96μM)在37℃条件下孵育3小时,与DMSO对照组相比,黄芩苷使得PRV的毒价从(1.38±0.6)×10~8TCID_(50)/m L降低至(4.27±0.56)×10~7TCID_(50)/m L,说明黄芩苷对PRV有显著灭活作用。本研究进一步评价了不同加药时间对黄芩苷抗PRV作用的影响。首先,在对黄芩苷不同给药时间的考察中,用96μM黄芩苷提前处理PK-15细胞3 h或者6 h,再使用PRV感染细胞,与DMSO对照组比,提前处理细胞3 h或者6 h均能显著抑制PRV的复制。在延迟给药实验中,黄芩苷加药时间分别是感染后0 h,1 h,3 h,6 h,在PRV感染后24 h收样测定毒价,结果显示,感染后0 h,1 h和3 h加药能显著抑制PRV的复制,感染后1 h和3 h加药的抑制作用显著弱于感染后0 h加药,感染后6 h黄芩苷对PRV的复制无抑制作用。(2)本研究初步评价了咔唑类化合物对PRV的体外抑制的效果:检测18个咔唑类化合物对PRV的抑制效果和细胞毒性,结果显示No.4,No.10,No.16化合物对PRV的抑制效率均在80%以上,显著高于其他15个咔唑类化合物。这三个化合物(No.4,No.10,No.16)的半数细胞毒性浓度分别为33.12μM,62.42μM和42.98μM。在此基础上,我们进一步评价了No.4,No.10,No.16化合物对PRV的半数抑制浓度和选择指数,其IC_(50)分别为9.86μM,11.08μM和12.79μM,SI分别为3.36,5.63和3.36,结果显示这三个化合物均能有效抑制PRV的复制,且安全性良好,具有进一步开发的潜力。综上所述,本研究显示植物提取物黄芩苷和咔唑类化合物能够有效抑制PRV在体外的复制,并且证明黄芩苷抑制PRV复制存在多种机制——既能够直接灭活病毒,也能够在感染早期,通过调控宿主基因来抑制病毒复制。本研究为植物提取物中抗PRV活性物质的筛选和开发更新的信息和线索。未来,有必要对这两类药物在动物体内的有效性展开评估。

细菌黏附和生物膜形three dimensional bioprinting成导致的植入式医疗器械相关感染(DAIs)已经威胁到患者的健康和生命。多功能抗菌聚合物涂层因其化学和拓扑结构的多样性、可控聚合方法的发展以及良好的可加工性而获得越来越多的关注。具有防污杀菌性能的抗菌聚合物涂层展示了解决DAIs问题的巨大潜力,但同时提高表面杀菌和防污性能仍具挑战。针对这一挑战,本论文提出制备具有亲水主链和阳离子侧链的刷形聚合物涂层。论文主要内容如下:在第一章中,首先论述了 DAIs问题的普遍性和产生的原因,其次介绍了抗菌表面的类型和解决DAIs的国内外研selleck化学究进展。在第二章中,设计了一种葡聚糖(Dextran)为主链,伪两性离子为侧链的刷形聚合物涂层(Dex-KE),同时制备了具有疏水主链伪两性离子侧链的刷形聚合物。通过聚多巴胺(PDA)和多巴胺(DA)的共沉积作用改性了聚二甲基硅烷(PDMS)表面。通过傅里叶红外光谱仪(FTIR)、光电子能谱仪(XPS)、水接触角测量仪(WCA)、扫描电子显微镜(SEM)等分别表征了改性表面的分子结构、元素组成亲疏水性和表面形貌。生物学实验表明亲水主链刷形聚合物比疏水主链的刷形聚合物显示出更强的的表面抗菌性能。此外,小鼠皮下植入实验结果表明,Dex-KE涂层具有优异的抗组织感染性能和组织相容性。在第三章中,制备了侧链含苯丙selleckchem LXH254氨酸疏水单元的刷形聚合物(Dex-KEF)并利用多巴胺沉积技术制备了抗菌涂层。研究结果表明,疏水单元的加入提高了涂层的初始杀菌效率和细胞黏附性能。在第四章中,对当前的工作进行了概括和总结,提出了当前设计存在的问题和可能的解决办法,并且对未来的发展进行了展望。总的来说,本文利用可控开环聚合和还原反应合成了一系列不同组分和链长的端基含巯基的聚氨基酸,通过迈克尔加成反应连接到由马来酸修饰的葡聚糖主链。研究了主链的亲疏水性、侧链接枝度、链长度和疏水基含量等结构参数对抗菌性能的影响,丰富了抗菌聚合物涂层的种类,并为抗菌表面的设计和制备提供了新思路。

【目的】通过对青钱柳全基因组序列的分析，开发基因组SSR分子标记；初步尝试KD025半抑制浓度构建19个青钱柳优良药用无性系的DNA分子身份证，为后续种质资源评价、遗传多样性和种质鉴定提供技术支撑。【方法】利用MISA（Microsatellite Identification Tool）软件对青钱柳全基因组进行SSR位点搜寻、筛选、识别及富集分析，采用Primer 3.0进行SSR引物设计；用重复性和稳定性高的SSR标记构建青钱柳无性系的识别系统。【结果】（1）从全基因组中共检测出89741个SSR位点，SSR位Vorinostat点的发生频率为62.07%。（2）基因组SSR位点中单核苷酸重复单元比例最高，占总SSR位点的62.67%；六核苷酸重复单元比例最低，占0.15%；SSR位点的重复基序大多以（A/T）n为主。（3）单核苷酸和二核苷酸重复类型的SSskin infectionR位点基序重复次数集中在6～16次；随重复次数增加，各SSR位点重复类型出现的频率均呈下降趋势。（4）基因组SSR序列长度介于10～476 bp，不同类型重复单元的SSR序列长度存在变异性；随着重复次数的增加，SSR序列出现的频率整体呈下降趋势。（5）利用Primer 3.0成功设计出78285对SSR引物；合成的377对中有75对引物可扩增出多态性条带；用5对单碱基重复的多态性SSR引物分析19个药用无性系，构建出无性系的二维码DNA分子身份证。【结论】青钱柳基因组SSR位点出现频率高，位点种类丰富，可为种质资源评价及指纹图谱的构建提供丰富的候选分子标记。

目的 探究M2型巨噬细胞外泌体对宫颈癌细胞迁移和侵袭以及血管拟态形成能力的影响及机制。方法 提取M0和M2型巨噬细胞所分泌的外泌体(M0 exo和M2 exo),宫颈癌细胞SiHa、C33a以及血管内皮细胞HUVEC均分为PBS组、M0 exo组、M2 exo组，Transwell小室检测各组SiHa和C33a细胞迁移和侵袭能力，小管形成实验检测各组HUVEC细胞血管拟态生成能力，Western blot检测各组SiHa、C33a和HUVEC细胞PI3K/AKT信号通路激活情况。结果 所提取的M0 exo和M2 exo符合外泌体的形态特征，并且表达外泌体autobiographical memory标志蛋白CD9、CD81、TSG101。相比于PBS组，M2 exo组SiHa和C33a细胞迁移和侵袭数增加，PI3K和AKT磷酸化水平提高(P<0.001),而M0 exo组与PBS组差异无统计学意义(P>0.05)。相比于PBS组，M2 exo组HUVEC细胞血管拟态生成增加，PI3K和AKT磷酸化水平均增加(P<0.001)Liraglutide浓度,而M0 exo组与PBS组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 M2型巨噬细胞外泌体通过激活PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌细胞的转移能力以及HUVECBafilomycin A1核磁细胞血管拟态生成。

靶向递送材料的开发在肿瘤治疗领域中被认为是提高疗效和减少副作用的有前途的策略。适配体在药物研发和临床中具有广阔的应用前景,可以被用作一类新的靶向配体材料。针对目前肿瘤膜蛋白标志物的特异适配体非常有限,及靶向递送小分子药物困难的挑战,本文聚焦于筛选与特定靶标膜蛋白结合的适配体,并将其用于向癌细胞靶向递送小分子药物,从而提高药物的靶向性和治疗效果,同时减少对健康组织的损害。本研究以构建的稳定高表达靶蛋白的工程化细胞系为筛选目标,使用Cell-SELEX技术筛选靶向CD133和Trop2的高特异性和亲和力的适配体,这两种肿瘤特异膜蛋白在各种类型的癌细胞中均呈现高表达;获得优化的适配体后,将之与小分子药物结合,制备出具有肿瘤靶向性的治疗材料。本文的主要研究内容如下:1.CD133是诸如结肠癌等多种肿瘤的重要的生物标志蛋白,是肿瘤诊断和靶向肿瘤干细胞治疗策略极具吸引力的靶点之一。本项研究基于指数富集的配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)筛选与CD133特异结合的DNA适配体,使用稳定高表达CD133膜蛋白的工程化细胞系作为筛选靶标,通过10轮Cell-SELEX,获得与CD133高表达工程化细胞系具有纳摩尔级亲和力的DNA适配体;且获得的适配体能与各种类型的过表达CD133的肿瘤细胞系特异地结合。新发现的DNA适配体具有用作CD133相关细胞的鉴定和疾病诊断的分子工具的潜力,也可以用于靶向CD133的治疗策略的开发。将CD133适配体负载化疗药物阿霉素Dox将其递送至结肠癌细胞,从而创建了一种新型靶向递送材料。适配体Cs5与阿霉素形成的嵌合体对高表达CD133的结肠癌细胞具有优异的靶向能力,能够选择性地杀伤结肠癌细胞,同时在体内外都表现出较好的肿瘤杀伤效果,且对正常细胞和组织具有较低的毒性。由于CD133在多种类型的肿瘤中均呈现高表达,CD133适配体这一新型靶向配体材料可以将药物精准递送至肿瘤细FG-4592细胞培养胞,有望在降低对正常细胞及组织损害的情况下,增强疗效,为开发更有效的肿瘤治疗方案提供了新的思路。2.Trop2是一种在广泛恶性肿瘤中均呈现高表达的跨膜蛋白,也代表了结肠癌有前景的新治疗靶点。本研究通过基于稳定高表达Trop2的工程化细胞为靶标的Cell-SELEX技术筛选Trop2特异性DNA适配体,经表征优化获得Trop2适配体后,将其与高毒性药物美登素衍生物DM1偶联以构建结肠癌靶向材料。适配体与药物的结合策略多数是利用传统的化疗药物阿霉素通过化学偶联或嵌入到适配体上,适配体VX-661与其它剧毒小分子化合物连接的研究相对较少。适配体Apt20s2与DM1化学偶联产生了高效的细胞毒性剂,对结肠癌细胞HT29产生较强的细胞毒性作用而对正常肠上皮细胞HIEC的生长存活影响较小。经体内实验表征,适配体与DM1的偶联体可以抑制人结肠癌异种移植小鼠肿瘤模型的肿瘤生长,且对DM1产生的肝脏毒性具有相对减轻的效果,表明基于Trop2适配体的新型肿瘤靶向材料具有广泛的应用前景。综上所述,本研究通过基于工程化细胞的Cell-SELEX技术筛选获得了具有高Symbiotic relationship特异性和高亲和力的靶向CD133和Trop2的适配体;并将这两种靶向配体分子分别与小分子药物结合,从而将小分子药物精确地靶向递送到结肠癌细胞中,实现了对肿瘤细胞高效、精准地杀伤。本研究为肿瘤精准治疗领域的发展提供了新的分子工具。