ALK抑制剂

旨在通过mtDNA ND1探究6个西藏特色牦牛群体的遗传多样性、系统进化及亲缘关系，为西藏牦牛的遗传多样性、历史演化以及遗传资源保护与利用等提供理论依据。利用PCR和直接测序法分别测定了西藏帕里牦牛、嘉黎牦牛、工布江达牦牛、斯布牦牛、江达牦牛、类乌齐牦牛6个群Hepatocyte fraction体共95头个体ND1基因蛋白质编码区(CDS)序列，利用DNAMAN、DNASP 5.1、Mega 7.0、Arlequin 3.5.2等软件分析其序列多态性、单倍型多样性、遗传距离等，并构建单倍型selleck VX-765网络图及系统发育树。结果表明，西藏牦牛群体ND1基因CDS区序列长度均为956 bp,共检测获得78个变异位点和16种单倍型，平均单倍型多样性(Hd)及核苷酸多样性(Pi)分别为0.670和0.004 21,Tajima′s D均为负值；根据群体遗传差异的分子方差分析可知，西藏牦牛群体内的变异程度大于群体间变异；斯布牦牛与嘉黎牦牛之间的分化程度较大，其余大部分群体间的分化程度为中等或较弱。此外，通过聚类分析发现，类乌齐牦牛单独聚为一类，而嘉黎牦牛、工布江达牦牛、斯布牦牛、江达牦牛先聚为一类，然后再与帕里牦牛聚为一大类；16种单倍型可分为2个聚类簇，说明西藏牦牛可能存在2个母系起源；与其他牛种进行聚类分析，发现家牦牛、爪哇野牛和普通牛可能是西CH-223191体内藏牦牛的混合母系起源。西藏牦牛遗传多样性十分丰富，其中类乌齐牦牛遗传多样性最丰富，6个牦牛群体存在2个母系起源。

目的 以巨噬细胞源AZD2281化学结构外泌体为切入点，观察糖肾宁对体外高糖诱导的小鼠肾小球足细胞炎症反应的影响，探讨其保护足细胞的可能机制。方法 采用糖肾宁干预高糖条件培养的巨噬细胞，分为正常组、高糖组、糖肾宁组，干预48小时后，提取各组细胞上清液中外泌体，将各组外泌体分别干预高糖和非高糖条件培养的小鼠肾小球足细胞，分为正常外泌体—高糖组、高糖外泌体—高糖组、糖肾宁外泌体—高糖组、正常外泌体—非高糖组、高糖外泌体—非高糖组、糖肾宁外泌体—非高糖组、无外泌体—高糖组和无外泌体—非高糖组等8个组。48小寻找更多时后，收集各组细胞并进行相关检测。CCK-8法检测各组细胞活力，酶联免疫法检测各组细胞上清液中炎症因子单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的蛋白表达情况，实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组细胞炎症因子(MCP-1、TNF-α、IL-6)Bioresearch Monitoring Program (BIMO)的表达情况。结果 在高糖或非高糖环境下的足细胞中，与正常外泌体干预的足细胞相比较，高糖外泌体干预的足细胞细胞活力下降(P<0.05),炎症因子(MCP-1、TNF-α、IL-6)的基因和蛋白表达均增加(P<0.05);而与高糖外泌体干预的足细胞相比，糖肾宁外泌体干预的足细胞细胞活力有所升高(P<0.05),各炎症因子的基因和蛋白表达均有所下调(P<0.05)。结论 糖肾宁能通过调控巨噬细胞源外泌体减轻小鼠肾小球足细胞炎症反应。

目的 检测子宫内膜异位症患者血清巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）水平，分析MIF对子宫内膜异位症的诊断价值。方法 本研究选取2021年12月至2022年12月期Endodontic disinfection间于东莞市人民医院妇产科行手术治疗的子宫内膜异位症患者，将其作为实验组（n=68）。选取同期有慢性盆腔疼痛或不孕症的育龄期女性患者与同期在本院体检的健康女性各30例，并分别作为对照组与健康组。所有受试者于晨起时、实验组患者分别于术前（T0）、术后当天（T1）、术后第3天（T2）、术后第5天（T3）晨起时采集外周静脉血，检测各组MIF与癌抗原125(CA125)水平。并绘制受试者操作特征曲线（ROC曲线）分析诊断价值。结果 血清MIF水平：实验组>对照组>健康组，差异有统计学意义Staurosporine价格（F=65.426,P<0.001）；血清CA125水平：实验组>对照组>健康组，差异有统计学意义（F=85.743,P<0.001）；实验组患者T2、T3的MIF与CA125水平均明显低于术前，差异有统计学意义（P<0.001）;MIF诊断的AUC为0.899，敏感度与特异性分别为0.838、0.867；联合诊断的AUC为0.900，敏感度与特异性分别为0.779、0.967(P<0.05)。结论 血清MIF检测可能有助于评估手术治疗对子宫内膜异位症病灶的清JNJ-42756493除情况；血清MIF水平对其诊断效能较高，且与联合CA125检测有助于提升诊断的特异性。

毛壳属真菌(Chaetomi获悉更多um)是真菌界子囊菌亚门(Ascomycotina)中一个较大的属,在该属中已经分离代谢产物400多个,并且有100多个化合物为该属首次报道或新化合物。为了寻找抗植物病害的毛壳属活性真菌以及其中的活性物质,本研究以5株毛壳属及其相近属真菌为试验材料,尝试发现未被开发利用并且生物活性较好的菌株,对其可产生的化合物进行分离与鉴定,从而发现具有良好活性的单体化合物。具体研究结果如下:通过ITS测序对供试真菌进行鉴定并进行6种方式的小量发government social media酵,对真菌粗提物进行抗氧化活性、溶磷活性以及抗菌活性的测试,筛选出活性菌株SD-280。菌株SD-280为螺卷毛壳(C.cochliodes),其真菌粗提物能抑制藤仓镰孢菌(Fusarium fujikuroi)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)、丁香假单孢菌(Pseudomonas syringae)、水稻黄单胞菌(Xanthomonas oryzae)以及甘蓝黑腐黄单胞菌(Xanthomonas campestrus)。选择活性好、代谢产物丰富的大米粗提物进行大量发酵,分离得到的化合物为白色粉末,通过氢谱和质谱以及标准品的层析比对确认该化合物为毛壳菌素(chetomin)。查阅文献发现毛壳菌素在临床上具有很好的生物活性,最先被报道的就是抗肿瘤作为癌症的化疗剂,对植物病原菌的抗性还鲜少报道。通过抑制菌丝生长速率法和96孔板法测试毛壳菌素的抗菌活性,首次报道了毛壳菌素对立枯丝核菌以及藤仓镰孢菌具有抗真菌活性;对水稻黄单胞菌具有较强的抗细菌活性且MIC值为3.91μɡ·m L~(-1),对青枯劳尔氏菌、丁香假单胞菌、甘蓝黑腐黄单胞菌具有较为良好的抗菌活性,MIC值为125μɡ·m L~(-1)、125μɡ·m L~(-1)、62.5μɡ·m L~(-1)。本研究从5株毛壳属及其形态相近真菌中筛选出活性菌株螺卷DS-3201半抑制浓度毛壳SD-280,并对分离的化合物毛壳菌素进行了抗菌活性的试验,为毛壳属真菌资源的进一步开发利用提供理论依据,为开发新型真菌源农药提供备选菌株与先导化合物。

抗生素长时间大规模的滥用导致广泛的细菌耐药现象,目前细菌耐药已成为严重的公共卫生问题,威胁人类的生命健康并带来巨大的社会经济负担,然而抗生素的研发却明显滞后,耐药菌所致感染缺乏有效的治疗手段,因此迫切需要开发新型抗菌药物。抗菌肽除具有多肽药物的优势外,还因其独特的作用机制、良好的抗菌活性、快速的杀菌作用以及较低的耐药倾向而成为抗菌领域的研发热点,具有良好的应用前景。Feleucin-K3(FLKLLKKLL-NH_2)和CPF-C1(GFGSLLGKALRLGANVL-NH_2)是两个从两栖类皮肤分泌物中分离提取的天然抗菌肽,二级结构均为α-螺旋构象的两亲性阳离子多肽,具有广谱的抗菌活性,对临床分离的细菌耐药株也显示出良好的抗菌活性,并且不易产生耐药性,是具有成药潜力的良好研究模板。但是作为天然线性肽,Feleucin-K3和CPF-C1均表现出稳定性较差,生物利用度不高的缺陷。在课题组前期研究中,对两个抗菌肽都分别进行了天然氨基酸取代、引入非天然氨基酸改造和引入拟肽小分子等方案进行寻找更多修饰,通过生物学活性检测筛选出了抗菌活性和稳定性获得提高的类似物。然而,这两个抗菌肽要研发成为抗菌先导化合物,还需进行成药性的优化改造,特别是稳定性仍需进一步提升。订书肽是通过在多肽侧链间形成共价桥连接,从而稳固α-螺旋活性构象,保护肽链免于被酶解的修饰技术,被证明是提高多肽稳定性的有效方法,并且获悉更多能够提高多肽的生理活性。本课题基于提高抗菌肽Feleucin-K3和CPF-C1稳定性和活性的目的,应用i+4烃类装订的改造方案,引入戊烯基氨基酸(α-四戊烯丙氨酸和2-四戊烯甘氨酸)并通过烯烃复分解反应(RCM)分别在两个多肽主链外将烯烃链连接形成共价桥,对亲本肽各位点进行扫描装订,合成了两个系列装订类似物,其中Feleucin-K3系列类似物8个,CPF-C1系列类似物17个,经质谱表征、纯化分析后对类似物进行了理化性质、抗菌活性、溶血活性和稳定性的检测,进行构效关系研究。实验结果显示,装订修饰后,两种类似物的活性构象α-螺旋的含量相比于亲本肽均有明显提升,例如Feleucin-Military medicineK3系列类似物FK3-S4的螺旋含量为95.19%(亲本肽Feleucin-K3的螺旋含量为64.97%),CPF-C1系列类似物CPF-S4的螺旋含量达95.23%(亲本肽CPF-C1的螺旋含量为71.35%)。在序列较短的Feleucin-K3系列中绝大多数类似物疏水性降低,而在序列较长的CPF-C1系列中疏水性则部分升高部分降低,与不同装订位点有关。同时两亲性变化也与装订位点有关,但未显示出明显规律。在抗菌活性方面,Feleucin-K3装订类似物中,大部分化合物抗菌活性有较大提升,对4种受试菌的MIC均为4μg/m L(亲本肽Feleucin-K3的MIC为8-32μg/m L),但也有少数类似物抗菌活性降低或丧失,CPF-C1装订类似物的抗菌活性与亲本肽相比没有明显改变。在本课题关注的稳定性方面,实验结果显示装订改造后,两个系列类似物的稳定性均获得明显提高,在生理盐环境中仍能保持原有的抗菌活性,在血清中的半衰期相比亲本肽显著提高,其中Feleucin-K3系列类似物FK3-S2的半衰期为40.28 h(T_(1/2)Feleucin-K3=3.53 h),CPF-C1系列类似物CPF-S9的半衰期达49.75 h(T_(1/2)CPF-C1=1.43 h)。溶血活性实验结果显示,两个系列类似物溶血活性均有一定程度升高。对化合物进行构效关系分析,课题证实了Feleucin-K3系列类似物保持4个正电荷数可以维持良好的抗菌活性,同时装订位点不能跨越两亲性界面,否则会打破亲疏水平衡使活性丧失,由于Feleucin-K3系列序列较短,其溶血活性主要受装订后显著提升的螺旋程度影响,后续的装订应着重调整螺旋程度从而降低溶血活性。对于序列较长的CPF-C1系列类似物,在装订位点扫描中根据结果推测第9和13位点可能是活性位点,替换会影响抗菌活性,同时由于其序列组成中疏水性和中性氨基酸残基占大多数,多肽整体更偏疏水性,所以带电荷数的减少、螺旋程度增加与疏水性界面延伸对其抗菌活性的影响较小,但是对溶血活性影响相对较大,后续装订需要适度引入亲水性氨基酸调节两亲性比例和增加带电荷数以提升抗菌活性,进而影响螺旋程度与疏水界面变化降低溶血活性。综上,本课题通过对Feleucin-K3和CPF-C1的各位点扫描装订,合成得到了两个系列共25个类似物,并进行理化性质、抗菌活性、溶血活性及稳定性的检测以及构效关系分析,后续深入精准的装订改造提供了理论和实验参考,为增加抗菌肽成药性,获得新型抗菌药物提供研究基础。

目的 比较两种不同尿酸钠配方建立的痛风性关节炎模型，为痛风性关节炎模型造模液的选择提供科学的实验依据。方法 将9只SD大鼠分确认细节为3组，每组3只，配方1注射组，配方2注射组，生理盐水对照组。造模后分别在4、24、48、72h,测定实验组大鼠的踝关节和脚掌的肿胀长度。结果 对造模后整个观察期数Metabolism抑制剂据分析，配方1组踝关节和脚掌的周长均值分别是3.52cm和3.35cm;配方2组，造模后踝关节和脚掌的周长均值分别是4.06cm和3.63cm。配方1和配方2造模后引起踝关节肿胀的差异有统计学意义(P<0.0001);配方1和配方2注射后引起脚掌肿胀的差异无统计学意义(P>0.05)。在不同时间点两组配方引起踝关节肿胀差异分析中，配方2引起踝关节周长长于配方1引起踝关节周长，且在24、48、72h差异有统计学意义(P<0.05)。结论 genetic association配方2在痛风性关节炎造模中，引起大鼠踝关节肿胀更明显，持续时间更长；且采用踝关节周长反映造模效果更好。

A201家族是一类结构独特的核苷类抗生素,其分子中包含了1,2-顺式L-呋喃糖、D-构型鼠李糖和脱氨嘌呤霉素单元。1,2-顺式呋喃糖苷是A201家族的核心结构,其中A201A优异的抗菌活性及稀有的环外烯甲醚的L-呋喃糖单元,引起了药物化学、合成化学及化学生物学家的关注。2014年,俞飚课题组,通过47步线性策略实现了A201A的首次全合成。2017年,鞠建华课题组报道了A201A的生物合成途径。由于A201家族对革兰氏阳性菌和厌氧性革兰氏阴性菌表现出极佳的抗菌活性,同时没有相关的构效关系研究,我们拟对该家族进行合成及抗菌活性研究。我们首先推测了A201A、A201D和A201E的潜在的生源关系,基于生源关系假设,设计并合成了A201A、A201D和A201E;同时围绕A201A和A201E开展了构效关系研究,通过合成及活性表征,初步阐明了构效关系,为开发基于A201家族的抗生素奠定了基础。论文共分为以下三章:第一章:氢键介导的糖苷反应(HAD)及其在生物活性分子合成中的应用(综述)简要概述了氢键介导的糖苷化反应(HAD)构建1,2-cis或1,2-trans糖苷键,同时对于2-脱氧的糖环构筑α或β糖苷键也能容易实现;其在合成生物活性分子中的应用实例,并对该反应在合成生物活性分子中的应用前景做了简要的展望。第二章:核苷类抗生素A201E的全合成及抗菌活性探究在本章,首先介绍了核苷类抗生素A201家族的分离背景、结构特点、抗菌活性以及相关的合成背景。该合成路线采用砌块化合E-616452纯度成策略和发散selleck Taurine性思维对其开展全合成研究,利用廉价易得的D-吡喃半乳糖,通过C1和C6头尾氧化态转换策略,实现了D-糖到L-糖的转换,成功构筑了L-呋喃半乳糖的核心结构;随后利用2-喹啉甲酰基,通过氢键的导向构筑了1,2-顺式呋喃糖苷,最后通过酰胺化反应实现了A201E的首次全合成。A201家族对革兰氏阳性菌和大部分厌氧性革兰氏阴性菌表现出极佳的抗菌活性。基于A201E的合成路线,完成了A201E类似物的合成及抗菌活性表征,初步阐明了A201E及其类似物的构效关系,为基于A201家族骨架的新型抗生素奠定了基础。第三章:核苷类抗生素A201A、A201D和A201E的仿生全合成研究该合成路线采用砌块化合成策略和发散性思维对其开展全合成研究,利用廉价易得的D-吡喃半乳糖通过C1和C6头尾氧化态转换策略成功构筑了L-呋喃半乳糖的核心结构;随后利用2-喹啉甲酰基诱导,实现了远程氢键导向的糖苷化反应,顺利的构筑了1,2-顺式呋喃糖苷;在经过烯醇甲醚化和碱促的糖苷化反应,在水相中实现Biometal chelation了烷基醇区域选择性和立体选择性的糖苷化反应,成功实现由A201D到A201A转化,为后期的构效关系研究提供了合成路线。

目的 构建plenti-Crispr V2 ZNF703 sgRNA质粒。方法 根据人和鼠ZNF703基因序列中的外显子区设计sgRNA的靶向序列，并在靶序列的两端加上plenti-Crisprselleck化学 V2质粒构建所要求的黏性末端，得到并合成ZNF703sgRNA的引物；对合成的引物进行退火得到ZNF703 sgRNA双链寡核苷酸片段；将plenti-V2质粒进行BsmB I酶切、胶回收；将ZNF703 sgRNA双链寡核苷酸片selleckchem D-Lin-MC3-DMA段和酶切后胶回收的plenti-Crispr V2骨架片段（12 988 bp）进行连接、转化感受态细胞、挑取阳性克隆、菌落PCR鉴定和酶切鉴定，并进行测序验证。结果 成功构建plenti-Crispr V2ZNF703 sgRNA质粒，并利用plenti-Crispr V2 ZNF703 sgRNA成功构建了ZNF703敲除的结肠癌细胞系HCT-116。结论 构建了plenti-Crispr V2immunoaffinity clean-up ZNF703 sgRNA质粒，并在HCT-116细胞系中验证其敲除效果，为在人源肿瘤细胞中、鼠源细胞系中敲除ZNF703，以及为深入研究ZNF703的生物功能打下基础。

环境中的塑料污染正在以惊人的速度增长,并且引起了全世界的关注。塑料垃圾经过物理、化学或生物作用会分解为微塑料(Microplastics,MPs)和纳米塑料(Nano-plastics,NPs),广泛分布于水体、土壤和空气中,可能对人体健康构成严重威胁。与MPs相比,NPs具有较高的表面积和体积比,更容易进入细胞或者组织,因此具有更大的潜在毒性作用。目前关于NPs对哺乳动物的生物学毒理效应研究有限,特别是NPs暴露对于哺乳动物血糖的影响及其机制的研究非常缺乏。聚苯乙烯塑料是环境中最常见的塑料类型,广泛用于制造保温材料、一次性餐具、泡沫盒和清洁用品。评估聚苯乙烯纳米塑料(Polystyrene nano-plastics,PS-NPs)对人体健康的影响具有非常重要的意义。经口暴露是塑料颗粒暴露的主要方式,本研究采取灌胃的方式对RepSox细胞培养小鼠进行80nm PS-NPs暴露。100只C57 BL/6小鼠随机分为10组:(1)生理盐SAHA水组;(2)PSNPs 1 mg/kg/day;(3)PS-NPs 10 mg/kg/day;(4)PS-NPs 30 mg/kg/day;(5)生理盐水+高脂饮食;(6)PS-NPs 1 mg/kg/day+高脂饮食;(7)PS-NPs 10 mg/kg/day+高脂饮食;(8)PS-NPs 30 mg/kg/day+高脂饮食;(9)PS-NPs 10 mg/kg/day+高脂饮食+SC79;(10)生理盐水+高脂饮食+SC79。通过对小鼠饲喂高脂肪饲料和小剂量STZ(Streptozocin)注射(40 mg/kg)建立二型糖尿病(T2DM)模型。分别对小鼠灌给1,10,30 mg/kg/day的PS-NPs或生理盐水,进行为期8周的暴露实验。注射AKT特异性激活剂(SC79)以评估AKT的作用机制。小鼠在注射8-12次STZ后出现高血糖症状,每周跟踪检测每组小鼠的空腹血糖数值,在暴露结束前几天测定口服葡萄糖耐量(OGTT)以及胰岛素耐量(ITT)。暴露结束后将小鼠麻醉取心脏血并采集肝脏和胰腺组织,测量血清胰岛素以评估HOMA-IR,称量脏器并统计脏器系数。本研究通过测量小鼠肝脏和胰腺组织匀浆氧化应激相关的生物指标:活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量,用以评价PS-NPs暴露对小鼠肝脏和胰腺组织的氧化损伤情况;使用试剂盒检测小鼠血清中的血脂含量和肝功能酶指标来评价小鼠经PS-NPs暴露后代谢紊乱情况;通过检测小鼠血清中关键炎症因子TNF-α、IL-6和IL-27变化来评价经PS-NPs暴露后小鼠体内炎症变化;通过H&E染色和PAS染色来评估小鼠经PS-NPs暴露后相关脏器的病理学变化和糖原累积情况;通过免疫组化检测小鼠肝脏组织P-AKTser473和P-GSK3βser9的表达量来评估经PS-NPs暴露后胰岛素代谢关键信号通路变化。实验结果表明:(1)PS-NPs单独暴露对小鼠体重和饮水量具有轻微影响;在糖尿病建模组中,PS-NPs暴露导致小鼠体重减轻,饮水量显著增多。(2)在30 mg/kg/day PS-NPs单独暴露组和PS-NPs暴露结合糖尿病建模组的肝脏组织中,观察到比较明显的炎症细胞浸润和组织损伤增加,在胰腺组织也有明显病理性损伤,如胰岛轮廓和形状不规则、细胞结构不清晰等。(3)PS-NPs单独暴露8周后,小鼠空腹血糖小幅增加;在糖尿病建模组中,1,10,30 mg/kg/day的PS-NPs暴露会引起小鼠空腹血糖显著增加,并呈剂量效应。(4)30 mg/kg/day的PS-NPs单独暴露显著升高了OGTT、ITT和HOMA-IR水平,但对胰岛素分泌无显著影响;在糖尿病模型组中,30 mg/kg/day的PS-NPs暴露引起OGTT、HOMA-IR显著升高,一定程度上增加了ITT,但是对胰岛素分泌无显著影响。(5)在30 mg/kg/day的PS-NPs单独暴露组中,ROS和MDA的水平显著升高,GSH的水平显著降低;在糖尿病模型组中,10,30 mg/kg/day的PS-NPs暴露引起小鼠肝脏和胰腺组织中ROS以及MDA水平显著升高,GSH水平显著降低。(6)PS-NPs暴露导致肝脏组织糖原发生积累效应,引起小鼠血脂代谢紊乱,T-CHO、TG和LDL-C水平增加,HDL-C水平下降,且暴露于PS-NPs提高了ALT、AKP和AST的活性;PS-NPs暴露导致小鼠血清中IL-27含量显著降低,但对TNF-α及IL-6无显著影响。(7)PS-NPs单独暴露会引起小鼠AKT和GSK3β磷酸化水平显著降低并呈现剂量依赖效应;在糖尿病模型组中,30 mg/kg/day PS-NPs暴露使小鼠AKT和GSK3β磷酸化水平进一步降低。(8)注射SC79能部分减轻PS-NPs暴露对糖尿病模型小鼠的症状加重效应,如可提高AKT和GSK3β磷酸化水平,有效缓解肝脏或胰腺ROS水平升高,并轻度减弱PS-NPs暴露引起的空腹血糖水平升高和胰岛素抵抗。综上,30 mg/kg/day PS-NPs暴露会导致血糖、氧化应激、葡萄糖耐受不良和胰岛素抵抗明显增加。在糖尿病模型组中,PS-NPs的暴露显著加重了氧化应激、葡萄糖耐受不良、胰岛素耐量和胰岛electric bioimpedance素抵抗,并诱发肝脏和胰腺的病变。PS-NPs暴露可降低AKT和GSK3β磷酸化水平,AKT激活剂SC79处理可提高AKT和GSK3β磷酸化水平,有效缓解肝脏或胰腺ROS水平升高,并缓解PS-NPs暴露引起的空腹血糖水平升高和胰岛素抵抗。这表明暴露于PS-NPs会加重二型糖尿病,其潜在机制涉及对AKT/GSK3β磷酸化的抑制。

目的:氟比洛芬酯(FA)属于非甾体抗炎药物的一种,有止痛、抗炎以及解热作用,临床应用广泛,其注射液主要用于术后及癌症镇痛。建立FA原料及制剂体外分析方法,对FA脂微球注射液的处方与制备工艺进行研究,并对FA脂微球注射液进行体外质量评价,为FA脂微球注射液的深入研究与临床应用奠定基础。方法:通过查阅文献及中国药典(Chp)2020版,建立高效液相色谱体法(HPLC),可用于检测FA原料药含量、制剂含量及制剂中氟比洛芬含量,并进行方法学验证;建立FA原料药及制剂有关物质体外分析方法。通过单因素法对制剂处方的油酸加入量、蛋黄卵磷脂加入方式、油相配液顺序、油相和水相配液温度及油相和水相加入顺序进行考察;通过正交试验法对卵磷脂用量、初乳p H值、大豆油加入量及泊洛沙姆188加入量进行考察,结果使用SPSS 26进行方差分析。通过单因素法对制剂制备工艺的初乳剪切速度及高压均质温度进行考察;通过正交试验法对初乳剪切时间、均质压力及均质次数进行考察,结果使用SPSS 26进行方差分析。通过测定Z-IETD-FMK抑制剂九种蛋黄卵磷脂制备的FA脂微球注射液的性能确定最优蛋黄卵磷脂。通过测定FA脂微球注射液的性能确定灭菌温度。对确定的处方及制备工艺进行重现性评价,并进行稳定性研究。结果:所建立的含量和氟比洛芬检测方法对于FA脂微球注射液的原料及制剂的检测符合规定。最优处方:最优制备工艺:(1)称取大豆油8.0%,置水浴锅中加热至65℃,称取油酸0.4%,氟比洛芬酯1.0%,置上述大豆油中搅拌使溶解为油相;(2)取水适量加热至65℃,加入注射用甘油2.2%,泊洛沙姆188 0.6%,磷酸氢二钠0.068%,蛋黄卵磷脂1.0%置上述水中,置磁力搅拌器上搅拌使溶解为水相;(3)将水相倒入到油相中,并用超纯水冲洗盛放水相的烧杯内壁,并将其也倒入油相中;(4)将混合后的溶液https://www.selleck.cn/products/XL184.html用高剪切分散机13000 r/min剪切8 min;(5)以0.1 mol/L氢氧化钠溶液调节p H值至9,用水定容得初乳;(6)Spatiotemporal biomechanics以高压均质机连接低温冷却循环泵,使均质过程保持10℃左右,1000 bar循环6次将所得初乳进行精制得终乳;(7)以0.65μm微孔滤膜过滤,分装,充氮,封口;(8)121℃湿热灭菌15 min,即得FA脂微球注射液。最优蛋黄卵磷脂为磷脂酰胆碱(PC)含量为70%~80%的蛋黄卵磷脂。配伍稳定性、加速稳定性及长期稳定性良好。结论:本课题完成了FA脂微球注射液的处方及制备工艺的筛选和优化,初步建立了FA脂微球注射液的质量标准,并进行了稳定性研究,为FA脂微球注射液的深入研究与临床应用奠定基础。