ALK抑制剂

目的 合成一种雷公藤红素-氨基葡萄糖酰胺偶联物（celastrol-glucosamine conjugLiver immune enzymesate,Cel-GlcN），并评估其细胞毒性、调脂活性，以缓解Cel不良反应强、水溶性差的问题。方法 采用氨基葡萄糖对Cel第20位的羧酸基团进行酰胺化修饰，分别在二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰AZD6738研究购买胺（N,N-dimethylformamide,DMF）体系中使用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDC]、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷（benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidino-phosphonium hexafluorophosphate,PyBOP）作为酰胺偶联反应的活化剂加速Cel-GlcN的合成，使用高效液相色谱-质谱（HPLC-MS/MS）、~1H-NMR、~(13)C-NMR和傅里叶变换红外光谱（Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR）对其结构进行了表征，基于人肝癌HepG2细胞模型评价其细胞毒性、调脂活性及氧化应激水平。结果FTIR确定了化合物中酰胺键的存在，HPLC-MS/MS测定了化合物的相对分子质量，~1H-NMR、~(13)C-NMR鉴定了确认细节化合物的具体化学结构，相比于天然产物Cel,Cel-GlcN的水溶性得到了显著升高（由常温下的1.23μg/mL提升为226.00μg/mL），可能以缓控释作用释放Cel从而减轻其对细胞的毒性和机体内的氧化应激水平。结论 成功合成了Cel-GlcN，水溶性得到改善，体外细胞实验证实其调脂活性基本不变而细胞毒性降低，从而为Cel相关药物的研发提供有价值的参考。

严重慢性伤口和急性损伤极易发生真菌感染,严重扰乱预期伤口愈合过程,并导致败血症、癌变甚至截肢的后果~([1,2]),因此迫切需要开发新型抗真菌药物以改善临床常用抗真菌剂两性霉素B(AmB)溶解性差、毒副作用大的问题。本文以生物相容性好的金纳米颗粒与AmB制备纳米金抗真寻找更多菌复合材料AmB@AuNPs用于真菌感染性伤口治疗。实验发现了AmB@AuNPs具有较强的类POD酶活性,能诱导菌体内活性氧(ROS)的产生,并且表现出更强的抗真菌活性,相比于单独的AmB抑制白色念珠菌的MIC值提高1.6倍,抑制酿酒酵母的MIC值提高25倍。进一步的体内实验结果表明,在小鼠的感染性伤口治疗中,AmB@AuNPs水PI3K/Akt/mTOR抑制剂凝胶也表现出更好的抗真菌能力和生物安全性。与传统化学药物相比,目前的两性霉素B复合纳米金策略可以为进一步设计低成本,低毒性,高杀菌Personal medical resources能力的新型抗真菌药物提供新的思路和方法。

目的:探讨白屈菜红碱对烟曲霉菌的抗菌活性,以及在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用及相关机制。方法:1.采用CCK-8实验和Draize眼表毒性实验分别检测不同浓度的白屈菜红碱对永生化人角膜上皮细胞(HCECs)和小鼠角膜的毒性作用。2.采用最低抑菌浓度试验、扫描电子显微镜、透射电子显微镜、碘化丙啶摄取试验、Calcofluor white染色和结晶紫染色评估白屈菜红碱的体外抗真菌作用。3.建立C57BL/6小鼠烟曲霉菌性角膜炎模型,并于感染后1-5天给予实验组小鼠2μg/mL的白屈菜红碱溶液点眼处理,对照组小鼠0.1%DMSO溶液或8μg/mL那他霉素溶液点眼处理,通过裂隙灯拍照和临床评分评估白屈菜红碱对烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型的治疗作用;采用平板菌落计数法检测小鼠角膜中的真菌负荷量;采用苏木精-伊红染色检测小鼠角膜中炎症细胞浸润情况。4NSC 125973体外.通过对小鼠角膜进行免疫荧光染色观察白屈菜红碱对中性粒细胞募集、浸润的影响,采用髓过氧EPZ-6438生产商化物酶(MPO)实验检测中性粒细胞的活性。5.在动物及细胞烟曲霉菌炎症模型中,通过RT-PCR检测促炎细胞因子IL-1β和IL-6以及通路因子Nrf2、HO-1及LOX-1的m RNA表达;通过ELISA检测IL-1β和IL-6的蛋白表达;采用Western Blot检测LOX-1的蛋白表达以及p38 MAPK磷酸化情况。6.使用LOX-1质粒和空白质粒对HCECs进行转染,通过Western Blot检测LOX-1的蛋白表达和p38 MAPK的磷酸化,采用ELISA检测下游炎症因子IL-1β和IL-6的蛋白表达,评估白屈菜红碱对LOX-1/p38 MAPK信号通路的作用。结果:1.2μg/mL浓度范围内的白屈菜红碱不影响HCECs的细胞活性且对小鼠角膜无毒性作用。2.在体外试验中,白屈菜红碱抑制烟曲霉分生孢子的生长,减少真菌菌丝的存活,破坏真菌的形态结构,并抑制真菌生物膜的形成。3.在烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型中,2μg/mL白屈菜红碱显著改善了小鼠烟曲霉菌性角膜炎的严重程度,减少角膜真菌负荷,并且抑制炎症细胞浸润。4.免疫荧光结果提示白屈菜红碱可减轻烟曲霉菌性角膜炎中粒细胞募集、浸润;MPO结果显示白屈菜红碱可降低中性粒细胞活性。5.在体内、外炎症反应实Bioinformatic analyse验中,RT-PCR结果提示2μg/mL白屈菜红碱降低IL-1β、IL-6以及LOX-1的m RNA表达,同时升高Nrf2和HO-1的m RNA表达;ELISA结果表明2μg/mL白屈菜红碱可以抑制IL-1β,L-6的蛋白表达;Western Blot结果显示2μg/mL白屈菜红碱升高Nrf2和HO-1的蛋白表达,降低LOX-1的蛋白表达,抑制p38 MAPK磷酸化。6.LOX-1过表达质粒处理显著升高LOX-1蛋白表达水平、p-p38/p38 MAPK的比率以及IL-1β、IL-6的蛋白表达水平。2μg/mL白屈菜红碱预处理下调质粒刺激引起的LOX-1蛋白质表达,p38 MAPK的磷酸化和下游炎症因子IL-1β、IL-6的表达。结论:在烟曲霉菌性角膜炎中,2μg/mL白屈菜红碱对HCECs和小鼠角膜无明显毒性作用,且可以充分发挥抗菌和抗炎作用。白屈菜红碱通过抑制烟曲霉分生孢子的生长、破坏真菌菌丝的形态结构、减少真菌菌丝的存活、阻止真菌生物膜的形成等发挥抗菌作用;减少中性粒细胞的募集和浸润、下调促炎细胞因子的表达、上调Nrf2和HO-1的表达以及抑制LOX-1/p38 MAPK的信号通路发挥抗炎作用。

目的 探究甜菜碱在阿霉素诱导的心脏毒性中的作用及机制。方法 给予小鼠单次腹腔注射阿霉素(15 mg/kg)构建阿霉素心肌病模型，采用随机数字表法将48只小鼠分为生理盐水+生理盐水组、生理盐水+甜菜碱组、阿霉素+生理盐水组以及阿霉素+甜菜碱组共4组，每组12只。模型构建当天开始连续7 d给小鼠进行甜菜碱灌胃(800 mg·kg~(-1)·d~(-1)),对照组用同等体积生理盐水进行灌胃。灌胃结束后检测各组小鼠心脏超声并取材；用免Soluble immune checkpoint receptors疫组织化Cobimetinib细胞培养学染色检测脂质过氧化物水平；用TUNEL染色检测心Taurine供应商脏凋亡水平；Western blot检测相关蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)表达水平；qPCR检测相关基因mRNA水平；试剂盒检测心肌损伤标志物和丙二醛以及胱天蛋白酶(caspase)-3水平。结果 与对照组小鼠相比，阿霉素可以导致小鼠心功能受损(P<0.05),心肌损伤标志物水平升高(P<0.05),而甜菜碱可以保护小鼠心功能(P<0.05),降低心肌损伤标志物水平(P<0.05)。与对照组小鼠相比，阿霉素导致心脏中丙二醛、4-羟基壬烯醛水平升高(P<0.05),以及抗氧化酶(超氧化物歧化酶-2、谷胱甘肽过氧化物酶-1、过氧化氢酶)的mRNA水平降低(P<0.05),甜菜碱可以降低丙二醛、4-羟基壬烯醛水平(P<0.05),上调抗氧化酶(超氧化物歧化酶-2、谷胱甘肽过氧化物酶-1、过氧化氢酶)的mRNA水平(P<0.05)。与对照组小鼠相比，阿霉素可以导致小鼠心脏中caspase-3活性增加(P<0.05),TUNEL阳性细胞增多(P<0.05),甜菜碱处理可以降低caspase-3活性，降低TUNEL阳性细胞率(P<0.05)。与对照组小鼠相比，阿霉素小鼠心脏中AKT的活性降低，GSK-3β的活性增加(P<0.05),而甜菜碱可以增加AKT的活性，降低GSK-3β的活性(P<0.05)。结论 甜菜碱可以减轻阿霉素引起的心脏氧化应激损伤和心肌细胞凋亡，而这些作用可能是通过激活AKT/GSK-3β实现的。

为了解临床猪圆环病毒混合感染及其遗传进化情况,利用PCV寻找更多检测试剂盒对10份疑似感染PCV的患病猪的病料进行检测,并对阳性样品进行全基因组克隆与测序分析。结果显示:10份样品中,PCV1均为阴性,PCV2阳性率为90%,PCV3阳性率为30%,PCV2与PCV3混合感染率为30%。全基因组遗传进化结果显示:9株PCV2毒株全序列间的核苷酸同源性为94.5%—100.0%,此网站分属PCV2a、PCV2b、PCV2d和PCV2e基因型,其中PCV2d为优势基因型,占比达Infection types55.56%。3株PCV3毒株全序列之间核苷酸同源性为99.2%—99.8%。对Cap蛋白氨基酸序列分析发现,PCV3毒株与PCV2毒株的亲缘性较远,氨基酸同源性仅为43.9%—45.1%。PCV3毒株的Cap蛋白抗原指数与参考菌株间差异较小,5株PCV2d毒株的Cap蛋白抗原指数较疫苗株有明显差异。综上,在临床PCV2患病猪中PCV2d为优势基因型,且存在一定比例的PCV2与PCV3混合感染现象。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.aureus)是一种常见的致病微生物和重要的医院内感染细菌。目前耐药和多耐药金黄色葡萄球菌的不断出现和传播,传统的抗生素治疗已经逐渐的失去作用。因此,急需开发研究新型有效的生物绿色抑制剂来控制金黄色葡萄球菌。噬菌体裂解酶是双链DNA噬菌体感染细菌后期表达的能够消化细菌细胞壁的一种酶。它可以从外部通过破坏细菌细胞壁肽聚糖,导致细菌渗透性裂解,从而达到杀菌的效果。目前很多研究已经证实,裂解酶具有巨大的杀菌潜力。本研究中,我们从金黄色葡萄球菌的噬菌体中筛选到一个能够高效裂解金黄色葡萄球菌的新的噬菌体裂解酶,命名为LysDZ25。我们利用大肠杆菌表达体系对其进行表达和纯化,研究了其基本酶学性质,发现LysDZ25对血清和NaCl溶液均具有良好的耐受性,因此有较好点击此处的应用潜力。但是LysDZ25热稳定性较差,在37℃及以上温度保温20min活性基本丧失。为了提高LysDZ25的裂解活性和热稳定性,使用本实验室自主开发的机器学习方法(machine learning methods,MDL)理性设计突变体,通过两轮点突变及组合突变,获得了活性和热稳定性提高的突变体S333V/N245R/D299L。该突变蛋白裂解活性是LysDZ25的8倍,在37℃保温20 min活性几乎不减弱,40℃保温20 min活性保留三分之一。在37℃条件下,该突变蛋白的半衰期由LysDZ25的15 min提高到55-60 min。利用RoseTTAFold软件工具构建LysDZ25三维(3D)结构,发现LysDZ25包含三个结构域,即N端半胱氨酸和组氨酸依赖性酰胺水解酶/肽酶催化结构域(CHAP)、中心酰胺酶催化结构域(AmiC)、C端细胞壁结合结构域(SH3b),结构域之间分别由两个连接序列(linker)L1和L2连接。我们通过构建AmiC和SH3b与GFP的融合蛋白和结构域重组蛋白,探究了各结构域的功能。研究结果表明在LysDZ25中,CHAP结构域发挥主要裂解活性,SH3b发挥结合金黄色葡萄球菌细胞壁的功能,首次发现AmiC具有结合金黄色葡萄球菌细胞壁的能力,且缺失后裂解活性有所提高。并且通过各结构域以及连接序列的组合,得到了具有更高裂解活性的重组蛋白CHAP+L1+SH3b和CHAP+L2+SH3b,裂解活性分别是LysDZ25的2倍和1.7倍。进一步对这两个结构域重组蛋白的连接序列进行截短,发现从N端向C端截去7-8个氨基酸,重组蛋白的裂解活性得到进一步提高。综上所述,本文利用大肠杆菌表达体系成功表达了金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysDZ25,并对其性质进行研究。通过理性设计和实验验证,我们获得了突变体蛋白,其裂解活性和热稳定性均有所提高,这将有助于该酶在实际生产中的应用,对噬菌体裂解酶BI 10773采购的分子改造有积极的指导意义。此外,我们还对LysDZ25的结构域进行拆分并探究各结构域的功能,在组合不同结构域和Cathodic photoelectrochemical biosensor连接序列后得到了具有更高裂解活性的重组蛋白。该工作对噬菌体裂解酶的分子改造有积极的指导意义,也为开发金黄色葡萄球菌的高效、新型生物抑制剂奠定了坚实基础。

该研究旨在应用定量蛋白质组学技术探讨交泰丸对慢性不可预知温和刺激(chronic unpredictable mild stress, CUMS)抑郁模型大鼠海马区蛋白表达的影响，进而研究其抗抑郁机制。将SD大鼠随机分为对照组、模型组、交泰丸组及氟西汀组，每组8只。除对照组外，其余3组大鼠进行4周CUMS造模，以建立抑郁模型。连续给药4周后，分析各组大鼠行为学及海马组织病理形态变化。提取海马组织蛋白，运用定量蛋白质组学技术比较各组间差异表达蛋白(differentially expressed proteins, DEPs),并进行生物信息学分析。采用蛋白免疫印迹(Western blot)法验证关键DEPs。结果显示，交泰丸可显著改善CUMS抑郁模型大鼠的抑郁样行为及海马组织病理形态。从大鼠海马组织中共鉴定出5 412个蛋白，其中对照组与模型组间有65个DEPs,交泰丸组与模型组间有35个DEPs。交泰丸组与对照组变化趋势相一致的DEPs共有16个，DNA Damage/DNA Repair抑制剂上述DEPs主要涉及鞘脂信号通路、AMPK信号通路及多巴胺能突触等信号通路。此外，Western blot检测各组大鼠海马区Pppmedical subspecialties2r2b、Cers1及Ndufv3蛋白，与蛋白质组学结果一致。综上寻找更多可得，交泰丸可能通过影响Ppp2r2b、Cers1、Ndufv3等蛋白水平，调控鞘脂信号通路、AMPK信号通路及多巴胺能突触，从而发挥抗抑郁作用。

目的:比较剖宫产术中在胎儿前肩娩出后缩宫素的不同给药方式对预防产后出血的临床疗效观察。方法:本研究采用前瞻性研究,取2020.12至2022.12在沧州市中心医院住院行剖宫产术分娩的200例病例。随机入组方法,采用随机序列软件产生随机序列数。然后按患者就诊顺序,依次从前至后取用随机序列数分为A、B两组。A组(n=100)在胎儿前肩娩出后,3IU缩宫素第一次静脉推注,三分钟后评估生命体征,3IU缩宫素第二次静脉推注,三分钟后再次评估生命体征,最后4IU缩宫素入500ml液体维持静点;B组(n=100)在胎儿前肩娩出后,10IU缩宫素入500ml液体维持静点。通过观察指标的统计学分析来评估产妇剖宫产术中术后出血量、血流动力学稳定、用药后出现不良反应的情况。结果:A、B两组产妇一般情况对比无统计学意义,P>0.05。A组产妇在术中、术后各个阶段的出血量均小于B组产妇,P<0.05。A组产妇心动过速现象的比重小于B组产妇,A组产妇低血压现象的比重小于B组。A组产妇术中低血压、心动过速的发生率低于B组,P<0.05,具有统计学意义。两组产妇术前血红蛋白浓度对比无统计学意义,P>0.05;在术后血红蛋白浓度变化中有统计学意义,P<0.05;A、B两组用药前后血红蛋白浓度差值有统计学意义,P<0.05。A组与B组产妇在出现头晕、胸闷、面部潮红现象的比较中无统计学意义,PPF-03084014抑制剂>0.05;在上腹部疼痛、恶心、呕吐、其他不良反应上,A组给药的效果更理想,Padolescent medication nonadherence<0.05。用药之前,两组产妇的心率差异不大,P>0.05;用药后3min两组产妇心率变化有统计学意义,P<0.05;用药后6min两组产妇心率变化无统计学意义,P>0.05。A、B两组用药前与用药后3min产妇心率差值有统计学意义,P<0.05;A、B两组用药前与用药后6min产妇心率差值无统计学意义,P>0.05。用药之前,两组产妇血压差异不大,P>0.05;A、B两组用药后3min、6min产妇血压变化均有统计学意义,P<0.05;A、B两组用药前与用药后3min、6min产妇血压差值均有统计学意义,P<0.05。新生儿体重对比无统计学意义,P>0.05。A、B两组新生儿Apgar评分1分钟、5分钟、10分钟评分对比无明显差异,P>0.05,无统计学意义。结论:缩宫素“3-3-4”脉冲式给药相比于10IU缩宫素入500ml液体持续静点给药,可以减少剖宫产术中产时出血量、产后2小时出血量及产后24小时出血量。缩宫素“3-3-4”脉冲式给药相比于10IU缩宫素入500ml液体持续静点给药,能够减少剖宫产术中其他促宫缩药物的使用,减少子宫动脉结扎、子宫背带式缝合等手术操作,缩短手术时间,减少术中并发症的出现。缩宫素“3-3-4”脉冲式给药相比于10IU缩宫素入500ml液体持续静点给药,可以减少剖宫产术中产妇用药后的副作用,对产妇血压和心率的影响小。目前国内预防产后出血使用较多的缩宫素的剂量为20IU,但本实验在胎儿前肩娩出后使用缩宫素“3-3-4”脉冲式给药更符https://www.selleck.cn/products/PF-2341066.html合人体释放缩宫素的规律,且该方案疗效显著,是一种值得推荐的给药方式,可应用于临床,但具体效果仍需前瞻性的研究或进一步探讨证实。

板蓝根IsatidisJNJ-42756493细胞培养 Radix,为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根,性寒、味苦,治疗外感发热、温病初起、咽喉肿痛、温毒发斑、丹毒、痈肿疮毒,为双贝糖浆中的君药。双贝糖浆是由板蓝根等9味中药组成的复方制剂,临床应用历史悠久,疗效确切,但是其药效物质基础与有效成分的研究甚少。为了研究双贝糖浆的抗炎物质基础,本文基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS分析方法识别鉴定并比较板蓝根提取物与双贝糖浆化学成分与体内入血成分。通过网络药理学方法研究君药板蓝根的抗炎活性成分、核心靶点及作用机制,通过MTT法检测11个主要入血成分的细胞毒性,在细胞无毒性的安全剂量范围内,Griess法检测11个入血成分对LPS诱导的RAW 264.7小鼠巨噬细胞释放炎症介质一氧化氮(NO)的抑制作用,评价其抗炎活性。根据MTT法与Griess法的研究结果,筛选出NO活性理想的活性成分,进一步通过ELISA实验检测5个活性成分、板蓝根提取物与双贝糖浆对炎症因子TNF-α与IL-6的抑制作用,探讨板蓝根与双贝糖浆发挥抗炎作用的主要成分。对提升双贝糖浆的质量控制标准、完善其药效机制研究及指导其进一步的临床应用具有一定的意义。通过UHPLC-Q-Orbitrap HRMS方法在正、负离子模式下,分别检测并分析板蓝根提取物和双贝糖浆中的化学成分,板蓝根水提取物中共鉴定出71个化学成分,双贝糖浆中共鉴定出66个化学成分。通过比较发现苹果酸、9(S),10(S),11(R)-三羟基-12(Z),15(Z)-十八碳二烯酸、香草酸己碳糖、5-羟甲基糠酸、靛玉红在板蓝根提取物中可以鉴定出来,但是并未在双贝糖浆中发现。通过大鼠灌胃给予板蓝根提取物和双贝糖浆,眼眶静脉丛取血,基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS的方法分析其体内入血成分。4’-羟基-7-甲氧基异黄酮、5-羟甲基糠酸、苹果酸、次黄嘌呤、2,5-二羟基吲哚、4-甲氧基-2,3-吲哚二酮、3-(2’-羧基苯基)-4(3H)喹唑酮仅在板蓝根提取物组中入血,靛红、3-吲哚乙酰胺、邻氨基苯甲酸-7-O-β-D-吡喃葡萄糖酯、丁香酸仅在双贝糖浆组血清样品中可以检测到,38个共同的入血成分可能是入血发挥药效的主要成分。网络药理学结果显示,板蓝根中发挥抗炎作用的活性成分主要包含芸苔葡糖硫苷、半齿泽兰素、异牡荆素、羟基靛玉红等35个活性成分,33个板蓝根潜在抗炎靶点,主要为PTGS2,TNF,NOS2,MAPK14等,达到抗炎作用所涉及的通路主要有癌症信号通路、雌激素信号通路、甲状腺激素信号通路和神经活性配体受体相互作用等,符合中药多成分、多靶点、多通路的作用特点。通过体外抗炎实验,验证5-羟甲基糠醛、异牡荆素、半齿泽兰素、胞苷与色胺酮点击此处5个化学成分、板蓝根提取物与双贝糖浆对LPS诱导RAW 264.7细胞释放NO具有较强的抑制作用,异牡荆素、半齿泽兰素、色胺酮对LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞释放TNF-α与IL-6的抑制作用较好,板蓝根提取物Puerpal infection与双贝糖浆能明显地抑制TNF-α、IL-6的释放,并呈良好的剂量依赖性。综上所述,通过网络药理学方法筛选得到的君药板蓝根抗炎成分异牡荆素与半齿泽兰素,可以在板蓝根提取物与双贝糖浆给药组大鼠血清样品中检测出,有较好的抗炎活性。异牡荆素、半齿泽兰素为板蓝根与双贝糖浆的关键抗炎活性成分。

目的：探讨颗粒蛋白前体在博来霉素致肺纤维化小鼠肺组织中的表达。方法：选取C57BL/6小鼠36只，随机分为3组，博来霉素模型组向气管内灌注博来Bioactive peptide霉素（5 mg/kg）后第14、28天分批处死小鼠，Dolutegravir核磁生理盐水对照组注入等量的生理盐水。肺组织采SBE-β-CD用HE染色和Masson 染色观察小鼠肺组织炎症和纤维化情况，以免疫组化法检测颗粒蛋白前体在肺组织中的分布和表达，蛋白印迹法检测颗粒蛋白前体在小鼠肺组织中的蛋白表达水平。结果：光镜下观察发现，生理盐水对照组小鼠肺组织结构完整，少量炎症细胞浸润；博来霉素组小鼠肺组织结构破坏，炎症细胞浸润，呈弥漫性肺纤维化改变。免疫组化检测可见博来霉素组小鼠颗粒蛋白前体在肺泡巨噬细胞和肺泡上皮细胞中的阳性率明显高于生理盐水对照组，肺组织中PGRN 蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：PGRN可能参与了博来霉素致小鼠肺纤维化的过程。