ALK抑制剂

近红外荧光成像作为一种无创伤的新兴成像方式,克服了传统成像的缺陷,相比可见光成像,其减少了人体自发荧光和光子散射的影响,进一步提高了体内穿透深度和成像分辨率。尤其是发射波长在近红外二区窗口的探针材料,为BMS-354825分子式无创生物体内探查提供了具有优势的成像平台。相较于其他无机类的探针材料及有机聚合物材料,荧光小分子更容易进行结构上的合理优化,实现探针功能化修饰,在生物安全性、生物相容性及肝肾代谢等方面具有潜在的医学应用前景。多肽的多功能性可以很好的作为探针修饰的手段。其中具有细胞穿膜作用的肽可携带多种分子物质进入细胞,并可以借助细胞膜的胞吞作用进行靶向药物递送。功能性蛋白质在人Bucladesine体外类了解和认识生命活动、治疗疾病等方面起着十分重要的作用。对探针进行穿膜性能优化后,新型的肽型荧光探针有望被开发,可实现药物的特定途径递送以及一体化疾病诊疗。本文中,首先以吡咯并吡咯二酮(DPP)、聚乙二醇(PEG2000)、3,4-乙烯二氧Biosurfactant from corn steep water噻吩(EDOT)、2-溴芴、2-溴咔唑(2-BCZ)等为原料通过施蒂勒偶联反应得到两种D-A-D型双供体的荧光分子BE-DPP和P2-DPP。为了改善荧光探针的穿膜性,本文设计合成了肽链,并进行了表征。(1)合成的BE-DPP具有较大的π共轭体系、较高的摩尔吸收系数、良好的光稳定性以及平面共轭结构。经纳米沉淀法制备胶束后,其吸收和发射峰分别为400nm和950 nm,荧光量子产率为0.39%。(2)合成的P2-DPP使用PEG2000作为分子的屏蔽单元增加产物水溶性并防止分子聚集导致荧光猝灭的发生。其表现出良好的水溶性,在水溶液中的吸收峰为600 nm、发射峰为1020 nm,具有420 nm的斯托克斯位移,量子产率为0.6%,体外穿透深度测试可达12 mm,经尾静脉注射可在小鼠体内观测到较强的荧光信号,肝脏为主要代谢器官。经EPR效应可实现体内被动肿瘤靶向富集。在808 nm激光器的照射下,300μg/m L的P2-DPP最高温度可升至50℃,其在光热测试中表现出良好的光热稳定性,并成功用于活体肿瘤的光热治疗。(3)为了增加探针分子在生物体内肿瘤的靶向穿膜递送,采用了赖氨酸、组氨酸等穿膜效果良好的氨基酸,筛选出了穿膜效果较优的肽链HHKKFHH,肽链在30min内对4T1细胞表现出较为明显的胞吞作用,筛选得到了对4T1细胞有良好穿膜效果的肽链。

目的:天麻先蒸制后干燥的产地加工方法从宋代一直沿用至今,2020版《中国药典》规定天麻的产地加工方法为“立即洗净,蒸透,敞开低温干燥”。由于天麻产地加工过程的生化反应及作用机理不清,导致在实际的生产中并未形成一套规范的天麻产地加工方法,导致天麻药材质量参差不齐。本课题旨在研究天麻产地加工对其化学成分及抗炎活性的影响,阐明天麻抗炎的药效物质基础和作用机制,从而揭示天麻产地加工的科学内涵,为规范天麻产地加工,提升天麻药材品质提供理论支持。方法:1、天麻产地加工对化学成分的影响研究。采用控制变量法,建立了5种天麻加工方法,其中(1)45 ℃烘干vs.蒸制+45 ℃烘干:考察蒸制时的高温对酶和化学成分的影响;(2)45 ℃烘干vs.超高压灭酶+45 ℃烘干:考察直接烘干时水解酶对化学成分的影响;(3)超高压灭酶+蒸制+45 ℃烘干vs.超高压灭酶+45 ℃烘干:考察高温对化学成分的影响;(4)超高压灭酶+45 ℃烘干vs.超高压灭酶+冻干:考察低温干燥对化学成分的影响。建立5种天麻加工品的HPLC指纹图谱,确定共有峰;然后采用聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘—判别分析(OPLS-DA)对5种加工样品进行聚类,并分析其差异性成分;最后对5种天麻加工品中的主要成分进行含量测定。从化学角度阐明天麻产地加工过程中的高温蒸制和低温烘干对天麻品质的影响。2、天麻蒸制过程中化学成分的“时间—空间—含量”变化规律研究。选取5块天麻分别蒸制0 min、2 min、4 min、6 min、8min,室温下放置24 h后切片;优化喷涂基质,建立一种对天麻中的酚类成分高覆盖可视化分析的基质辅助激光解析质谱成像(MALDI-MSI)方法,结合液—质联用(LC-MS)对不同蒸制时间下天麻切片中酚类化合物进行成像、鉴定和分析,研究天麻蒸制过程中酚类成分的“PF-02341066抑制剂时间—空间—含量”变化;进行β-葡萄糖苷酶(β-GC)对天麻素(GAS)的体外酶解实验。3、天麻抗炎活性的谱—效关系研究。建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠小胶质细胞(BV-2)炎症模型,使用MTT法考察天麻不同提取部位的细胞毒性,以NO、TNF-α和IL-6为指标筛选天麻的抗炎活性部位,并比较天麻蒸制前后的抗炎活性变化;建立10批商品天麻活性部位的HPLC指纹图谱,标定其共有峰,并采用LC-MS对共有峰进行鉴定;采用偏最小二乘回归分析法(PLS)和灰色关联度法(GRA)建立谱—效关系,分析其化学成分与NO、TNF-α和IL-6分泌抑制作用的相关性,以确定天麻发挥抗炎作用的潜在物质基础。4、天麻发挥抗炎作用的药效物质确证及作用机制研究。测定潜在药效物质对LPS诱导的BV-2细胞炎症模型中炎症介质(NO、ROS、TNF-α、IL-6、i NOS和COX-2)水平,结合分子对接技术预测天麻发挥抗炎作用的相关信号通路及与关键靶点蛋白,并基于LPS诱导的BV-2细胞炎症模型和蛋白质印迹技术(Western blot)进行体外验证,考察潜在药效物质对相关信号通路主要靶点蛋白表达的影响,对天麻发挥抗炎作用的化学成分及作用机制进行研究和确证。结果:1、系统的阐明了天麻产地加工对化学成分的影响。HPLC指纹图谱共标定了天麻素(GAS)、对羟基苯甲醇(4-HBA)、巴利森苷A(PA)、巴利森苷B(PB)、巴利森苷C(PC)和巴利森苷E(PE)为5组天麻样品的共有峰。HCA、PCA和OPLS-DA结果表明,直接烘干和蒸制后烘干的天麻样品分别聚为一类,而经超高压处理的3组天麻样品聚为一类,影响聚类的主要差异性成分为4-HBA和PA。含量测定结果表明,直接烘干的天麻中4-HBA含量显著高于其他处理组(P<0.001),PA和PE含量显著低于其他处理组(P<0.001);蒸制处理的天麻与超高压处理后再蒸制的天麻相比,PA含量较低(P<0.01);另外,烘干处理与冻干处理的天麻中的化学成分含量没有明显差异。说明蒸制可以灭活水解酶,抑制了巴利森苷类成分的降解;而蒸制时的高温也有促进PA转化的降解;另外低温烘干对巴利森苷类成分的降解作用不明显。2、直观呈现了天麻的酚类成分在蒸制过程中的“时间—空间—含量”变化。实验优化得到1,5-二氨基萘(1,5-DAN)作为喷涂基质,利用基质辅助激光解析质谱成像技术可以在天麻切片中检测到13种酚类成分(包括11种巴利森苷类化合物),分别是PA、PT/PU、PK、PB/PC、PW、PJ、PE/PG、PD、4-HBA和CA。随着蒸制时间的增加,CA、4-HBA、PD和PW在切片中的分布由外向内逐渐减少,而PA、PT/PU、PK、PB/PC、PW和PE/PG等大分子巴利森苷在切片中的分布呈现出由外向内逐渐扩散的显著趋势。而天麻中的小分子成分是在羧酸酯酶(Car E)和β-葡萄糖苷酶(β-GC)的作用下由大分子巴利森苷通过断裂酯键和β-葡萄糖苷键形成的,这两种水解酶的失活时间与蒸至“透心”的时间一致。体外酶解实验表明蒸制可以灭活β-GC,抑制GAS的脱葡萄糖降解。以上结果均证明天selleck麻在蒸制过程中可以灭活Car E和β-GC,从外向内保护巴利森苷。基于此,本研究还总结了巴利森苷在Car E和β-GC作用下的降解途径。3、证实了天麻经蒸制可以显著提高抗炎活性,GAS、4-HBA、PA、PB和PC是潜在活性物质。MTT结果表明天麻的70%乙醇提取物和二氯甲烷部位对BV-2细胞有细胞毒性。建立了LPS诱导的BV-2炎症模型,以NO、TNF-α和IL-6为指标,对天麻正丁醇相和水相进行抗炎活性筛选,发现正丁醇相抗炎效果较好,确定为天麻药用部位。以NO、TNF-α和IL-6为指标,对先蒸制后烘干和直接烘干的两种天麻样品的抗炎活性进行比较,结果表明经蒸制的天麻其抗炎活性显著提高。建立了10批商品天麻正丁醇相的指纹图谱,确定了12个共有峰,经LC-MS共鉴定得到11个成分,分别为4,4′-dihydroxybenzyl sulfoxide(峰1)、柠檬酸(峰2)、bis-(4-hydroxybenzyl)sulfide(峰3)、天麻素(峰4)、甲基柠檬酸(峰5)、对羟基苯甲醇(峰6)、巴利森苷E(峰8)、巴利森苷J(峰9)、巴利森苷B(峰10)、巴利森苷C(峰11)、巴利森苷A(峰12)。12个共有峰的峰面积结合10批商品天麻正丁醇相对LPS诱导的BV-2炎症模型NO、TNF-α和IL-6的释放抑制率,建立天麻正丁醇部位的抗炎作用谱—效关系。在PLS中,峰4、6、10、11与药效呈正相关,且VIP值大于1;在GRA中,12个共有峰与NO抑制作用密切相关的排名前5的是6>4>7>12>10;与TNF-α的分泌抑制作用密切相关的排名前5的是4>2>6>10>12;而与IL-6的分泌抑制作用密切相关的排名前5的是6>4>7>12>10。综合以上结果,峰4(GAS)、峰6(4-HBA)、峰10(PB)、峰11(PC)和峰12(PA)为天麻正丁醇部位发挥抗炎活性的潜在物质基础。4、证明了PB的抗炎活性及其作用机制。PB可以抑制LPS刺激下BV-2细胞炎症介质(NO、胞内ROS、TNF-α以及IL-6)的释放及i NOS的活性和COX-2的水平的提高,表明PB可减轻LPS引起的BV-2神经细胞炎症。Western Blot结果表明PB可以通过抑制LPS诱导的IKKβ、IκBα和p65的磷酸化,从而抑制LPS诱导的NF-κB信号通路的激活发挥抗炎作用。分子对接技术预测得到PB与AMPKα和SIRT1蛋白的结合能力良好,分别为-12.1 k J·mol~(-1)和-7.6 k J·mol~(-1),推测PB可能作用于AMPKα/SIRT1蛋白调控下游NF-κB炎症信号通路。Western Blot结果表明,LPS可以抑制AMPKα的磷酸化和SIRT1的表达,而PB可活化AMPKα和SIRT1靶点蛋白,通过抑制AMPK/SIRT1信号传导发挥抗炎作用。综上,PB通过激活AMPK/SIRT1通路,进而抑制NF-κB通路,发挥抗LPS诱导的BV-2神经炎症作用。结论:综上所述,天麻的产地加工具有抑制巴利森苷的酶促降解、促进化学转化的作用;其在蒸制过程中可以灭活水解酶,由外向内抑制大分子巴利森苷的降解。天麻的正丁醇部位是发挥抗炎作用的活性部位,且天麻经蒸制后抗炎活性显著提高,其潜在的药效物质基础是GAS、4-HBA、PA、PB和PC。其中PB通过激活AMPK/SIRT1通路,进而抑制NF-κB通路,发挥抗LPS诱导的BV-2神经炎症作用。本研究通过对“产地加工—成分变化—药理作用Selenocysteine biosynthesis—品质形成”的关联研究,阐明了产地加工促进天麻品质形成的科学内涵,为建立科学、规范的天麻产地加工工艺和质量评价体系、基于天麻药效成分的新药研发提供理论依据,对推动中药学学科发展,促进中药农业高质量发展具有重要意义。

目的 观察老年心房颤动患者基因的单核苷酸多态性(SNP)对利伐沙班谷浓度的影响。方法 选择2020年4月至2021年9月解放军总医院第二医学中心就诊的老年心房颤动患者113例。测定7个SNP及利伐沙班谷浓度，分析利伐沙班谷浓度/剂量(C_(0 h)/D)与临床指标的相关性及不同基因型C_(0 h)/D的差异。结果 相关性分析显示，利伐沙班谷浓度与剂量呈正相关(r=0.294,PY-27632浓度=0.002),与年龄呈负相关(r=-0.291,P=0.002);C_(0 h)/D与凝血酶原时间呈正相关(r=0.205,P=0.029),与eGFlow CytometryFR呈负相Compound C体内实验剂量关(r=-0.252,P=0.007)。ABCB1 rs1128503 AA、AG和GG型患者利伐沙班C_(0 h)/D比较，差异有统计学意义(P=0.011)。ABCB1 rs1128503 AG和GG型患者利伐沙班C_(0 h)/D明显高于AA型患者[6.29(3.61,17.71)ng/(ml·mg)、9.20(3.53,29.34)ng/(ml·mg)vs 3.65(1.18,7.90)ng/(ml·mg),P<0.05]。结论 ABCB1基因遗传变异可能对老年心房颤动患者利伐沙班血浆浓度个体差异造成影响。

金黄色葡萄球菌是人畜共患病原体,可导致多种畜禽的皮肤软组织感染、肺炎和乳腺炎等疾病。近年来,随着抗生素的大量应用,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)的检出率不断增加,表现出多重耐药性,给MRSA感染的临床防治带来极大挑战。更为严重的是,MRSA极易形成生物被膜,不仅增强了对抗菌药物的耐药性,逃避宿主免疫应答反应,且在体内可作为潜在的感染源,释放游离细菌造成慢性感染,反复发作,难以治愈。同时,其诱发产生的持续炎症反应会损害周围的软组织,严重可能导致并发症。因此,开发新型的抗菌药物或治疗策略代替传统抗生素,在清除生物被膜的同时有效缓解炎症,对于临床MRSA生物被膜感染治疗具有重要意义。中药活性成分是新型“替抗”药物研发的重要来源。异甘草素(ISL)是甘草中的查尔酮类活性成分,前期研究发现,异甘草素具有优异的抗菌和抗炎活性,是治疗MRSA感染的潜在药物。然而,异甘草素溶解性差,生物利用度低,且与传统抗生素相比,药效相对较低,限制了其在抗炎及抗菌方面的应用。以纳米制剂为基础的纳米药物递送体系可增加药物溶解度,是实现药物增效减毒,高效利用的有效手段。其中,具有抗菌活性的阳离子纳米载体,不仅可实现抗菌药物的靶向输送,而且可与抗菌药物联合作用,增加抗菌效果。然而,阳离子纳米药物递送体系会与生物被膜中带负电的胞外基质组分相互作用,阻碍其在生物被膜内部的渗透与扩散,无法有效清除生物被膜。鼠李糖脂(RHL)是一种生物相容性好的生物类表面活性剂,能够通过破坏生物被膜胞外基质来分散生物被膜,促进抗菌药物的渗透。综上,本研究选用具有良好生物相容性和生物降解性的天然阳离子多糖壳聚糖纳米粒作为载体担载异甘草素,并通过鼠李糖脂进行修饰,制备担载异甘草素的鼠李糖脂-壳聚糖纳米粒(ISL@RHL-COS),通过体内外试验研究其缓解感染部位炎症,清除MRSA生物被膜,抑制残留细菌再黏附的作用,阐明其作用机制,具体研究结果如下:(1)通过一锅法成功制备了担载异甘草素的鼠李糖脂修饰的壳聚糖纳米粒ISL@RHLCOS,确定了最佳制备条件。制备所得ISL@RHL-COS呈椭圆形,粒径大小为136.7±0.86nm,zeta电位为32±1 m V,异甘草素的包封率与载药量分别为74.9±2.3%和5±0.12%。与壳聚糖纳米粒相比,RHL-COS的稳定性明显增加,并且可实现在酸性环境下响应性的释放异甘草素。(2)ISL@RHL-COS显著增加了ISL的抗MRSA效果,对MRSA的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别降低近4倍和10倍。ISL@RHL-COS可与MRSA发生团聚作用,通过增强细胞膜通透性,破坏细菌细胞膜,降低菌体核酸含量及可溶性蛋白种类和含AMG510作用量等途径,进而影响到细菌DNA复制、转录和翻译过程起到抗MRSA作用。(3)ISL@RHL-COS通过降低胞外基质中胞外多糖与胞外蛋白含量分散生物被膜。通过激光共聚焦定性和活/死染色试验表明,ISL@RHL-COS可有效渗透到生物被膜内部,并杀灭生物被膜内部MRSA。在异甘草素剂量为120μg/m L,ISL@RHL-COS可完全清除生物被膜。(4)通过药物-细菌-细胞互作模型研究了ISL@RHL-COS对细菌进入机体后发生初始黏附的抑制作用。根据细胞存活率和细菌黏附率确定出最佳感染复数为50 MOI。与模型组相比,ISL@RHL-COS在7.5μg/m L时可有效抑制细菌在细胞上发生黏附。(5)ISL@RHL-COS可显著下调LPS诱导的M1型巨噬细胞中促炎因子NO、TNF-α和IL-6水平,证明ISL@RHL-COS具有较高的抗炎能力。(6)建立小鼠皮下脓肿模型ICI 46474 IC50,研究纳米粒体内抗菌试验,结果显示,与ISL和RHL-COS相比,ISL@RHL-COS能有效促进脓肿部位伤口愈合,降低TNF-α和IF-6的含量,并显著降低感染部位MRSA的存活率。此外,成功建立小鼠皮下植入物MRSA生物被膜感染模型,经ISL@RHL-COS治疗后,可高效清除植入的导管表面成熟的生物被膜,有效改善感染组织周围的炎性症状。综上,本论文制备了集“破坏生物被膜-杀灭膜内外细菌-抑制残留细菌再黏附-缓解炎症促组织再生”为一体的多功能纳米体系(ISL@RHL-COS),该纳米体系具有较高的安全性和稳定性,可主动靶向细菌,并p H响应性释放异甘草immediate range of motion素,同时释放的鼠李糖脂可分解生物被膜胞外基质从而促进纳米粒在生物被膜的渗透与扩散,彻底清除生物被膜,并抑制残留细菌再黏附,缓解感染部位炎症,实现安全、高效的MRSA生物被膜感染治疗。本研究针对MRSA生物被膜的耐药机制及生长过程,利用中药单体实现了MRSA生物被膜感染的高效治疗,为中药单体的高效应用提供了新思路,为控制畜禽动物源细菌的耐药性及生物被膜相关的感染问题提供新途径和新方法。

目的 分析5S管理模式对提升和改善医疗管理质量及水平所发挥的作用。方法 选取2021年1—12月在罗源县精神病防治院接受治疗的患者197例，采用传统KPT-330分子量管理模式（管理前）；选取2022年1—12月在罗源县精神病防治院进行治疗的患者214例，采用5S管理模式（管理后）。比较采用5S管理模式前后安全质量、门诊医疗质量、病房医疗质量及医疗文书质量。结果 管理后医疗投诉或纠纷发生率、医疗器械消毒不合格率以Diagnostics of autoimmune diseases及不良事件发生率均显著低于管理前（P <0.05）。管理后首诊负责落实率及患者满意度均更高，患者平均候诊时间均更短（P<0.05）。与管理前相比，管理后责任医师落实率、每日查房频率均更高，患者好转出院率更高（P <0.05）。采用5S管理模式后首次病程记录完成时间明显更短，病历书写及时率、病历书写达标率、甲级病例率及危急值报告及时率更高LY2157299价格（P <0.05）。结论 在医疗质量管理中应用5S管理模式能够使医疗管理质量及水平得到有效提升，临床应用价值较高。

研究背景及目的:肺癌是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌的85%,且大多数患者确诊时已为晚期,失去了根治性手术机会。免疫检查点抑制剂(Immune checkpoint inhibitors,ICIs)能为晚期NSCLC患者带来持久获益,开启了癌症治疗新时代。然而,丝氨酸/苏氨酸激酶11(Serine/threonine kinase11,STK11)突变的NSCLC患者对ICIs原发耐药。具体机制为,STK11突变会导致肝激酶B1(Liver kinase B1,LKB1)失活,进而抑制干扰素基因刺激因子(Stimulator of interferon genes,STING)的活性,而STING的活化对抗肿瘤免疫至关重要。目前,STING激动剂已在临床前和临床研究中用于癌症免疫治疗,环状二核苷酸(Cyclic dinucleotides,CDNs)或CDN衍生物是一类代表性STING激动剂,但由于其生物利用度低,尚无法应用于临床。研究表明二甲双胍具有抗肿瘤效应,其主要通过活化腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)通路发挥作用,轴抑制蛋白1(selleckchem AlpelisibAxis inhibition protein 1,AXIN-1)是其激活AMPK的关键上游信号分子。研究报道二甲双胍对STK11突变型肺癌有益,并能增强化疗在这种癌症类型中的疗效。而且,二甲双胍能通过降低肿瘤耗氧增强抗肿瘤免疫,但其联合ICIs是否能克服STK11突变型非小细胞肺癌免疫治疗耐药尚不清楚。因此,本文旨在研究二甲双胍能否克服STK11突变型肺癌免疫耐药及其潜在机制。研究方法:使用H460细胞、A549细胞和AXIN-1敲除细胞(AXIN-1~(-/-)细胞)进行集落形成、细胞存活率和Ki67染色实验,探索二甲双胍联合T细胞或/和帕博利珠单抗的抗肿瘤效应。建立人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)-CDX小鼠模型进行体内实验。通过蛋白印迹、免疫荧光染色等实验探索二甲双胍对STING的表达及其下游信号通路的影响。利用CRISPR/Cas9敲除AXIN-1。通过I-TASSER服务器构建AXIN-1和STING的同源模型,Hex 8.0.0软件用于对接分析。免疫沉淀反应(Immunoprecipitation,IP)介导的内源性泛素化分析检测STING泛素化。非靶向代谢组学分析通过液相色谱-质谱(Liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)/MS系统进行。研究结果:1、二甲双胍section Infectoriae在体内、体外均具有克服STK11突变型肺癌免疫耐药的效应。(1)我们首先进行T细胞介导的肿瘤细胞杀伤实验,通过集落形成、Ki67染色和细胞计数试剂盒(Cell counting Kit-8,CCK-8)实验证实二甲双胍增强了活化T细胞对STK11突变型肺癌细胞的杀伤。(2)通过Ki67染色进行的细胞实验和基于PBMCs-CDX小鼠模型进行的体内实验发现,二甲双胍联合程序性死亡受体1(Programmed cell death protein 1,PD-1)抑制剂在体外能显著抑制STK11突变型肺癌细胞的增殖,在体内能显著抑制STK11突变型肺癌移植瘤的生长,这些结果证实二甲双胍在体内外均具有克服STK11突变型肺癌免疫耐药的效应。2、二甲双胍依赖支架蛋白AXIN-1维持STING的稳定性,进而增强了活化T细胞对STK11突变型肺癌细胞的杀伤。(1)我们对实验动物的肿瘤组织进行蛋白印迹和免疫荧光染色分析,发现二甲双胍可显著增加蛋白STING的表达。通过环己酰亚胺(Cycloheximide,CHX)实验和蛋白印迹分析,我们发现二甲双胍可减缓STING的降解,在维持STING稳定性的同时活化其下游信号通路。在小干扰RNA敲低STING后,二甲双胍不能维持STING的稳定性,且不能增强活化T细胞对STK11突变型肺癌细胞的杀伤。(2)利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除AXIN-1后,我们进行了集落形成试验、Ki67染色和CCK-8试验,发现二甲双胍不能增强活化T细胞对STK11突变型肺癌细胞的杀伤。同时,通过CHX实验,我们发现二甲双胍维持STING的稳定依赖于AXIN-1。在通过慢病毒转染AXIN-1~(-/-)细胞构建AXIN-1敲入细胞株后,我们证实二甲双胍维持STING的稳定性及增强活化T细胞对STK11突变型肺癌细胞的杀伤依赖于支架蛋白AXIN-1。3、二甲双胍通过增强AXIN-1与STING的结合,竞争性抑制环指蛋白5(Ring finger protein 5,RNF5)与STING的结合所介导的STING泛素化降解,从而维持STING的稳定性。(1)通过免疫荧光染色及激光共聚焦分析,我们发现AXIN-1与STING存在明显共定位且二甲双胍处理可增强这种作用,IP实验进一步证实二甲双胍可增Naporafenib研究购买强AXIN-1和STING的结合。蛋白质-蛋白质对接分析发现AXIN-1和STING在K150位点结合。(2)通过IP介导的内源性泛素化分析,我们首先明确二甲双胍减弱STING泛素化降解,然后进行蛋白印迹和免疫沉淀分析鉴定出E3泛素连接酶RNF5,并证实二甲双胍依赖AXIN-1抑制RNF5介导的K48链接的STING泛素化降解而维持STING的稳定。4、二甲双胍依赖AXIN-1上调多种核苷酸,且这些核苷酸化合物能增强活化T细胞对STK11突变型肺癌细胞的杀伤,可能与二甲双胍克服STK11突变型肺癌免疫耐药相关。(1)我们进一步通过非靶向代谢组学分析从代谢角度探索二甲双胍克服STK11突变型肺癌免疫耐药的代谢机制,结果发现二甲双胍依赖AXIN-1上调多种核苷酸。(2)细胞实验证实这些核苷酸化合物促进了活化T细胞对STK11突变型肺癌细胞的杀伤。这些结果表明,二甲双胍依赖AXIN-1上调的多种核苷酸可能与二甲双胍克服STK11突变型肺癌免疫耐药相关。研究结论:二甲双胍具有克服STK11突变型肺癌免疫耐药的效应,其机制是通过依赖支架蛋白AXIN-1抑制RNF5介导的K48链接的STING泛素化降解,从而维持STING的稳定并活化其下游信号通路。并且,通过非靶向代谢组学分析,我们发现二甲双胍依赖AXIN-1可上调多种核苷酸,它们可能与二甲双胍克服STK11突变型肺癌免疫耐药相关。

未漂洗鱼糜因为无漂洗工艺,营养价值得以保留,得率更高,减少环境污染,然而因未漂洗,机体中大量代谢酶残留,导致鱼糜品质下降,保质期缩短。多酚广泛存在植物根、叶、皮等中,具有抗氧化、抗炎、降尿酸等生物活性功能。本文主要采用分子对接技术和高效液相色谱技术,研究食物多酚对抗未漂洗鱼糜ATP代谢降解的影响及机制,以及筛选抑制未漂洗鱼糜品质下降的食物多酚,为提高未漂洗鱼糜品质和食物多酚增效开发提供理论基础。(1)采用分子对接技术,以Phenol Explore为基础数据库,筛选出数据库中有71个多酚单体可能存在抑制酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP)、腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase,ADA)和黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase,XOD)活性的潜力。根据数据库对比和文献比对,筛选出姜黄、茶籽、芝麻、迷迭香、薄荷、葡萄籽、石榴皮、蓝莓、橄榄selleck激酶抑制剂、柚子、马鞭草、燕麦、草莓和莲子为原料。通过酶联免疫技术,研究了这14种食物多酚对ACP、ADA和XOD的抑制作用。多酚浓度为0.1mg/mL时,葡萄籽多酚对ACP的抑制率(40.79±9.48%)显著高于其他多酚;石榴多酚、迷迭香多酚、芝麻多酚和橄榄多酚对ADA的抑制率高于50%;茶籽多酚、莲子多酚、蓝莓多酚、马鞭草多酚、姜黄多酚、石榴皮多酚、葡萄籽多酚和橄榄叶多酚对XOD的抑制率高于50%。由此可得,上述10种多酚具有靶向抑制未漂洗鱼糜三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)及其关联物代谢降解活性。(2)研究了上述10种多酚对未漂洗鱼糜ATP及其关联物降解代谢和凝胶特性的影响。研究发现冻融后橄榄组鱼糜的ATP、肌苷酸(Inosinic Acid,IMP)含量最高,为91.87 mg/kg、1045.05 mg/kg;莲子组鱼糜的二磷酸腺苷(Adenosine Diphosphate,ADP)含量As remediation最高,为125.43 mg/kg;马鞭草组鱼糜的腺苷酸(Adenosine Monophosphate,AMP)含量最高,为126.30 mg/kg;芝麻组鱼糜的次黄嘌呤核苷(Inosine,HxR)含量最低,为80.43 mg/kg;石榴组鱼糜的次黄嘌呤(Hypoxanthine,Hx)含量最低,为115.13 mg/kg。橄榄、葡萄和石榴对未漂洗鱼糜K值增长的抑制效果最好,其K值分别是:14.10%、14.05%和14.32%。多酚浓度提高到0.5%时,石榴多酚对K值的抑制作用最好。发现冻融后空白组鱼糜凝胶强度为527.15±50.41 g·mm,姜黄组和橄榄组的凝胶强度显著高于其他多酚组,凝胶强度分别是1049.85±130.01 g·mm和1035.10±75.05 g.mm;冻融后空白组鱼糜保水性为87.10±1.76%,葡萄组鱼糜的保水性显著高于其他多酚组,为91.50±0.87%。冻融后空白组鱼糜TCA-肽含量为1476.00±39.69 mg/kg,迷迭香组鱼糜的TCA-肽含量显著低于其他多酚组,为1266.00 mg/kg。代谢物组学结果证明,石榴多酚对ADA活性、Hx的累积有显著抑制作用,姜黄多酚对Hx有显著抑制作用,但葡萄多酚对Hx累积的抑制作用较差。(3)将姜黄多酚和石榴皮多酚进行复配。由于多酚添加量超过0.25%时,鱼糜凝胶强度大幅度下降,因此以多酚添加量为0.25%,设定不同配比(姜黄多酚:石榴皮多酚的比例分别为:1:4、2:3、1:1、3:2、4:1,编号为P1-P5)FUT-175采购。通过测定不同配比的多对未漂洗鱼糜ATP及其降解代谢和凝胶特性的影响,筛选出P3为最佳配比。并测定了配比为P3的多酚复配物对未漂洗鱼糜冻融稳定性的影响,发现多酚复配物能有效抑制IMP和AMP降解,HxR和Hx生成;冻融5次后,多酚复配组鱼糜K值为15.47%,凝胶强度为1072.92±73.59 g·mm。

背景拷贝数变异(copy number variations,CNVs)在许多疾病的发生发展中发挥着重要作用。然而在非手术性甲状旁腺功能减退症(non-surgical hOil biosynthesisypoparathyroidism,ns-HP)患者中,仍缺乏其CNV的发生率数据及其与ns-HP表型相关性的研究。目的对本中心儿童/青少年发病的特发性甲状旁腺功能减退症(idiopathic hypoparathyroidism,IHP)患者及 DiGeorge 综合征-1(DiGeorge syndrome,DGS-1)相关性HP患者进行CNV(≥100kb)的筛查,探讨其发生率以及CNV与HP临床表型的相关性。方法研究对象包括两部分:(1)1975年至2021年期间在北京协和医院内分泌科就诊和随访的198例儿童/青少年起病的ns-HP患者,结合病史及靶向二代测序(targeted next-generation sequencing,T-NGS)/全外显子测序(whole exome sequencing,WES)联合TBX1-多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification assay,MLPA)筛查,纳入未发现候选致病基因罕见变异或归类为良性/可能良性变异的IHP患者。(2)1975年至2021年期间在北京协和医院内分泌科就诊和随访的ns-HP(包括198例儿童/青少年起病和97例成年起病)患者,结合病史及T-NGS/WES联合TBX1-MLPA筛查,纳入发现TBX1有大片段缺失或存在被归类为致病/可能致病的TBX1变异的HP患者。回顾性收集上述患者的临床资料,包括一般临床资料、HP相关的临床表型、实验室检查及慢性并发症等。提取患者外周血DNA,通过低深度全基因组测序(whole genome sequencing,WGS)检测纳入患者的 CNV(≥100kb)。比较 CNV阳性及阴性IHP患者、不同CNV负荷(每例患者携带的CNV总碱基数)的IHP患者、是否携带22q11以外CNV的DGS-1患者的HP相关临床表型的差异,并比较DGS-1相关性HP患者与IHP患者间CNV(≥100kb)发生情况的差异。结果共有125例IHP患者和34例DGS-1相关性HP患者进行了 CNV(≥100kb)检测和分析。1.在125例IHP患者中:(1)CNV(≥100kb)发生频率及长度:55例(44.0%)患者携带83个CNV(≥ 100kb),长度为 100kb-2640kb(中位数为 280kb),包括 63 个(75.9%)重复、20个(24.1%)缺失。64个(77.1%)CNV的基因座与已知基因重叠,但其中不包括任何已知的HP致病基因。(2)在CNV(≥100kb)阳性和阴性组间:除末次随诊时儿童患者尿钙水平(0.105[0.080,0.129]vs.0.044[0.017,0.079]mmol/kg/24h,P=0.01)外,两组患者HP相关临床表现、血钙及甲状旁腺素水平、慢性并发症发生情况、药物剂量等无显著差异。携带较大CNV(≥400kb)者较CNV阴性患者记忆力下降比例较高(13/15,86.7%vs.17/33,51.5%,P=0.02)。(3)将CNV(≥100kb)阳性患者根据CNV负荷按照三分位分为三个亚组(100-320 kb、360-600 kb 和 620-2640 kb):除初诊时血游离钙水平(0.5[0.4,0.5]vs.0.8[0.6,0.9]vs.0.7[0.6,0.9]mmol/L,P=0.03)外,三组患者 HP 相关临床表现、慢性并发症发生情况、药物剂量等无显著差异。(4)在两例患者中发现两种ACMG分级为致病性变异(15q11.2上0.34Mb的缺失)和可能致病性变异(16p13.11上1.18Mb的重复)的CNV(≥100kb),但两种CNV已知临床表型与HP不相关,两例患者也无两种CNV相应临床表现。2.在34例DGS-1相关性HP患者中:(1)CNV(≥100kb)发生频率及长度:32例(94.1%)患者经低深度WGS证实存在22q11的致病性CNV(≥100kb)。15例(44.1%)患者携带22个22q11以外的CNV(≥100kb),长度为120kb-1840kb(中位数为280kb),包括16个(72.7%)重复、6个(27.3%)缺失。16个(72.7%)CNV的基因座与已知基因重叠,但其中不包括已知的HP致病基因。(2)在是否携带22q11以外CNV(≥100kb)阳性和阴性组间:除初诊时成人尿钙水平(1.5±0.6 vs.4.7±2.9mmol,P=0.04)、末次随诊时血镁水平(0.7±0.03 vs.0.8±0.06 mmol/Liraglutide溶解度L,P=0.02)外,两组患者HP相关临床表现、血钙及甲状旁腺素水平、慢性并发症发生情况、药物剂量等无显著差异。(3)DGS-1相关HP患者与IHP患者间:除22q11微缺失外,两组之间的CNV(≥100kb)发生率无显著差异(15/34 vs.16/34,P=0.81)。DGS-1 组和 IHP组患者在以下指标存在显著差Protein Tyrosine Kinase抑制剂异:发病年龄(7.0[0.7,13.3]vs.12.5[8.0,15.0]岁,P=0.01)、初诊时血游离钙和血碱性磷酸酶水平(分别为0.9±1.0vs.0.7±0.2mmol/L,P=0.02;164.6±98.5U/L vs.100.8±63.4U/L,P=0.01)、智力下降发生率(27/31,87.1%vs.4/14,28.6%,P=0.00)及末次随诊时血碱性磷酸酶水平(104.6±56.8 vs.74.8±32.2 U/L,P=0.01)及智力下降发生率(28/32,87.5%vs.5/17,29.4%,P=0.00)。结论1.在本组大样本儿童/青少年发病的IHP患者中:(1)44.0%的患者检出长度≥100kb的基因组拷贝数变异。(2)未发现携带CNV(≥100kb)的IHP患者与未携带的IHP患者之间HP临床表现有显著差异,需要更大样本量、前瞻性研究进一步探索。2.在本研究纳入的34例DGS-1相关HP患者中:(1)44.1%的患者携带除22q11微缺失以外CNV(≥100kb)。(2)未发现CNV(≥100kb)发生情况与DGS-1患者HP相关表型显著相关,需要更大样本量的进一步研究。背景甲状旁腺功能减退症(hypoparathyroidism,HP),简称甲旁减,是由甲状旁腺素(parathormone,PTH)缺乏导致的一种罕见内分泌疾病。位于染色体11p15.3的PTH基因的突变是导致家族性孤立性甲状旁腺功能减退症(familial isolated hypoparathyroidism,FIH)的罕见原因之一。到目前为止,已报告10个可能与FIH相关的PTH基因变异。目的本研究拟对本中心既往发现的PTH基因罕见变异(rare variation,RV)进行体外功能实验,分析罕见的PTH基因变异对甲旁减患者PTH合成与分泌的影响。方法研究对象为既往本研究组应用靶向二代测序(targeted next-generation sequencing,T-NGS)在非术后甲旁减患者中筛查出携带PTH基因罕见变异的3例患者。回顾性收集患者的临床资料:一般特征、HP相关临床表型、实验室检查及慢性并发症等。对上述变异进行Sanger测序验证及生信分析,包括保守性预测、致病性预测、蛋白结构功能预测等。构建野生型(wild-type,WT)和突变型PTH质粒并转染人胚肾(human embryonic kidney 293,HEK293)细胞进行体外功能验证。在4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)处理之前及处理48小时后,分别采用化学发光法测定培养基中完整PTH(intactPTH,iPTH)和PTH(1-84)的水平以及用蛋白质印迹法(Western blotting,WB)测定细胞中PTH蛋白的表达水平。结果本研究共纳入3例携带PTH基因罕见变异的患者,包括2例女性和1例男性,起病年龄分别为21、44、1 1岁,均以低钙血症相关症状起病,1例患者发生颅内钙化。其PTH罕见变异分别为NM_001316352:c.A1G:p.Gly2_Met5del(NP_001303281)、NM_000315:c.G 154A:p.Va152Ile(NP_000306)和 NM_000315:c.270G>T:p.Leu90Phe(NP_000306)。体外功能验证结果显示:(1)与WT相比,转染Gly2_Met5del突变型PTH细胞的培养基中iPTH/PTH(1-84)的水平以及细胞内蛋白表达水平没有显著差异;(2)转染 Val52Ile 突变型 PTH(iPTH:10826.7±83.4 vs.7338.7±108.9pg/ml,P<0.05;PTH(1-84):7778.7±51.4 vs.6296.0±135.1pg/ml,P<0.05)和 Leu90Phe突变型 PTH(iPTH:10826.7±83.4 vs.402.3±16.7pg/ml,P<0.01;PTH(1-84):7778.7±51.4 vs.4041.3±342.7 pg/ml,P<0.05)细胞的培养基中 PTH 水平明显减低,但其胞内蛋白表达能力较WT无显著差异;(3)4-PBA的添加仅部分增加了转染Leu90Phe突变型PTH细胞的培养基中的iPTH分泌水平(iPTH:402.3±16.7 vs.685.3±29.5pg/ml,P<0.05),但仍显著低于 WT。结论本研究报告了PTH基因的3个RVs,涉及两个转录本(NM_001316352和NM_000315)。1.成熟区的两种RVs(Va152Ile和Leu90Phe,NP_000306)会导致激素分泌能力受损,推测可能为致病性变异。2.长转录本中起始密码子的变异p.Gly2_Met5del(NP_001303281)不影响激素的分泌和蛋白表达,推测可能为非致病性变异。3.两种PTH罕见变异扩展了 FIH的致病变异谱。

目的:通过对10余年间某精神专科医院住院发生猝死的精神病患者和未发生猝死的对照患者的相关数据分析,探讨精神科住院患者猝死的相关因素。方法:以研究单位2010年1月-2021年12月发生猝死的精神疾病住院患者为研究对象,以非猝死患者为对照(病例配比为1:2),采用自编《猝死精神疾病住院患者资料信息收集表》收集研究对象的一般人口学信息、猝死相关信息和疾病相关信息(含病史、诊断、治疗和检查检验等),采用单因素分析方法比较两组患者前述信息资料的组间差异,分类变量进行独立样本卡方检验,连续性变量进行独立样本t检验;以是否猝死为因变量,以单因素分析有统计学意义的变量为自变量进行二分类Logistics回归分析,探索猝死发生的危险因素。结果:本研究共收集精神病猝死患者40例,对照组患者80例。1.猝死组单因素描述性分析:猝死组患者男性22例(55%),女性18例(45%);平均年龄49±15.13岁(13～76岁),其中0-18岁者 1 例(2.5%),18-35 岁者 8 例(22.5%),35-60 岁者 21 例(52.5%),60岁或以上者10例(25%)。猝死发生时间段分布:0点-8点者24例(60%),8点-13点者1例(2.5%),13点-18点者4例(10%),18点-24点者11例(27.5%)。猝死发生季节分布:春季12例(30%),夏季9例(22.5%),秋季8例(20%),冬季11例(27.5%)。猝死距入院天数:3天内者13例(32.5%),3天-1周者9例(22.5%),1周-2周者5例(12.5%),两周或以上者13例(32.5%)。2.猝死组与对照组单因素比较:(1)入院前行为学特征比较:猝死组的入院前饮酒史高于对照组患者,差异具有统计学意义(22.5%:7.5%,χPF-6463922说明书2=5.49,P=0.019)。(2)精神科疾病信息:猝死或出院24小时前服用抗精神病药物比例(90.0%:82.5%,χ2=4.27,P=0.039)、住院时间(χ2=36.56,P<0.001)、首次就诊年龄62.9±30.1 岁(t=1.99,P=0.049)、住院期间selleck抑制剂患躯体疾病(57.5%:36.3%,χ2=4.90,P=0.027)、既往住院患躯体疾病(90.0%:82.5%,χ2=4.27,P=0.004)、住院期间发热(60.0%:32.5%,χ2=8.30,P=0.009)、出院前 24 小时约束率(15.0%:0.0%,χ2=13.83,P<0.001)、住院期间约束率(37.5%:13.7%,χ2=8.86,P=0.003)等两组间比较差异均具有统计学意义。(3)出院前异常化验:住院期间血常规异常率(75.0%:50.0%,χ2=6.32,P=0.012)、住院期间心肌酶异常率(70.6%:44.3%,χ2=6.09,P=0.014)组间比较差异均有统计学意义。(4)出院前异常检查:住院期间颅脑CT异常率(71.4%:33.3%,χ2=8.38,P=0.004)、住院期间心电图异常率(95.0%:69.6%,χ2=8.59,P=0.003)组间比较差异均有统计学意义。3.猝死组及对照组的logistic回归分析提示:饮酒史、住院期间血常规异常、住院期间心电图异常、住院期间颅脑CT异常、住院期间心肌酶异常、住院期间约束、住院期间发热、既往躯体疾病、住院期间患躯体疾病、猝死或出院24小时前服用抗精神病药物等均与猝死有关。饮酒史(OR=4.678,P=0.005)、住院期间血常规异常(OR=3,P=0.014)、住院期间心电图异常(OR=8.291,P=0.006)、住院期间颅脑CT异常(OR=5,P=0.005)、住院期间心肌酶异常(OR=3.022,V180I genetic Creutzfeldt-Jakob diseaseP=0.015)、住院期间约束(OR=3.764,P=0.004)、住院期间发热(OR=3.37,P=0.011)、既往躯体疾病(OR=3.115,P=0.005)、住院期间患躯体疾病(OR=2.379,P=0.028)、猝死/出院24小时前服用抗精神病药物(OR=3.203,P=0.047)等是猝死的危险因素。结论:1.精神病住院患者发生猝死的男性占55%,多发生在中年(35-60岁),占比52.5%,猝死在冬春季的患者占57.5%,0点-8点猝死的患者占60%,在入院两周内发生猝死的患者占67.5%。2.精神病住院患者入院前饮酒史是猝死的危险因素。3.住院期间存在血常规、心电图、颅脑CT、心肌酶异常以及住院期间有约束、发热,既往和住院期间患有躯体疾病的患者更容易发生猝死。4.猝死/出院24小时前服用抗精神病药物的患者发生猝死的风险更高。

硒是维护人体健康至关重要的微量元素。目前已被证实硒具有抗癌能力,大量研究表明硒衍生物通过阻滞细胞周期,诱导肿瘤细胞的凋亡。课题组发现苯并异硒唑酮系列的衍生物可以抑制人非小细胞肺癌A549细胞的活性,尤其是2-[2-(4-氯苯氨甲酰基甲硫基)-1,3,4-噻二唑-5-基]-1,2-苯并异硒唑-3(2H)-酮化合物(CTBO)和2-[2-(4-硝基苯氨甲酰基甲硫基)-1,3,4-噻二唑-5-基]-1,2-苯并异硒唑-3(2H)-酮化合物(NTBO),可以显著抑制A549细胞的增殖,但其具体作用机制尚不明确。本课题对这两种衍生物对A549细胞的抑制作用的分子机制展开研究。首先使用细胞毒性实验测定这两种衍生物对A549细medical comorbidities胞的抑制作用;进一步,采用TUNEL细胞凋亡检测法检测两种药物诱导A549细胞的凋亡情况;再通过转录组学对CTBO和NTBO引起的A549细胞的差www.selleck.cn/products/Decitabine异基因进行检测和生物学分析;最后,通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)实验对转录组所筛选的差异基因及其蛋白表达情况进行检测。结果显示,这两种硒衍生物对A549细胞有显著增殖抑制作用,IC_(50)值分selleck Captisol别为0.21μmol/L和0.23μmol/L。TUNEL法检测出两种药物的凋亡指数成浓度依赖关系。通过转录组学发现,与对照组相比,CTBO和NTBO均会引起A549细胞的基因差异表达,其中MAPK和TNF信号通路中的相关基因的表达存在显著性差异(P<0.05);在CTBO组中,ASK1、DDIT3、DAXX、Caspase-8基因表达上调,P38、MKK6基因表达下调;而在NTBO组中,DAXX、MKK6基因下调,DDIT3、Caspase-3、Caspase-8基因上调。q RT-PCR和Western blot结果显示:CTBO使MKK6、P38蛋白表达水平下降,ASK1、DDIT3蛋白表达水平上升,与转录组学结果一致,其余蛋白表达无统计学差异;而NTBO组的MKK6、DDIT3、Caspase-3、Caspase-8的表达水平与对照组无统计学差异。综上,通过转录组学分析发现,硒衍生物CTBO和NTBO可能是通过激活MAPK和TNF信号通路发挥其诱导细胞凋亡的作用,抑制肺癌细胞A549的增殖;而蛋白水平的结果提示,NTBO与CTBO的抑癌的分子机制不同,但具体机制还需进一步深入研究。