ALK抑制剂

光动力治疗(PDT)是一种非侵入性的治疗方法,在癌症治疗领域备受关注。然而,外部激发光有限的组织穿透深度严重阻碍了PDT的进一步应用。近年来,研究者提出了自发光光动力治疗,用于克服光源渗透深度浅的难题。该方法是由化学发光底物、生物发光酶和长余辉发光材料,通过共振能量转移过程激发光敏剂,从而实现不需要外部光源的光动力治疗。然而,由于这些自发光光动力疗法缺乏对肿瘤部位的光照刺激,导致对肿瘤部位的选择性较差,使治疗效果受到限制。为此,研究者发展了一些内源性刺激响应型自发光PDT体系,能够有效提高肿瘤部位的治疗效果。然而,由于能量转移过程的响应方式有限,导致自发光PDT的内源性刺激仍局限于炎症部位和肿瘤微环境中过表达的氧化还原底物,如活性氧(ROS)、髓过氧化物酶(MPO)和谷胱甘肽(GSH)等,目前仍然缺乏能够用于早期肿瘤治疗的自发光PDT系统。Micro RNAs(miRNAs)是一类短的非编码单链RNA(通常为20-23个碱基),其异常表达与肿瘤的发生和发展密切相关。随着对miRNAs在疾病中的作用的深入研究,miRNAs响应型治疗在早期治疗中显示出巨大的潜力。基于此,在本论文中,我们构建了一种基于内源性miRNAs响应型化学发光共振能量转移(CRET)纳米system immunology系统以实现高效自发光光动力治疗。主要工作内容如下:1、内源性miRNAs响应型CRET纳米材料的制备与表征。通过水热法合成Ui O-66-NH_2,负载二氢卟吩e6(Ce6)和核酸发卡(H1),得到结构稳定的纳米材料Ui O-66-Ce6/H1。然后,对该纳米材料进行全面的表征。其性能研究表明,miRNA-21能够有效地激活Ui O-66-Ce6上的H1,并和游离的H2发生催化发卡自组装(CHA)反应,形成Ui O-VP-16生产商66-Ce6/H1-H2纳米复合物,同时,在MOFs上组装的DNAzymes能有效催化化学发光反应,通过CRET过程刺激邻近的光敏剂Ce6,从而生成大量活性氧(ROS)。2、内源性miRNAs响应型CRET纳米系统在肿瘤治疗中的应用。以人乳腺癌细胞(MCF-7)为细胞模型进行实验,证明了该纳米系统能够被细胞有效摄取,在化学发光底物的存在下,能够对细胞内miRNA-21实现特异性响应,Dibutyryl-cAMP细胞培养同时产生具有细胞毒性的ROS,从而导致癌细胞的凋亡。以MCF-7荷瘤小鼠为动物模型进行实验,证明了内源性miRNA响应型CRET纳米系统具有良好的体内抗肿瘤效果。总之,我们通过构建内源性miRNAs响应型CRET纳米系统,成功实现了肿瘤部位的响应性治疗,在癌症的精确治疗方面具有良好的应用前景。

氧化石墨烯(Graphene oxide,GO)是由碳原子以sp~2杂化形式单层形成二维网状结构的石墨烯的衍生物。它的二维空间平面含有-OH、-COOH、-O-、-C=O等多种含氧官能团,-COOH与-C=O可与胺基反应,可降低氧化石墨烯毒性,提高生物相容性。冬凌草甲素(Oridonin,ORI)为唇形科香茶菜属植物冬凌草的主要活性成分,结构属于贝壳杉烷型四环二萜类,对肿瘤细胞作用显著,但冬凌草甲素难溶于水,生物利用度低。本研NSC 127716生产商究以聚乙烯亚胺和叶酸为原料,通过酰胺反应修饰氧化石墨烯,并对其进行表征,再负载冬凌草甲素考察此制剂水溶性,稳定性,抗肿瘤活性及生物利用度。主要研究方法及结果如下:1.功能化氧化石墨烯复合材料(GO-PEI-FA)的制备以氧化石墨烯(GO)、聚乙烯亚胺(PEI)和叶酸(FA)为原料,利用酰胺反应制备功能化氧化石墨烯复合材料(GO-PEI-FA),并通过紫外光谱、红外光谱等手段,证明合成GO-PEI-FA复合材料。2.GO-PEI-FA-ORI制剂的制备及载药工艺的优化以包封率为评价标准,负载ORI,制备GO-PEI-FA-ORI制剂,通过单因素试验考察影响包封率的因素,最终选取叶酸的加入量,冬凌草甲素的浓度和GO-PEI-FA复合载体的浓度三个因素设计Box-Behnken实验,得GO-PEI-FA复合载体负载冬凌草甲素的最佳工艺为:叶酸的加入量为75.4 mg,冬凌草甲素的浓度为0.196 mg·m L~(-1),GO-PEI-FA复合载体的浓度为0.249 mg·m L~(-1)。以此最优条件下载药,包封率为93.83%,载药量为42.48%。3.GO-PEI-FA-ORI制剂理化性质考察及体外释放研究GO-PEI-FA-ORI制剂平均粒径为112.8 nm,PDI为0.174,zeta电位为28.9 m V,可在水、PBS、培养基和胎牛血清中更加稳定的分散。采用动态透析法,对GO-PEI-FA-ORI制剂进行体外释放实验,冬凌草甲素与GO-PEI-FA-ORI制剂体外释放呈p H依赖性,GO-PEI-FA-ORI制剂可缓慢持续地释放冬凌草LEE011细胞培养甲素。绘制累计释放曲线,进行动力学模型拟合,冬凌草甲素的体外释放行为符合一级动力学模型,GO-PEI-FA-ORI制剂的释放行为符合Ritger-Peppas方程模型。4.体外细胞实验采用CCK-8法考察冬凌草甲素、GO-PEI-FA-ORI制剂和GO-PEI-FA复合载体对人乳腺癌细胞(MCF-7)的生长抑制作用,GO-PEI-FA复合载体表现出低毒性,各实验组培养MCF-7细胞24 h,ORI原料药对MCF-7细胞的生长抑制作用强于GO-PEI-FA-ORI制剂,继续培养至48 h,72 h,GO-PEI-FA-ORI制剂对MCF-7细胞的生长抑制作用强于ORI原料药(P均<0.001)。通过激光共聚焦显微镜,考察MCF-7细胞对不同实验组的摄取能力,荧光图像显示,MCF-7细胞摄取GO-PEI-FA-ORI制剂的能力强于ORI原料药,且呈浓度依赖性。5.大鼠体内药代动力学实验对SD大鼠尾静脉注射冬凌草甲素溶液和GO-PEI-FA-ORI制剂,于5,15,30 min,1,2,4,6,8,12,24,48 h眼内眦静脉丛取血,测定血药浓度,计算得冬凌草甲素和GO-PEI-FA-ORI制剂在大鼠体内的半衰期分别为4.99 h和29.16 h,AUC_((0-t))分别为4.92μg·h·m L~(-1)和20.75μg·h·m L~(-1)。GO-PEI-FA-ORI制剂半衰期明显延长,相对于注射冬凌草甲素原料药来说,生物利用度提高。本研究通过酰胺反应制备得到了功能化氧化石墨烯复合材料,用于负载ORI药物,得到负载率高、稳定性好、副作用小、作用时间长的GO-PEI-FA-ORI制剂,为氧connected medical technology化石墨烯的功能化研究提供理论依据。

目的 分析心理疏导配合认知教育对老年高血压伴抑郁症患者血压、情绪控制效果的影响。方法 选取2021年3月至2022年8月期间该院收治的80例老年高血压伴抑郁症患者为研究对象，并依据GSKJ4患者的护理方式差异将其分入观察组（40例）和对照组（40例），对照组老年患者采用常规护理，观察组老年患者在常规护理上实施心理疏导配合认知教育。比较两组高血压伴抑郁症患者护理前后血压水平、护理后情绪状况（指标包括：焦虑、抑郁）、生活质量评分（指标包括：睡眠评分、精神评分、体力评分、食欲评分）改善情况。结果 两组高血压伴抑郁症患者护理前睡眠评分、精神评分、体力评分、食欲评分等生活质量评分和焦虑、抑郁等情绪状况评分以及血压水平biomimetic transformation相比无明显差异（P>0.05），护理后两组高血压伴抑郁症患者以上评分均显著改善（P<0.05），且观察组高血压伴抑郁症患者睡眠评分、精神评分、体力评分、食欲评分等生活质量评分和焦虑、抑郁等情绪状况评分以及血压水平改善情况均显著优于对照组（P<0.05）。结论 心理疏导配合认知教育能GDC-0068有效提升老年高血压伴抑郁症患者的血压控制水平，改善患者的不良情绪状况，提升患者的生活质量。

研究背景:补骨脂是临床常用的补益类中药,具有补肾壮阳,温脾止泻等功效,多用于治疗肾虚阳痿、腰酸冷痛、骨质疏松等多种疾病,然而,近年来补骨脂及其相关制剂导致肝损伤不良反应的事件频繁发生。课题组前期通过大量的临床病例和基础研究,证明了补骨脂可导致特异质肝损伤,且具有免疫特异质属性。但是,迄今补骨脂致特异质损伤的易感物质及作用机制尚不清楚,难以形成有针对性的补骨脂安全用药风险防控策略。为此,本文拟对补骨脂特异质肝损伤的物质基础和作用机制开展探索性研究,以期为科学制定补骨脂及其相关制剂肝损伤风险防控策略提供参考依据。研究目的:本研究旨在探索补骨脂特异质肝损伤的主要易感物质及selleck作用机制,并根据相应的成因机制制定补骨脂安全用药风险防控策略。研究方法:1.基于小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs),构建LPS诱导的体外炎症小体激活模型,筛选补骨脂特异质肝损伤易感成分。采用Western Blot(WB)技术检测补骨脂中活性成分对炎症小体激活相关蛋白caspase-1 p20表达的影响、以酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎症小体激活下游炎症因子IL-1β、TNF-α的含量。2.建立LPS诱导的小鼠免疫应激模型,对比易感成分在正常状态及免疫应激状态下导致肝损伤的情况。以赖氏法、ELISA、QRT-PCR法测定血清中AST、ALT、IL-1β、TNF-α和肝脏IL-1β、IL-18、TNF-α含量,采用WB技术检测小鼠肝脏组织中caspase-1 p20蛋白表达,进一步地,利用H&E染色法观察各组小鼠肝脏病理学变化。3.在LPS诱导的炎症小体活化模型基础上,分别用药理学(NLRP3拮抗剂MCC950、NLRC4拮抗剂echinatin、AIM2拮抗剂ODN)和遗传学(Nlrp3基因敲除、靶向干扰Aim2基因)阻断/敲除/干扰NLRP3、NLRC4、AIM2炎症小体激活,并观察对易感成分诱导炎症小体活化的影响。采用WB法分别检测细胞上清caspase-1 p20蛋白表达变化,以ELISA检测法测定细胞上清IL-1β、TNF-α含量变化。4.在易感成分激活炎症小体的基础上,检测易感成分对炎症小体激活相关上游靶标的影响,明确其激活炎症小体的机制。采用WB技术分析易感成分对炎症小体激活相关的ASC寡聚化的影响;以流式细胞术测定易感成分对线粒体膜电位及ROS产生的影响;利用免疫荧光检测法观察易感成分对线粒体形态及细胞内炎症小体组装相关蛋白结合的影响。5.以系统辨靶论治为指导思想,提出基于效应靶标互作的补骨脂肝毒性防控策略。将甘草中抑制炎症小体活化的成分甘草多糖、刺甘草查尔酮分别与补骨脂中激活炎症小体的成分进行组分配伍,采用WB法检测组分配伍前后caspase-1p20蛋白及ASC寡聚变化、以ELISA法测定配伍前后IL-1β、TNF-α的含量变化。研究结果:1.本课题在前期建立的体外肝损伤药物筛选评价体系基础上,研究了补骨脂中多种活性成分对炎症小体的调节作用。结果表明补骨脂中单萜酚类成分补骨脂酚(Bakuchiol,Bak)、香豆素类成分补骨脂定(psoralidin)均可诱导caspase-1p20蛋白表达、显著增加细胞上清IL-1β和TNF-α的含量,表明两者均可激活炎症小体,且补骨脂酚激活效应更强,提示Bak可能是补骨脂特异质肝损伤的主要易感成分。2.基于LPS诱导的免疫应激小鼠模型,研究Bak致特异质肝损伤的作用。结果表明,Bak(15、30 mg/kg)在正常小鼠中不会诱导血清中ALT、AST、IL-1β、TNF-α含量增加,也不会增加肝脏中IL-1β、IL-18和TNF-α表达水平,且肝脏组织无炎性浸润、肝细胞完整,表明该给药剂量不会造成肝脏损伤;Bak(15、30mg/kg)在LPS诱导的免疫应激模型中可显著增加小鼠血清中ALT、AST、IL-1β、TNF-α和肝脏中IL-1β、IL-18、TNF-α表达,剂量依赖地增加肝脏caspase-1 p20蛋白表达,还可加重肝脏组织炎性浸润、肝细胞损伤等病理变化,表明Bak主要通过激活炎症小体从而导致免疫特异质肝损伤。3.基于LPS诱导的体外炎症小体激活模型,使用多种抑制剂(MCC950、echinatin、ODN)、Nlrp3基因敲除及靶向沉默Aim2基因表达,研究Bak诱导炎症小体激活的特异性。结果表明,MCC950、echinatin、敲除Nlrp3基因均不影响Bak诱导的caspase-1 p20蛋白表达及IL-1β、TNF-α的释放;AIM2抑制剂及干扰Aim2基因表达均可以显著抑制Bak诱导的炎症小体激活,表明Bak主要通过激活AIM2炎症小体诱导机体过度炎症反应从而导致特异质肝损伤。4.在Bak激活炎症小体的基础上,对AIM2炎症小体组装激活相关的调控靶标进行了研究。结果表明,Bak可诱导AIM2炎症小体激活相关的ASC寡聚化;通过对细胞线粒体的形态、膜电位、ROS进行观察和测定,发现Bak可损伤线粒体形态、降低线粒体膜电位、增加线粒体ROS的产生,推测Bak可能是通过诱导线粒体损伤使得线粒体DNA异常释放至胞质中而被AIM2感受器识别,激活AIM2炎症小体。进一步,通过免疫荧光法观察到Bak可促进胞质中DNA与AIM2聚合,表明NirogacestatBak主要是通过诱导线粒体损伤释放线粒体DNA从而激活AIM2炎症小体。5.分别Biomolecules将甘草多糖、刺甘草查尔酮与Bak、补骨脂定联合使用,发现组分配伍后可显著抑制Bak、补骨脂定诱导的caspase-1蛋白表达、ASC寡聚化以及炎症因子IL-1β、TNF-α的产生。以上结果表明,甘草中的组分如甘草多糖、刺甘草查尔酮可分别抑制Bak、补骨脂定诱导的炎症小体激活,起到基于效应靶标调控的配伍减毒作用。研究结论:本课题对补骨脂特异质肝损伤的易感成分及潜在机制进行了研究。采用体外免疫活化模型,筛选并发现了补骨脂中激活炎症小体的主要化学成分为Bak,并联合体内免疫应激模型明确了Bak是补骨脂特异质肝损伤的主要易感成分;系统地阐释了Bak激活AIM2炎症小体的作用特点及靶标机制;初步明确补骨脂-甘草组配伍可抑制补骨脂中多成分诱导的过度炎症反应。该课题揭示了补骨脂诱导特异质肝损伤的易感物质及可能的分子机制,提出了基于效应靶标互作的补骨脂肝毒性风险防控策略,为补骨脂临床安全用药提供了参考依据。

点柄粘盖牛肝菌(Suillus granulatus)是一种珍贵的野生食用菌,因其风味独特、营养丰富,而广受消费者喜爱。由于鲜品不易贮存,干制成为其生产中的主要加工方式。干制后的点柄粘盖牛肝菌具有更加浓郁的风味,但随着储藏时间的延长,其风味和营养品质大大降低。目前关于提升食用菌干制品风味的研究鲜有报道,因此探索可提高干制食用菌风味品质的处理技术具有重要意义。光照和氧气是影响食品风味和营养品质且易于调节的主要外界条件。光是一种复合光,具有能量,包括不同能量的单色光selleckchem Gefitinib-based PROTAC 3,可通过诱导某些光化学反应而影响食用菌品质。由于干制品大量失水,氧气对其影响或许远小于光照。包装是实现对光氧环境控制的一种最安全、方便、经济的方式。本研究以在60℃下干制的点GW4869细胞培养柄粘盖牛肝菌为研究对象,首先通过透光真空包装、避光真空包装、透光非真空包装、避光非真空包装四种包装方式比较了光和氧对干制点柄粘盖牛肝菌在储藏过程中风味品质的影响,明确光可提高其风味品质。为从光的组成上揭示其影响机制及推进该技术在食用菌加工产业中的应用,进而深入探究了不同能量的单色光对干制点柄粘盖牛肝菌风味、营养、复水性、质地和微观结构的影响,主要研究结果如下:(1)透光包装下鲜味氨基酸含量、等效鲜味浓度、电子舌鲜味评分和香气综合评分在储藏4-6个月时相对较高。苯乙酮、6-甲基-5-庚烯-2-酮和香叶基丙酮均在透光包装中含量较高,平均气味活性值分别为27、218和174,是干制点柄粘盖牛肝菌的关键香气成分。氧对干制点柄粘盖牛肝菌的风味无显著影响。因此,光可提高干制点柄粘盖牛肝菌的风味。(2)蓝光处理的干制点柄粘盖牛肝菌的鲜味氨基酸含量、5′-核苷酸含量、EUC值和电子舌鲜味得分、香气品质的综合得分均较高。五种光处理下的鲜味和香气均在光照6天和9天时较好。偏最小二乘判别分析表明不同光处理之间苯甲醛、甜味、芳樟醇、4-苯基吡啶、香叶基丙酮、天冬氨酸、谷氨酸、2,5-二甲基吡嗪、四甲基吡嗪、1-辛烯-3-醇、5-庚烯-2-醇、苯乙醇和甲基庚烯酮的差异是导致风味差异的主要原因。(3)蓝光处理的干制点柄粘盖牛肝菌中可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、黄酮含量、多酚含量和复水比均相对较高且在光照6天Medical care时最高,复水后的硬度和弹性等质构值相对较低。蓝光处理下的孔隙结构更为清晰,孢子损伤程度最大,这从微观结构角度揭示了蓝光处理下干制点柄粘盖牛肝菌的复水性、质地和营养品质相对较好的原因。综上,光可提高干制点柄粘盖牛肝菌的风味品质,蓝光下不仅具有最佳的风味,也具有较好的营养及复水特性。因此,蓝光可作为提高干制食用菌品质的一种简单高效的处理技术。本研究在干制食用菌品质改善上具有一定的理论意义和良好的应用前景。

点柄粘盖牛肝菌(Suillus granulatus)是一种珍贵的野生食用菌,因其风味独特、营养丰富,而广受消费者喜爱。由于鲜品不易贮存,干制成为其生产中的主要加工方式。干制后的点柄粘盖牛肝菌具有更加浓郁的风味,但随着储藏时间的延长,其风味和营养品质大大降低。目前关于提升食用菌干制品风味的研究鲜有报道,因此探索可提高干制食用菌风味品质的处理技术具有重要意义。光照和氧气是影响食品风味和营养品质且易于调节的主要外界条件。光是一种复合光,具有能量,包括不同能量的单色光selleckchem Gefitinib-based PROTAC 3,可通过诱导某些光化学反应而影响食用菌品质。由于干制品大量失水,氧气对其影响或许远小于光照。包装是实现对光氧环境控制的一种最安全、方便、经济的方式。本研究以在60℃下干制的点GW4869细胞培养柄粘盖牛肝菌为研究对象,首先通过透光真空包装、避光真空包装、透光非真空包装、避光非真空包装四种包装方式比较了光和氧对干制点柄粘盖牛肝菌在储藏过程中风味品质的影响,明确光可提高其风味品质。为从光的组成上揭示其影响机制及推进该技术在食用菌加工产业中的应用,进而深入探究了不同能量的单色光对干制点柄粘盖牛肝菌风味、营养、复水性、质地和微观结构的影响,主要研究结果如下:(1)透光包装下鲜味氨基酸含量、等效鲜味浓度、电子舌鲜味评分和香气综合评分在储藏4-6个月时相对较高。苯乙酮、6-甲基-5-庚烯-2-酮和香叶基丙酮均在透光包装中含量较高,平均气味活性值分别为27、218和174,是干制点柄粘盖牛肝菌的关键香气成分。氧对干制点柄粘盖牛肝菌的风味无显著影响。因此,光可提高干制点柄粘盖牛肝菌的风味。(2)蓝光处理的干制点柄粘盖牛肝菌的鲜味氨基酸含量、5′-核苷酸含量、EUC值和电子舌鲜味得分、香气品质的综合得分均较高。五种光处理下的鲜味和香气均在光照6天和9天时较好。偏最小二乘判别分析表明不同光处理之间苯甲醛、甜味、芳樟醇、4-苯基吡啶、香叶基丙酮、天冬氨酸、谷氨酸、2,5-二甲基吡嗪、四甲基吡嗪、1-辛烯-3-醇、5-庚烯-2-醇、苯乙醇和甲基庚烯酮的差异是导致风味差异的主要原因。(3)蓝光处理的干制点柄粘盖牛肝菌中可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、黄酮含量、多酚含量和复水比均相对较高且在光照6天Medical care时最高,复水后的硬度和弹性等质构值相对较低。蓝光处理下的孔隙结构更为清晰,孢子损伤程度最大,这从微观结构角度揭示了蓝光处理下干制点柄粘盖牛肝菌的复水性、质地和营养品质相对较好的原因。综上,光可提高干制点柄粘盖牛肝菌的风味品质,蓝光下不仅具有最佳的风味,也具有较好的营养及复水特性。因此,蓝光可作为提高干制食用菌品质的一种简单高效的处理技术。本研究在干制食用菌品质改善上具有一定的理论意义和良好的应用前景。

目的:对于由肿瘤、外伤以及炎症等原因导致的骨缺损,机体的自我修复能力受限,而目前尚无理想的骨替代材料能够促进缺损的骨组织再生。本研究采用挤压式三维(Three-dimension,3D)打印技术制备负载阿仑膦酸钠(Alendronate,ALN)的多孔纳米羟基磷灰石(Nano-hydroxyapatite,nHA)/海藻酸钠(Sodium alginate,SA)/聚己内酯(Polycaprolactone,PCL)复合支架,以模仿骨组织的构造和力学性能IgE-mediated allergic inflammation;采用各种表征手段探究该支架的材料属性、药物缓释能力以及体外生物学行为,以初步探索其作为人工植入物的应用前景。方法:(1)将不同含量的nHA(分别为50wt%、60wt%、70wt%)与SA共混获得均匀的打印墨水,通过测试各组墨水的流变性来评估其打印的可行性;(2)采用挤压式3D打印机按照预定的设计进行支架的打印,并分别命名为nHA50、nHA60和nHA70支架。随后采用浸渍法将PCL组装到复合支架表面,得到的支架分别命名为nHA50P、nHA60P和nHA70P支架;(3)采用扫描电子显微镜(Scanning electron microscope,SEM)、傅里叶变换红外光谱仪(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)、X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)对支架的形貌、结构及组分进行表征,并进行孔隙率检测;(4)检测所有支架的机械性能、亲水性能和溶胀性能,以评估是否达到组织工程支架的应用要求;(5)将ALN载入性能更为优异的nHA60P支架和作为对照组的nHA60支架中,获得nHA60P-ALN和nHA60-ALN支架并进行FTIR检测。同时在14天中定期收集支架的浸提液进行吸光度(Optical density,OD)的检测,分析PCL涂层对支架中ALN的控缓释作用;(6)采用CCK-8法对nHA60、nHA60P和nHA60PALN支架的细胞毒性及促增值能力进行检测。结果:(1)不同nHA含量的打印墨水均具有剪切变稀的能力,且支撑性良好,符合挤压式3D打印的要求;(2)nHA50、nHA60和nHA70支架均按照预定的形状打印成型,nHA50P、nHA60P和nHA70P支架的涂层均匀涂覆于表面,所有支架的孔隙规则且相互连通,具有良好的成形性;(3)SEM结果显示,所有支架表面呈现凹凸不平的粗糙表面,内部则为疏松的多孔结构,有利于细胞的生长活动。FTIR和XRD结果显示,复合支架中存在nHA、SA和PCL成分且性质没有发生明显的改变。六组支架的孔隙率在86-91%之间,提供了较大的表面积便于细胞的粘附生长;(4)力学实验显示,随着nHA比例的提高,nHA50、nHA60和nHA70无涂层支架与nHA50P、nHA60P和nHA70P涂层支架的压缩强度和模量均呈STM2457纯度现先增加后减少的趋势,且PCL涂层支架均高于无涂层支架,因此nHA60P支架的压缩强度最高,达到了16 MPa。亲水性实验显示,PLX-4720说明书nHA50、nHA60和nHA70支架的接触角依次降低(P<0.05),而nHA50P、nHA60P和nHA70P支架的接触角因其表面涂覆PCL有所增加,但均小于90°,依然可定义为亲水性材料。溶胀实验表明所有复合支架均在12 h后达到溶胀平衡,其中以nHA60P支架的溶胀率最低,这有助于支架在植入体内后保持良好的结构稳定性;(5)对nHA60-ALN和nHA60P-ALN进行FTIR检测,显示ALN被成功的载入且其性质未发生明显改变。药物缓释实验表明,与nHA60-ALN支架相比,nHA60P-ALN支架的药物释放曲线更为平缓,因此PCL涂层可以延长ALN的释放时间,起到很好的控缓释作用;(6)细胞毒性实验显示成骨细胞在nHA60、nHA60P和nHA60P-ALN支架浸提液中的生存率均高于80%,且在支架中载入0.5wt%的ALN并不会影响成骨细胞的活动。随后将各组支架与成骨细胞共培养,各组支架材料均可以促进成骨细胞的增殖,且以nHA60P-ALN支架的促增殖效果最佳。结论:将nHA与SA结合,再辅以性能优良的PCL和促进成骨细胞增殖的ALN,最终制备出来的载药复合支架具有疏松多孔的微观结构、优良的力学性能、较好的亲水性、适宜的溶胀性、良好的药物缓释作用和生物相容性等特性,为临床修复骨缺损提供了一种新的候选材料,并为ALN在组织工程的应用打下了坚实的基础。

目的:非小细胞肺癌发病率高,5年生存率低。肺癌的早期诊断和治疗决定其预后。有研究显示,与p元素诱导的睾丸萎缩(P-element Induced Wimpy Testis,PIWI)蛋白相互作用的核糖核酸(PIWI-interacting RNA,piRNA)对肿瘤发生发展起着重要的调控作用。本研究首先在人血清外泌体中筛选出差异表达的piR-hsa-164586,并进一步探究其对人非小细胞肺癌的诊断价值及相应的调控机制。方法:高通量测序筛选人非小细胞肺癌组织和癌旁组织中差异性表达的piRNAs;实时定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)检测非小细胞肺癌患者与健康人血清外泌体、非小细胞肺癌细胞与肺正常上皮细胞中piR-hsa-164586的差异性表达,并通过q RT-PCR检测血清外泌体中的piR-hsa-164586在室温环境中的稳定性;低浓度脱氧核糖核苷三磷酸反转录-PCR扩增实验(Reverse Transcription at Low dNTP concentrations followed PCR,RTL-P)检测piR-hsa-164586 3’端存在甲基化的特征;荧光原位杂交(FluorescRAD001采购ence in-situ hybridization,FISH)实验观察piR-hsa-164586的细胞定位;受试者操作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线比较piR-hsa-164586与细胞角蛋白19片段(Cytokeratin-19-fragment,CYFRA21-1)对人早期非小细胞肺癌的诊断效能。分别将piR-hsa-164586过表达和敲低,通过在A549和HCC2279细胞及裸鼠体内验证piR-hsa-164586在非小细胞肺癌中发挥的调控作用;核醣核酸交互作用沉降(RNA pull down)实验获得与piR-hsa-164586结合的蛋白,进行蛋白质谱分析后进一步通过RNA pull down实验和核醣核酸结合蛋白免疫共沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)实验,验证piR-hsa-164586与靶标蛋白的结合关系;最后通过q RT-PCR、蛋白免疫印迹和组织免疫荧光染色实验从m RNA水平和蛋白水平验证piR-hsa-164586对下游靶标蛋白的调控作用。结果:(1)piR-hsa-164586在非小细胞肺癌患者的血清外泌体和肺腺癌细胞A549、肺鳞癌细胞HCC2279中的表达水平显著高于健康人和人正常肺上皮细胞BEAS-2B(P<0.05),且在核糖核酸酶A非处理组和处理组中无明显统计学差异(P=0.1418),在室温下放置12、24、48小时不同时间段也无明显统计学差异(P=0.3625);RTL-P实验发现piR-hsa-164586在低浓度脱氧核糖核苷三磷酸下无法完成反转录;FISH实验发现,用吲哚三碳菁标记的piR-hsa-164586主要在A549和HCC2279胞核内检测到;(2)ROC曲线结果表明,piR-hsa-164586对人早期非小细胞肺癌的诊断效能高于临床常用的CYFRA21-1,其曲线下面积为0.623(95%置信区间:0.527-0.720),敏感度为0.535,特异性为0.587;(3)Ed U细胞增殖实验结果表明,在A549细胞中将piR-hsa-164586过表达,细胞增殖活力为49.06%±6.5%,显著高于对照组31.20%±3.19%(P<0.05);在HCC2279细胞中将piR-hsa-164586过表达,细胞增殖活力为60.16%±6.40%,也显著高于对照组35.90%±2.85%(P<0.05);CCK-8细胞增殖实验结果显示,在24、48、72、96h,piR-hsa-164586过表达后A549和HCC2279细胞增殖活力显著增强(P<0.05);流式细胞术结果表明,在A549细胞中将piR-hsa-164586过表达,细胞凋亡率为6.97%±0.96%,显著低于对照组12.06%±1.41%(P<0.05);在HCC2279细胞中细胞凋亡率为13.77%±0.82%,也显著低于对照组15.66%±0.50%(P<0.05);划痕实验结果表明,在A549细胞中将piR-hsa-164586过表达,细胞迁移率为44.27%±3.07%,显著高于对照组26.02%±5.55%;在HCC2279细胞中细胞迁移率为50.40%±2.66%,也显著高于对照组33.52%±1.93%(P<0.05)。细胞迁移(Transwell)实验结果表明,在A549细胞中将piR-hsa-164586过表达,细胞迁移数目是6347±967个,显著多于对照组3331±644个(P<0.05Berzosertib生产商);HCC2279细胞细胞迁移数目是349±57个,显著高于对照组211±35个(P<0.05)。在A549和HCC2279细胞中敲低piR-hsa-164586,上述功能实验则产生了相反的结果(P<0.05)。(4)裸鼠皮下成瘤实验发现,过表达piR-hsa-164586后肿瘤的体积显著增大,重量显著升高;ki67荧光信号为66.80%±8.25%,显著高于对照组20.35%±1.72%(P<0.05);α-SMA阳性率为59.76%±1.99%,显著高于对照组43.97%±5.40%(P<0.05);CD31的阳性个数为44.67±3.68,显著多于对照组34.00±2.45(P<0.05),而敲低piR-hsa-164586则产生相反的结果(P<0.05)。(5)Pulldown和RIP实验结果表明,piR-hsa-164586可以与肌球蛋白重链9(myosin heavy polypeptide 9,MYH9)相互结合,且过表达piR-hsa-164586可以从m RNA和蛋白质水平上调MYH9的表达(P<0.05);(6)Transwell实验显示,敲低MYH9会使A549细胞迁移数目减少,过表达piR-hsa-164586会导致细胞迁移数目显著增加。同时将MYH9和piR-hsa-164586敲低,会使细胞迁移数目进一步减少;敲低MYH9,会显著减少过表达piR-hsa-164586引起的细胞迁移数目(P<0.05)。结论:1.在非小细胞肺癌患者的血清外泌体和细胞中,piR-hsa-164586的表达明显高于健康人的血清外泌体和正常肺上皮细胞。2.piR-hsa-164586可在血清外泌体中稳定存在,对早期非小细胞Anti-biotic prophylaxis肺癌的诊断效能优于临床常用的生物标志物CYFRA21-1。3.过表达piR-hsa-164586在体内外会促进非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和血管生成能力但抑制凋亡,敲低piR-hsa-164586则会产生相反的作用。4.piR-hsa-164586在非小细胞肺癌细胞内主要通过与MYH9相互作用,促进癌细胞的迁移。

目的 探讨大车前苷在小鼠脓毒症心肌损伤中的作用。方法 选取8～10周龄的雄性C57/BL6小鼠40只，根据处理方式不同将小鼠随机分为4组：生理盐水+生理盐水组、生理盐水+大车前苷组、脂多糖+生理盐水组、脂多糖+大车前苷组，每组10只。脂多糖+生理盐水组与脂多糖+大车前苷组小鼠接受单次腹腔注射脂多糖(10 mg/kg),以构建小鼠脓毒症模型；生理盐水+生理盐水组与生理盐水+大车前苷组小鼠接受同等体积生理盐水腹腔注射。生理盐水+大车前苷组与脂多糖+大车前苷组小鼠给予连续5 d的大车前苷50 mg/(kg·d)灌胃干预，生理盐水+生理盐水组与脂多糖+生理盐水组进行同等体积生理盐水灌胃。实验第1天，先给予小鼠连续5 d大车前苷确认细节50 mg/(kg·d)或生理盐水灌胃，第5天给予小鼠单次腹腔注射脂多糖(10 mg/kg)或者等体积生理盐水，饲养12 h后检测心功能并取材。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测超氧化物歧化酶2 (SOD-breast pathology2)、谷胱甘肽过氧化物酶-1 (GPX-1)和过氧化氢酶(CAT)和相关炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)和白细胞介素-4 (IL-4)]的mRNA水平。用检测试剂盒检测丙二醛(MDA)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、GPX-1、TNF-α和MCP-1以及Caspase-3的水平；检测血液中心肌肌钙蛋白I(cTnI)、乳酸脱氢酶(LDH)水平；用TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平。结果 与生理盐水+生理盐水组小鼠相比，脂多糖+生理盐水组小鼠的心率、左室射血分数以及左室短轴缩短率降低，心肌损伤标志物cTnI、LDH水平升高，差异有统计学意义(P<0.05);大车前苷可恢复小鼠的心率、左室射血分数、左室短轴缩短率，以及降低心肌损伤标志物cTnI和LDH的水平，提高小鼠生存率(P<0.05)BAY 73-4506。与脂多糖+生理盐水组小鼠相比，脂多糖+大车前苷组小鼠心脏中MDA、4-HNE的水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)。大车前苷可降低小鼠心脏中炎症因子表达、Caspase-3的活性、细胞凋亡水平(P<0.05)。结论 大车前苷可以减轻脂多糖诱导的小鼠心肌细胞损伤，改善其心功能。

目的 研究吲哚丙酸（IPA）对溃疡性结肠炎（UC）小鼠肠道巨噬细胞和肠道菌群的调节作用。方法 将SPF级6～8周龄雄性C57BL/6小鼠按随机数表法分为对照组、葡聚糖硫酸钠组（DSS模型组，饮用3%DSS7 d）及IPA组（在DSS给药前2 d行IPA灌胃），每组12只。每日观察小鼠体质量变化；DSS给Critical Care Medicine药第7天处死小鼠，测量结肠长度及评定病理学评分，采用流式细胞术检测肠道巨噬细胞M1/M2比例，并用16S r RNA基因测序技术检测肠道菌群的变化。结果 与对照组比较，DSS模型组小鼠体质量显著下降，结肠组织病理学评分、肠道巨噬细胞M1/MAlisertib供应商2比值显著升高，结肠长度显著缩短（均P<0.05）；与DSS模型组比较，IPA组小鼠体质量下降程度降低，结肠长度增BMN 673纯度加，结肠组织病理学评分、肠道巨噬细胞M1/M2比值均降低（均P<0.05）；增加了肠道菌群丰度及多样性，显著增加了普雷沃菌属丰度，减少了拟杆菌属和肠球菌属的丰度。结论 IPA可以通过调节肠道巨噬细胞M1/M2的比例和增加肠道菌群多样性缓解UC小鼠的症状。