ALK抑制剂

西伯利亚白刺(Nitraria sibirica Pall.)是蒺藜科(Zygophyllaceae)白刺属(Nitraria L.)落叶灌木,属典型的盐生植物,也是荒漠生态MRTX1133采购系统典型植被。其具有较强抗旱、耐寒、耐瘠薄、抗风沙和极强耐盐碱特性,同时其果实、叶片具有很高的营养、药用和饲用价值,是生态效益与经济效益兼得的“黄金”树种。然而,在分子水平上对其耐盐机制的研究还处于初始阶段,这限制了其耐盐优势的开发利用。因此,本研究以西伯利亚白刺为试验材料,以300 mmol·L~(-1)Na Cl处理一年生实生苗,取叶片进行转录组测序。首先基于Pacbio测序获得其全长转录本,利用Trans Decoder软件预测CDS序列,并通过6大数据库对转录本进行注释;其次利用De Seq2对转录本进行差异分析,筛选差异基因;最终利用WGCCP-456773化学结构NA筛选耐盐关键基因,并将连通度前10%且在未报道基因中表达量最高的关键基因NsRabE1c转入拟南芥(Arabidopsis thaliana)进行功能验证。主要结论如下:(1)过滤掉不完整的CG,共获得1,030,629个全长非嵌合读数(FLNC)。去除冗余和聚类后,得到全extra-intestinal microbiome长转录本89,017个(平均长度2721.43 bp,N50 3009 bp,Q30值98%)。共预测了86,482个CDS序列,其中4000个不含CDS的基因可能是小RNA和t RNA。41,724个转录本注释于6个数据库(GO、KEGG、NR、Swissport、Tr EMBL和egg NOG),84,632个转录本至少在一个数据库中被注释。大量的基因被注释到“信号转导”、“分泌和囊泡运输”、“刺激反应”、“代谢过程”、“细胞器”、“转录因子活性”和“碳水化合物代谢”等通路中。(2)差异表达分析获得6,561条盐处理与对照相比表达量超过2倍的差异基因(|log2FC|≥1,FDR<0.05)和756条表达量超过16倍的差异基因(|log2FC|≥4)。GO富集分析发现,很多单基因富集到“应激反应”、“过氧化氢响应”、“离子结合”、“细胞通讯”、“生长”、“碳水化合物代谢过程”、“细胞壁组织或生物发生”、“光合作用”和“多糖代谢过程”等通路中。KEGG富集分析发现,有大量单基因富集到“磷脂酰肌醇信号系统”、“淀粉和蔗糖代谢”、“碳代谢”、“过氧化物酶体”、“MAPK信号通路植物”和“植物激素信号转导”等通路中。(3)WGCNA分析发现西伯利亚白刺通过调控离子平衡、调控渗透应激、清除活性氧、改善细胞壁结构和增强信号转导等途径缓解盐胁迫。共筛选出66个连通度前10%的基因,34个已在其它作物中得到验证。(4)NsRabE1c全长序列为1108 bp,CDS区为651 bp,共编码216个氨基酸。分析其进化关系发现与NsRabE1c同源性较高的物种是小果咖啡。亚细胞定位分析发现NsRabE1c在西伯利亚白刺中定位在细胞核和细胞质中。(5)NsRabE1c过表达拟南芥(OE)在盐胁迫情况下较突变体拟南芥(atrabe1c)和野生型拟南芥(Col-0)种子萌发时间早,幼苗生长速率快,根长最长,且体内的K~+含量远远大于atrabe1c和Col-0。通过对NsRabE1c在西伯利亚白刺中表达量的测定,发现NsRabE1c表达量在施盐后1-4 h(生长停滞期)表达量下降,在6-24 h(生长恢复阶段)表达量大幅度上升。以上结果表明,NsRabE1c可提高K~+含量促进西伯利亚白刺的生长发育以此来调控盐胁迫。(6)NsRabE1c过表达拟南芥(OE)在盐胁迫下的长势较突变体拟南芥(atrabe1c)和野生型拟南芥(Col-0)差,萌发率、根长和存活率也较低。OE在施加盐后叶片中Na~+含量快速上升,而K~+含量逐渐下降,K~+/Na~+比率下降,严重破坏了K~+/Na~+平衡;atrabe1c在施加盐后叶片中Na~+含量变化不大,而K~+含量在逐渐升高,K~+/Na~+比率升高。以上结果表明,NsRabE1c通过降低K~+/Na~+比降低植株的耐盐性。

胃癌不仅是近几年最常见的癌症之一,更是致死率极高的癌症之一。但是由于早期胃癌无明显的症状,筛查率较低,导致患者确诊已是胃癌晚期,胃癌治疗效果差,愈合性低,存活率低。因此,早诊断,早治疗对胃癌患者具有极大的意义。此外,核酸适配体作为化学抗体,因为其具有成本低,易修饰,稳定性好及有较好的组织渗透性且无免疫原性等多个优点,被广泛应用于临床诊断和药物研发。本课题中,采用基于磁珠的Media-SELEX(Med-SELEX)技术,筛选特异性靶向胃癌细胞分泌蛋白的核酸适配体。筛选过程以SGC-7901胃癌细胞培养液和SNU-1胃癌细胞培养液为正筛靶标,以HFE-145正常胃上皮细胞培养液为反筛靶标,通过增加筛选压力及替换筛选靶标提高适配体的特异性,共进行12轮筛选。上海生工高通量测序,通过同源分析、二级和三级结构预测及G四联体分析等方法,选出4条候选适配体进行后续验证Dibutyryl-cAMP半抑制浓度。通过对亲和力和特异性验证,选择APT-1作为最优适配体。q-PCR结果显示FG-4592生产商,适配体APT-1不仅对胃癌细胞培养液有较高亲和力,Kd值约5 n M,对胃癌血清也有较好亲和力。利用磁珠偶联法验证适配体APT-1特异性,适配体APT-1对胃癌细胞培养液RFU值显著高于其它细胞培养液RFU值,表明适配体APT-1有较好特异性。q-PCR法和量子点法进一步验证表明适配体对胃癌血清具有很好特异性。APT-1血清中稳定性实验及对细胞毒性和迁移性影响表明,适配体APT-1在血清中24 h后逐water disinfection渐被降解,对细胞无明显毒性且不影响细胞迁移。本研究通过Med-SELEX技术最终获得对胃癌血清亲和力较好,特异性较高的适配体APT-1,且该适配体不易被降解,且对细胞无毒性,对于胃癌的早期诊断,具有一定的应用价值。

目的：观察慢性乙型肝炎(CHB)病人使用恩替卡韦(ETV)或富马酸替诺福韦酯(TDF)抗病毒治疗后血清乙型肝炎病毒(HBV)前基因组RNA(pgRNA)水平的变化，及其与HBsAg、HBV DNA的关系，以探讨HBV pgRNA在抗病毒治疗中的临床意义。方法：选取89例初治CHB病人，其中44例接受ETV治疗(ETV组),45例接受TDF治疗(TDF组)。在治疗前、治疗24周、48周时随访，检测病人的血清HBsAg、HBV DNA、HBV pgRNA水平，分析2组病人血清HBV pgRNA水平的变化趋势和差异，以及HBV pgRNA与HBsAg、HBV DNA间的相关性。结果：随着治疗时间的延长，2组病人HBV pgRNA水平均明显降低(P<0.01)。2组病人治疗24周时HBV pgRNA水Secretory immunoglobulin A (sIgA)平低于治疗前(P<0.05),治疗48周时HBV pgRNA水平低于治疗24周时(P<0.05)。在抗病毒治疗前及治疗24周、48周时，ETV组病人的HBV pgRNA水平与HBsAg水平均呈明显正相关关系(P<0.01),HBV pgRNA水平与HBV DNA亦呈明显正相关关系(P<0.01)。在抗病毒治疗前、治疗24周、48周时，TDF组病人的HBV pgRNA与HBsAg均呈明显正相关关系(P<www.selleck.cn/products/azd67380.01);抗病毒治疗前、治疗24周时，TDF组病FUT-175价格人的HBV pgRNA与HBV DNA呈明显正相关关系(P<0.01),但抗病毒治疗48周时，病人的HBV pgRNA与HBV DNA无明显相关关系(P>0.05)。TDF组病人HBV DNA的阴转率高于同一时间点ETV组病人，在治疗48周时，2组间差异有统计学意义(χ~2=6.23,P<0.05)。结论：CHB病人血清HBV pgRNA水平在抗病毒治疗的进程中呈明显下降趋势，血清HBV pgRNA在核苷(酸)药物抗病毒疗效评估与监测方面有一定的临床意义。

为了探索沙库巴曲缬沙坦钠(LCZ696)抑制心衰心肌细胞凋亡的作用机制，腹腔注射盐酸阿霉素构建SD大鼠心衰模型，模型构建成功后随机分为心衰组(HF)、缬沙坦组(Val)、LCZ696低剂量组(LCZ-L)、LCZ696高剂量组(LCZ-H),空白组(Control),治疗8周后观察大鼠平均动脉压(MAP)、体质量、心率(HR)变化，检测血清中脑钠肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌Puromycin生产商酸肌酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)含量，超声评价各组大鼠心功能改善情况；将大鼠左心室心肌组织进行HE染色和Tunel染色；检测活化的AKT(P-AKyellow-feathered broilerT)、Bax、caspase-3蛋白表达.结果显示：Trichostatin A说明书心衰大鼠经Val及LCZ696治疗后超声显示心脏功能均有明显改善，BNP、CK-MB、CK、AST、ALT水平下降，其中LCZ-H组降低最明显；HE染色及Tunel染色显示经治疗后细胞凋亡数减少，心肌组织中P-AKT含量较HF增加，Bax、caspase-3蛋白含量较HF组降低，LCZ-H组减少最显著.综上可知，LCZ696通过抑制Bax/caspase-3信号通路抑制心肌细胞凋亡，改善心功能.

缺血性脑卒中是全球第二大死因。因此,探索有效的、新兴的缺血性脑卒中分子靶点是基础和临床研究的首要任务。本研究旨在探讨促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)在缺血性脑卒中的作用及其机制,为缺血性脑卒中的治疗提供参考。分别采用CRF、antalarmin或astressin-2B激活或阻断BV2小胶质细胞和已构建远端大脑中动脉闭塞(d MCAO)模型的成年雄性小鼠的CRF1(CRF受体1)或CRF2(CRF受体2)。我们发现CRF不仅可以通过促进炎症因子的转录和产生增加BV2小胶质细胞的活性,还可以促进激活的BV2小胶质细胞从神经保护表型(M2)向细胞毒性表型(M1)的转化,这些作用可能是通过TLR4/My D88/NF-κB信号通路介导的,更有趣的是此作用可以被antalarmin阻断,但不能被astressin-2B阻断。CRF显著加重了小鼠缺血性脑卒中后的神经功能缺损,增加了梗死体积,加重了神经损伤。此外,CRF显著提高脑缺血半暗带中TNF-α和磷酸化NF-κB的水平。最后,CRF使缺血半暗带中CD16/Iba-1阳性细胞比例显著增加,CD206/Iba-1阳性细胞比例显著减少。这些结果为CRF在缺血性脑卒中的促进炎症作用和可能的机制提供了证据,可能有助于发现缺血性脑卒中的潜在治疗方法。第一部分促肾上腺皮质激素释放因子对小胶质细胞的代谢激活作用目的:检测CRF,antalarmin(CRF1拮抗剂)及astressin-2B(CRF2拮抗剂)对BV2小胶质细胞的毒性作用。检测CRF,antalarmin及astressin-2B对BV2小胶质细胞促炎因子基因转录及产物生成的影响。检测CRF,antalarmin及astressin-2B对BV2小胶质细胞表型分化的影响。方法:BV2小胶质细胞分为6组:(1)空白对照组;(2)CRF(10 nmol/L)组;(3)antalarmin(100 nmol/L)组;(4)astressin-2B(100 nmol/L)组;(5)CRF(10 nmol/L)+antalarmin(100 nmol/L)组;(6)CRF(10 nmol/L)+astressin-2B(100 nmol/L)组。上述各组细胞被干预24小时后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞活力;采用ELISA检测IL-1β和TNF-α的产生;采用q RT-PCR检测促炎因子基因(Il1b,Tnf)以及M1型小胶质细胞标记物基因(Nos2,Ptgs2)和M2a型小胶质细胞标记物基因(Arg1,Mrc1)的表达变化。实验数据采用均数±标准差表示,应用SPSS26.0软件进行统计分析,以P<0.05,表示差异有统计学意义。结果:1 CCK-8:与空白对照组相比,各实验组与对照组均无显著性差异,表明上述各浓度药物干预24小时对BV2小胶质细胞无毒性作用;2 ELISA:与空白对照组相比,CRF组和CRF+astressin-2B组IL-1β和TNF-α的产生显著增加(P<0.01),而CRF+antalarmin组则显著抑制了这些作用;3 q RT-PCR:与空白对照组相比,CRF组和CRF+astressin-2B组Il1b和Tnf m RNA表达显著升高(**P<0.01,*P<0.05),而CRF+antalarmin与空白对照组相比无统计学差异;与空白对照组相比,CRF组Nos2 m RNA表达显著升高(P<0.01),其余各组与空白对照组相比无统计学差异,CRF组和CRF+astressin-2B组Ptgs2 m RNA表达显著升高(P<0.01),其余各组与空白对照组相比无统计学差异;与空白对照组相比,CRF组Arg1 m RNA表达显著降低(P<0.05),其余各组与空白对照组相比无统计学差异,CRF组Mrc1 m RNA表达显著降低(P<0.05),其余各组与空白对照组相比无统计学差异。小结:CRF可以通过作用于CRF1增加BV2小胶质细胞促炎因子的转录和产生,并导致激活的BV2小胶质细胞从神经保护表型(M2型)转化为细胞毒性表型(M1型)。第二部分促肾上腺皮质激素释放因子对小胶质细胞炎症通路的影响目的:探讨促肾上腺皮质激素释放因子对BV2小胶质细胞TLR4/My DFarmed sea bass88/NF-κB炎症通路的影响。方法:BV2小胶质细胞分为6组:(1)空白对照组;(2)CRF(10 nmol/L)组;(3)antalarmin(100 nmol/L)组;(4)astressin-2B(100 nmol/L)组;(5)CRF(10 nmol/L)+antalarmin(100 nmol/L)组;(6)CRF(10 nmol/L)+astressin-2B(100 nmol/L)组。上述各组BV2小胶质细胞被干预24小时后,应用Western-blot对下列指标进行检测:(1)TLR4;(2)My D88;(3)细胞质P-NF-κB;(4)细胞核P-NF-κB。结果:1与空白对照组相比较,CRF组和CRF+astressin-2B组TLR4蛋白水平均显著升高,分别为(P<0.01,P<0.05);2与空白对照组相比较,CRF组和CRF+astressin-2B组My D88蛋白水平均显著升高,分别为(P<0.01,P<0.05);3与空白对照组相比较,CRF组细胞质P-NF-κB蛋白水平显著升高(P<0.01);4与空白对照组相比较,CRF组和CRF+astressin-2B组细胞核P-NF-κB蛋白水平均显著升高,分别为(P<0.01,P<0.05)。小结:促肾上腺皮质激素释放因子作用于BV2小胶质细胞CRF1,激活TLR4更多/My D88/NF-κB炎症信号通路。第三部分促肾上腺皮质激素释放因子通过小胶质细胞炎症激活加重缺血性脑卒中神经细胞损伤目的:利用雄性成年小鼠构建远端大脑中动脉闭塞(d MCAO)模型,采用侧脑室注射的方法,检测CRF、antalarmin或astressin-2B对小鼠缺血性脑卒中模型的神经功能,脑梗死体积以及神经元损伤的影响。此外,应用免疫荧光技术检测脑缺血半暗带中TNF-α和P-NF-κB的水平以及CD16/Iba-1阳性细胞和CD206/Iba-1阳性细胞比例。方法:采用永久性闭塞大脑中动脉(MCA)和颈总动脉(CCA)的方法制造局灶性大脑皮质缺血模型。将雄性成年小鼠右侧CCA给予永久性结扎,右侧远端MCA给予电凝。假手术组小鼠暴露CCA但不给予闭塞,暴露远端MCA但不给予电凝。将小鼠随机分为5组,每组各10只,造模成功后,立即应用侧脑室注射的方法,各组给予以下药物干预:(1)假手术组(Sham);(2)大脑中动脉闭塞组(d MCAO-Con);(3)大脑中动脉闭塞+CRF组(d MCAO-CRF);(4)大脑中动脉闭塞+antalarmin组(d MCAO-antalarmin);(5)大脑中动脉闭塞+astressin-2B组(d MCAO-astressin-2B)。在脑缺血后的第2天,根据实验设计,采用Bederson试验对小鼠进行神经行为缺陷的评估,然后在深度麻醉下将小鼠快速脱位杀死;采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色的方法对脑梗死体积进行测定;应用H&E染色及尼氏染色对缺血半暗带神经元的形态变化进行观察;应用免疫荧光技术检测缺血半暗带Iba-1,TNF-α,P-NF-κB以及CD16/Iba-1阳性细胞和CD206/Iba-1阳性细胞的比例。结果:1与Sham组比较,d MCAO-Con组小鼠神经功能缺陷评分显著升高(P<0.01);与d MCAO-Con组相比,d MCAO-CRF组小鼠的神经功能缺陷评分显著增加(P<0.05),提示神经功能状况更差;d MACO-Con组、d MACO-antalarmin组和d MACO-astressin-2B组小鼠神经功能缺陷评分差异无统计学差异;2与d MCAO-Con组相比,d MCAO-CRF组显著增加了梗死体积(P<0.01);然而,d MAselleck产品CO-antalarmin组则显著降低了梗死体积(P<0.05);3在缺血半暗区,神经细胞H&E染色显示轮廓清晰,结构紧密,核仁完整的细胞定义为H&E染色阳性(H&E~+)的细胞。Sham组和d MCAO-Con组的H&E~+细胞比例分别为86%±4.2%和65%±5.8%,组间差异有统计学意义(P<0.01);与d MCAO-Con组相比较,d MCAO-CRF组H&E~+细胞比例显著较低至51.7%±6.8%,差异有统计学意义(P<0.05)。神经元尼氏染色显示胞质丰富,胞体完整,细胞核致密的细胞定义为尼氏染色阳性(尼氏~+)的细胞。Sham组和d MCAO-Con组的尼氏~+细胞比例分别为84.3%±4.3%和63.3%±4.3%,组间差异有统计学意义(P<0.01);与d MCAO-Con组相比较,d MCAO-CRF组的尼式~+细胞比例显著降低至50%±5.1%,差异有统计学意义(P<0.05);4与d MACO-Con组相比,d MACO-CRF组中Iba-1和TNF-α的表达显著升高,d MCAO-antalarmin组Iba-1和TNF-α水平明显降低;与d MACO-Con组相比,d MCAO-CRF组Iba-1和P-NF-κB的表达明显升高,d MCAO-antalarmin组Iba-1和P-NF-κB的表达则明显降低;5与Sham组相比,d MCAO-Con组CD16/Iba-1阳性细胞比例显著增加(P<0.01),与d MCAO-Con组相比,d MCAO-CRF组的CD16/Iba-1阳性细胞比例显著升高(P<0.01),d MCAO-antalarmin组CD16/Iba-1阳性细胞比例显著减少(P<0.01);与Sham组相比,d MCAO-Con组CD206/Iba-1阳性细胞比例显著增加(P<0.01),然而,与d MCAO-Con组相比,d MACO-CRF组的CD206/Iba-1阳性细胞比例显著减少(P<0.01),而d MCAO-antalarmin组CD206/Iba-1阳性细胞比例显著升高(P<0.01)。小结:CRF明显加重缺血性脑卒中后神经功能的损伤,增加了脑梗死体积并且导致了神经元的损伤,CRF1受体拮抗剂antalarmin可以逆转部分上述影响,在脑缺血后脑损伤中有一定的保护作用。结论:CRF可以通过促进炎症因子的转录和产生来激活BV2小胶质细胞,从而导致活化的BV2细胞从神经保护表型(M2)转化为细胞毒性表型(M1)。CRF通过增加炎性小胶质细胞活化显著加重缺血性卒中损伤,这与促进TLR4/My D88/NF-κB通路和增加M1型神经毒性小胶质细胞活化有关。

目的：研究川续断皂苷Ⅵ对M1/M2型巨噬细胞极化的调节作用及机制。方法：MTT法检测川续断皂苷Ⅵ对RAW264.7细胞活力的影响。ELISA检测脂多糖（LPS）诱导状态下RAW264.7细胞上清中TNF-α和IL-6的分泌量；Griess法检测LPS诱导状态下RAW264.7细胞上清中一氧化氮（NO）含量；荧光定量PCR检测TNF-α、ILselleck NSC 119875-6、精氨酸酶-1(Arg-1)、血红素加氧酶1(HO-1)和细胞因子信号转导抑制蛋白-2(SOCS2)基因表达水平。Western blotsandwich type immunosensor检测一氧化氮合酶（iNOS）和p-p65蛋白表达。结果：在LPS诱导的RAW264.7细胞中，川续断皂苷Ⅵ抑制TNF-α、IL-6、iNOS和p-p65蛋白或基因表达水平，同时增加HO-1基因表达。川续断皂苷Ⅵ能抑制LPS诱导下RAW264.7细胞分泌的NO。川续断皂苷Ⅵ增加IL-4诱导下M2型巨噬细胞标志物diABZI STING agonist体内Arg1和SOCS2基因表达。结论：川续断皂苷Ⅵ可以抑制RAW264.7巨噬细胞向M1型极化，同时促进其向M2型极化，可通过调节M1/M2型巨噬细胞极化发挥其抗炎免疫调节作用。

镉是环境中常见的重金属,为了研究镉暴露可能会对神经系统造成的损伤,文章以HT22细胞为模型,观察不同浓度硫酸镉暴露对HT22细胞的损伤。在光镜下观察,与对照组相比,随着镉离子浓度增加,细胞密度下降,漂浮细胞增多,细胞体积变小,细胞形态发生变化,细胞凹陷、皱缩变圆。结果表明,镉引起L02细胞形态的变化。实验用0.625、1.25、2.5medically ill、5、10μM镉处理HT22细胞24 h,LDH法检测细胞存活率,并检测5LY294002 NMR、10μM镉处理后HT22细胞分化和活性氧变化。LDH结果显示,LDH释放率随镉离子呈剂量依赖性增加;Hoechst33342法检测细胞凋亡,结果显示,随着镉离子浓度的增加,细胞体积变小,染色较亮,出现核固缩,核碎裂和凋亡小体等凋亡形态。Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,总凋亡率随着镉离子升高而增加,且Western Blot检测凋亡标志蛋白parp-1的表达情况,结果显示,HT22细胞经镉处理后,PARP-1剪切体呈剂量依赖性增加。结果表明镉可显著诱导凋亡蛋白的表达。PI染色法检测细胞形态,荧光结果显示,随着镉离子浓度的增加,荧光强度增加,出现细胞肿胀,细胞膜破裂等坏死形态,染色细胞增加,细胞染色阳性率增加,WesterBlebbistatin浓度n Blot检测细胞脂质依赖性死亡相关蛋白COX-2、SLC7A11和GPX4的表达情况。镉离子处理后显著增加了COX-2蛋白的表达,SLC7A11、GPX4蛋白表达降低,且使用铁死亡抑制剂Fer-1可以改善镉诱导的细胞毒性,结果表明镉诱导HT22细胞发生脂质依赖性死亡。综上所述,镉可能是通过细胞凋亡及铁死亡途径进而引起神经毒性。

目的:构建小鼠急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型lichen symbiosis,将远端气道干细胞(DASCs)移植到ARDS小鼠体内,分别采用Wnt/β-catenin通路激动剂和抑制剂干预,通过β-catenin表达量的变化,探讨DASCs对ARDS的修复作用,并进一步明确其作用机制。方法:将60只小鼠随机平均分成5组,每组12只,分别为:对照组、ARDS组、DASCs组、氯化锂(LiCL)组、Dkk-1组。每组分别于24 h、72 h两个时间点处死小鼠取材,每个时间点均为6只小鼠。模型制备:对照组气管插管后立即气管给予2.5 ml/kg生理盐水,其余4组气管插管后立即气管给予5 mg/Dolutegravir核磁kg LPS,溶于2.5 ml/kg生理盐水(浓度2 mg/ml)构建ARDS小鼠模型。6小时后对各组的干预分别为:对照组和ARDS组气管给予50μl基础培养基+10μl生理盐水。DASCs组和LiCL组气管给予50μl基础培养基(含1×10~6个DASCs细胞)+10μl生理盐水。Dkk-1组气管给予50μl基础培养基(含1×10~6个DASCs细胞)+1μg Dkk-1蛋白,溶于10μLorlatinib分子量l生理盐水。第二次气管插管后,LiCL组立即腹腔注射40 mg/kg LiCL,溶于4 ml/kg生理盐水(浓度10 mg/ml),每24小时腹腔重复注射等量的LiCL 1次,直至小鼠处死。其余4组立即腹腔注射4 ml/kg生理盐水,每24小时腹腔重复注射等量生理盐水1次,直至小鼠处死。各组分别取肺组织标本比较肺湿干重比评估肺水肿程度;行支气管肺泡灌洗留取肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)测总蛋白的浓度评估肺泡通透性;进行肺组织HE染色观察病理变化情况。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测BALF中抗炎因子IL-10和促炎因子TNF-α、IL-1β水平,评估肺部炎症情况。q PCR检测肺组织Occludin RNA表达量评估肺上皮屏障功能。q PCR检测肺组织β-catenin RNA表达量评估Wnt通路激动剂LiCl及抑制剂Dkk-1在ARDS小鼠中对DASCs修复作用的影响。结果:1.与对照组相比,ARDS组小鼠2个时间点的肺湿干重比、总蛋白浓度显著升高(P<0.001)。与ARDS组相比,DASCs组2个时间点肺湿干重比(24小时P<0.01,72小时P<0.001)、BALF中总蛋白浓度(P<0.001)降低。LiCL组比DASCs组肺湿干重比(24小时P<0.05,72小时P<0.01)、总蛋白浓度(P<0.05)降低。Dkk-1组较DASCs组肺湿干重比、总蛋白浓度升高(24小时P<0.05,72小时P<0.01)。2.对照组小鼠肺组织切片肺泡形态和结构完整,无炎症细胞浸润,肺间质无充血、水肿,未发现明显病理性损伤。ARDS组肺组织切片观察到肺间质水肿明显,肺泡内可见明显的红细胞和炎症细胞浸润,病理损伤明显,且72小时比24小时损伤更严重。DASCs组肺间质充血、渗出减少,肺泡结构相对完整,炎症细胞浸润减少,较ARDS组肺损伤程度减轻。LiCL组肺间质充血、渗出明显减少,肺泡结构更为完整,几乎未见炎症细胞浸润。LiCL组较DASCs组的损伤程度明显减轻。Dkk-1组可见肺间质水肿、出血,肺泡壁增厚,可见炎症细胞浸润,说明Dkk-1组肺损伤程度高于DASCs组。3.ARDS组2个时间点BALF中TNF-α、IL-1β以及IL-10的浓度明显高于对照组(P<0.001)。与ARDS组相比,DASCs组的TNF-α、IL-1β的浓度降低(P<0.001),IL-10的浓度升高(P<0.001)。与DASCs组相比,LiCL组的TNF-α、IL-1β的浓度降低(P<0.01),而IL-10的浓度升高((24小时P<0.001,72小时P<0.01)。与DASCs组相比,Dkk-1组的TNF-α、IL-1β的浓度升高(24小时P<0.05,72小时P<0.001)、IL-10的浓度降低(24小时P<0.001,72小时P<0.05)。4.ARDS组2个时间点β-catenin RNA表达量比对照组减少(24小时P<0.01,72小时P<0.001)。DASCs组β-catenin RNA表达量较ARDS组增加(P<0.001)。LiCL组β-catenin RNA表达量较DASCs显著增加(24小时P<0.001,72小时P<0.01)。与DASCs组相比,Dkk-1组的β-catenin RNA表达量显著减少(P<0.001)。5.ARDS组2个时间点Occludin RNA表达量比对照组明显减少(P<0.001)。DASCs组2个时间点的Occludin RNA表达量比ARDS组增加,72小时(P<0.001)比24小时(P<0.01)增加显著。与DASCs组比,LiCL组2个时间点的Occludin RNA表达量增加,72小时(P<0.001)比24小时(P<0.05)增加明显。而Dkk-1组2个时间点的Occludin RNA表达量较DASCs组减少,72小时(P<0.001)比24小时(P<0.05)减少显著。结论:1.DASCs可以降低ARDS小鼠肺湿干重比、BALF中总蛋白浓度,减轻炎症反应,改善肺泡通透性,改善肺上皮屏障功能,减轻肺损伤程度。2.LiCl激活Wnt/β-catenin信号传导,促进DASCs对肺损伤的修复作用。3.Dkk-1抑制Wnt/β-catenin信号传导,减弱了DASCs对肺损伤的修复作用。

单原子催化剂(single-atom catalysts,SACs)以其卓越的催化活性和选JQ1说明书择性成为生物医学领域中备受关注的催化剂之一。SACs是指将单个金属原子分散固定在载体表面上的催化剂。这些金属原子通常被固定在高比表面积的材料表面上,形成单原子活性中心。采用单原子分散的催化剂由于表面的活性组分高度分散,其金属利用率非常高(理论上可达100%),相较于同等金属质量的催化剂,催化活性更高。虽然作为均相催化剂,SACs已经被广泛研究用于化学催化,但在酶催化中的应用还很少。因此,本论文提出了一种简单而有效的方法,构建了一种单原子铂负载多孔碳纳米颗粒纳米酶材料,并探索了该材料在生物医药领域的应用潜力。具体研究工AZD2281体内实验剂量作如下:(1)利用浸渍法制备了一种基于碳纳米笼(carbon nanocages,CNCs)载体的铂单原子纳米酶Pt_1/CNCs,并对其类过氧化物酶活性进行了探究。系统研究体系温度、p H、底物浓度等因素对Pt_1/CNCs类酶活性的影响,优化单原子铂催化剂材料。利用Pt_1/CNCs的类过氧化物酶活性,结合计算机图像识别相关内容,研究了其在生物传感检测领域的应用,提出了一种新型可用于过氧化氢、葡萄糖、维生素C等物质Complete pathologic response浓度检测的方法。该研究不仅拓展了Pt_1/CNCs在生物传感检测领域的应用,也为发展更加精准、高效的生物传感检测技术提供了新思路。(2)以Pt_1/CNCs为催化剂构建纳米载药系统,利用单原子铂在电场作用下诱导水分解产生活性氧的性能,研究纳米酶在电动力肿瘤治疗中的应用。系统考察外加电场强度、施加时间和电流交变频率等外源因素对Pt_1/CNCs分解水催化性能和产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)的影响,优化最佳电场驱动条件。建立细胞和动物模型,初步探索其电动力治疗肿瘤效果。结果表明,Pt_1/CNCs在电动力刺激下能够高效地分解水产生活性氧,并显示出良好的治疗效果。本研究为利用Pt_1/CNCs催化剂在电动力肿瘤治疗中的应用提供了新思路和实验基础,有望为电动力治疗肿瘤提供一种新型、高效的治疗手段。同时,本研究对于Pt_1/CNCs在其他生物医学领域中的应用也具有参考价值。

目的 评价人干扰素（IFN)α2b注射液雾化吸入质量的重要参数药雾粒度分布，比较不同配制方法下药雾粒度分布的差异，为临床用药提供依据和参考。方法 研究时间2022年3―7月。采用激光衍射的方法测定IFNα2b注射液雾化过程中的药雾粒度分布，并比较不同配制方法下药雾粒度分布的差异。利用文献发表的不同大小颗粒在呼吸道沉降的分布系medical mycology数和测定的不同大小药雾颗粒的体积累积分布数据，估算出不同呼吸道区域IFNα2b药雾颗粒的沉降量。结果 随着雾化时间的延长，药雾颗粒体积平均直径有稍许增大趋势，在全部雾化过程中，IFNα2b注射液（1 mL药液∶1 mL生理盐水）药雾颗粒的平均特征粒径X_(90,3)为（7.88±0.09）μm,X_(50,3)为（2.80±0.05）μm,X_(10,3)为（0.82±0.01）μmselleck抑制剂。雾化吸入IFNα2b注射液适宜用生selleckchem AMG510理盐水稀释，最佳稀释比例为1 mL药液加入1～1.5 mL生理盐水，药雾颗粒体积平均直径为3.61～3.67μm,0.5～5.0μm的药雾颗粒的体积百分含量为72.72%～73.82%。若雾化吸入300万IU人干扰素α2b，约有159.09万IU药物分布于鼻咽部，约37.49万IU药物进入肺部，约13.35万IU药物分布于气管支气管区域。结论 雾化吸入IFNα2b注射液最佳配置方法是1 mL药液加入1.0～1.5 mL生理盐水稀释，此时，产生的适合于呼吸道药物递送的药雾颗粒体积总量最多，可使较多药雾沉降分布于气管支气管以及肺泡区域。