ALK抑制剂

目的 探讨综合护理干预结合温针灸在重症肌无力患者中的应用效果。方法 回顾性分析2019年3月至2022年3月聊城市第四人民医院诊治的95例重症肌无力患者的selleck抑制剂一般资料。根据护理方法的不同分为对照组(46例)和观察组(49例),对照组施以常规护理，观察组予以温针灸+综合护理。比较2组的不良事件发生情况，以及护理前后的肌无力严重程度、颈部血流速度、生存质量和生活能力。结果 护理2周和6周后，观察组的重症肌无力绝对和相对评分法(ARS-MG)评分均低于同期对照组，重症肌无力日常生活量表(MG-ADL)及患者报告结局量表(MG-PRO)各维度评分均高于同期对照组，颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)血流速度均快于同期对照组(P均<0.05);2Ocular biomarkers组的上述指标均较同组护理前更优(P均<0.05)。观察组的不良事件总发生率明显较对照组低(P<0.05)。结论 IACS-010759半抑制浓度温针灸联合综合护理可加快重症肌无力患者的颈部血流速度，减轻其肌无力严重程度，提高其生存质量和生活能力，降低不良事件的发生率。

目的 探讨肿瘤细胞外泌体肌动蛋白调节蛋白-1(PFN1)对胃癌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。方法 使food microbiology用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测正常胃上皮细胞和胃癌细胞中PFN1 mRNA和蛋白表达水平。采用CCK8实验、细胞克隆实验、划痕实验和Transwell实验评估PFN1对胃癌细胞活力以及增殖、迁移及侵袭能力的影响。采用流式细胞术检测PFN1对胃癌细胞凋亡的影响。结果 PFN1在胃癌组织和胃癌细胞中表达量异常升高(P<0.001)。过表LGK-974采购达PFN1的胃癌细胞活力增加，增殖、迁移和侵袭能力显著增强，过表达PFN1还可以使胃癌细胞凋亡减少(P均<0.001)。此selleck外，胃癌细胞外泌体中的PFN1可以促进巨噬细胞的M2极化，并进一步增强胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的能力(P均<0.001)。结论 过表达PFN1可以促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭，抑制凋亡。而胃癌细胞外泌体中的PFN1可以通过刺激巨噬细胞M2极化进一步促进胃癌的发生发展。

抗精神病药物是治疗精神分裂症的主要药物，但其使用会导致脂代谢紊乱，从而增加患者发生心血管疾病的风险，缩短患者的预期寿命，并严重影响治疗的依从性。目前，抗精神病药物引起脂代谢紊乱的具体机制尚不清楚。固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein,SREBP)是调控脂代谢的关键转录因子。Genetics education前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSNSC 119875半抑制浓度K9)作为SREBP下游调控基因之一，对低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesselleck抑制剂terol,LDL-C)具有重要的调控作用，是最近降脂药物研究的重要靶点。近期研究表明，抗精神病药物可以通过SREBP/PCSK9通路影响脂代谢。深入了解该通路在抗精神药物相关代谢异常中的作用机制将促进精神分裂症患者脂代谢紊乱的预防和新药的研发应用。

消化系统肿瘤是世界范围内常见的一类恶性肿瘤,每年新发及死亡患者人数分别占所有恶性肿瘤的四分之一和三分之一。近年来我国消化系统肿瘤人数逐年攀升,这类肿瘤的特点包括起病隐匿、恶性程度高、侵袭转移快、生存期短,造成了沉重的社会及经济负担。基于消化系统肿瘤发展现状和严峻的诊疗形势,急需深入研究其内在的分子机制,由此确定肿瘤高危人群,发现新的消化系统肿瘤特异的早期诊断标志物及有效的治疗靶点并衍生出相关分子靶向药物,对肿瘤精准诊疗有深远意义。功能性长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)异常表达与消化系统肿瘤患者的诊断或预后密切相关,并参与靶向治疗和免疫治疗,可促进预防策略和先进疗法的发展。LncRNA相关的单核苷酸多态性在干扰lncRNA调节基因功能方面显示出举足轻重的作用,可以影响lncRNA表达水平及生物功能,这些基因参与重要的信号传导途径和致癌作用。近期研究表明,lncRNA相关多态性的个体和/或联合基因型可以预测癌症风险、生存期和治疗结果。免疫检查点抑制剂(Immune checkpoint inhibitors,ICIs)作为新兴抗肿瘤治疗方法取得了突破性进展,逐步在食管癌、肝细胞癌、胃癌和结直肠癌等消化系统肿瘤治疗中显示出了良好疗效并显著的延长了肿瘤患者的预后,彻底改变了消化系统肿瘤的治疗格局。然而,这类肿瘤患者对ICIs的客观应答率仅为10%-20%,这突出了开发可靠的生物标志物来筛选获益人群的必要性。本研究分为以下三部分:第一部分生长激素水平与晚期胃癌患者免疫检查点抑制剂治疗效果的关系目的:晚期胃癌(Advanced gastric cancer,AGC)的治疗是世界性难题,ICIs联合化疗已被广泛用于改善AGC患者的预后。在本研究中,探究免疫治疗后生长激素(Growth hormone,GH)水平对ICIs治疗AGC患者疗效的影响。方法:1.收集2019年01月01日至2022年04月30日在河北医科大学第四医院接受抗PD-1抗体治疗的AGC患者75例。2.根据GH水平,将AGC患者分为高GH组和低GH组。根据美国国家综合癌症网络指南,从无进展生存率(Progression free survival,PFS)、总functional symbiosis生存率(Overall survial,OS)、客观缓解率(Overall response rate,ORR)及疾病控制率(Disease control rate,DCR)等方面评估AGC患者免疫治疗疗效。3.计数数据采用χ~2检验进行比较,计量资料采用t检验。生存曲线由Kaplan-Meier方法绘制,并使用Log-Rank法对曲线进行对比。采用COX风险回归模型进行多变量生存分析。P<0.05代表有统计学意义。结果:1.ICIs疗效分析发现,治疗后高GH组及低GH组的DCR分别为30.0%和53.3%,治疗后GH水平升高与ICIs治疗的DCR降低相关(P=0.046)。2.单因素分析表明,在接受ICIs治疗的AGC患者中,治疗后高GH与较短的PFS相关(P=0.016),并且和较短的OS在临界统计水平相关(P=0.052)。COX模型多因素分析证明,GH水平是AGC患者预后的独立危险因素(PFS:P=0.013,HR,2.424,95%CI,1.202-4.890;OS:P=0.014,HR,3.301,95%CI,1.279-8.519)。结论:治疗后GH水平可能是AGC患者ICIs治疗效果的预测指标。第二部分Rs6983267位点单核苷酸多态性通过调节长链非编码RNACCAT2的表达影响肝细胞癌的预后目的:遗传因素在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的发生发展中发挥着重要作用,但具体的分子生物学机制尚未阐明。LncRNA的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)通过介导靶基因的表达参与细胞增殖、凋亡、肿瘤发生等多种生物学过程。在本部分研究中,我们评估了四种癌症相关lncRNA-SNPs对HCC发病及预后的影响。方法:1.应用PCR技术扩增目的片段进行lncRNA-SNPs基因分型,采用实时定量PCR检测lncRNCCRG 81045A结肠癌相关转录因子2(Colon cancer associated transcript 2,CCAT2)在肝癌组织中的表达水平。2.培养肝细胞癌Hep G2细胞、利用shRNA干扰技术降低肝癌细胞中CCAT2的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8法测定细胞增殖能力、伤口愈合法测定细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡。3.应用Western blot验证lncRNA CCAT2下游相关蛋白的表达水平。4.采用t检验及χ~2检验比较计量资料和计数资料。单因素分析采用Kaplan-Meier及Log-Rank方法,多因素分析采用COX风险回归模型。P<0.05代表有统计学意义。结果:1.CCAT2基因多态位点rs6983267 SNP与肝癌患者的发癌风险和总生存率相关。与TT基因型相比,rs6983267的GG+GT基因型患者有较大的肝癌发病风险及较差的预后。2.综合PCR及实时定量PCR检测结果,发现rs6983267的GG+GT基因型比TT基因型产生更多的CCAT2转录本。3.功能分析表明,CCAT2基因敲除可抑制肝癌细胞的增殖和迁移,并促进其凋亡。4.CCAT2基因敲除后,CCAT2下游的MYC表达也下调。结论:rs6983267单核苷酸多态性可能通过介导CCAT2及其下游靶基因MYC的表达来影响肝癌的发生发展,CCAT2有望成为HCC治疗的新靶点。第三部分长链非编码RNA PRNCR1单核苷酸多态性与结直肠癌的相关性研究目的:结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是一种多步骤、多因素复杂作用下发生的恶性病变,尽管多项研究发现遗传因素与CRC发生发展密切相关,但具体分子机制尚未解明。LncRNA基因的SNPs可以通过介导靶基因的表达参与肿瘤发生发展中多种生物学过程。在本部分研究中,我们评估了3种癌症相关lncRNA-SNPs对CRC发生发展的预测价值及潜在生物学功能。方法:1.培养结肠癌HCT116细胞,利用shRNA干扰技术降低结肠癌细胞中PRNCR1的表达水平。2.采用PCR对lncRLGK-974半抑制浓度NA-SNPs进行基因分型,并应用实时定量PCR检测lncRNA的表达水平。3.采用细胞计数试剂盒-8法、伤口愈合法和流式细胞术检测结肠癌细胞的增殖、迁移和凋亡。4.Western blot用于检测lncRNA下游相关蛋白的表达。5.分别采用t检验和χ~2检验比较计量资料和计数资料。单因素生存分析采用Kaplan-Meier方法及Log-Rank方法,多因素生存分析采用COX风险回归模型。P<0.05被认为有统计学意义。结果:1.前列腺癌非编码RNA1(Prostate cancer-associated non-coding RNA1,PRNCR1)的rs7463708位点单核苷酸多态性与CRC患者的发癌风险相关(P=0.038)。与rs7463708的GT+TT基因型相比,GG基因型增加了CRC的发癌风险。2.Rs7463708位点SNP基因型与lncRNA PRNCR1表达水平不相关。3.功能分析表明,PRNCR1基因敲除可以在体外抑制结肠癌HCT116细胞的增殖和迁移,并促进其凋亡。4.Western blot结果表明PRNCR1沉默的HCT116细胞ONECUT2的表达明显降低。结论:Rs7463708位点SNP可能通过介导PRNCR1结构功能及其下游靶点ONECUT2的表达来影响CRC的发生发展,PRNCR1基因rs7463708位点SNP是一种新型的诊断标记物和潜在的抗肿瘤治疗靶点。

β-烟酰胺单核苷酸(β-nicotinamide mononucleotide,NMN)是一种生物活性核苷酸。NMN在抵抗个体衰老、预防以及治疗神经退行性疾病和糖尿病等方面发挥积极作用。全细胞催化经济环保,反应过程特异性高,在NMN的生产中具有良好的应用前景。本研究以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)作为出发菌株,采用基因工程的策略对其进行适当的改造,利用底物葡萄糖和烟酰胺高效合成NMN,为NMN的生物合成做出探索。主要研究如下:(1)筛选高活性的烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide pCell Biology Serviceshosphoribosyltransferase,Nampt/NadV)。以来源于杜克雷嗜血杆菌(Haemophilus ducreyi)、希瓦氏菌(Shewanella oneidensis)、弧菌噬菌体KVP40(VibFerrostatin-1分子式rio bacteriophage KVP40)和松噬几丁质菌(Chitinophaga pinensis)的Nampt/NadV作为酶源,在E.coli BL21(DE3)中分别表达,研究重组菌合成NMN的能力。实验结果发现,弧菌噬菌体KVP40来源的烟酰胺磷酸核糖转移酶(VpNadV)的活性最高,重组菌株的NMN产量为26.2±0.75 mg·L~(-1)。因此,选择VpNadV用于后续的研究。(2)构建VpNadV和大肠杆菌核糖磷酸二磷酸激酶(ribose phosphate pyrophosphokinase of E.coli,EcPRS)共表达质粒pETDuet-VpnadV-Ecprs,改造酶EcPRS以提高其活性,并优化其表达水平。结果表明,重组菌E.coli/pETDuet-VpnadV-Ecprs比VpnadV单独表达的菌株拥有更好的NMN合成能力。在EcPRS的所有突变体中,单个氨基酸残基突变的突变体EcPRS~(D115)表现出最佳酶活。在PRS表达水平的优化中,启动子P_(J23119)和RBS_Ⅲ的组合,在NMN的增产中表现最佳。(3)增强前体5-磷酸核糖二磷酸(5-phosphoribosyl diphosphate,PRPP)供应和削弱产物NMN降解。对PRPP合成途径进行改造,将基因zwf(编码葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)和基因gndA(编码6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶)替换为谷氨酸棒杆菌来源的zwf~(A243T)和gnd~(S361F),过表达基因rpiA和rpiB(编码核糖-5-磷酸异构酶),增强了前体的合成。敲除支路代谢途径中的基因pfkA(编码6-磷酸果糖激酶),获得重组菌株ZY14,NMN的合成量再度提高。对产物NMN降解途径中的基因pncC(编码NMN氨基水解酶)和基因ushA(编码5’-核苷酸酶)敲除,NMN的降解被削弱,得到的重组菌株ZY16的NMN产量达到925.3±12.5 mg·L~(-1),相较于对照菌株ZY14提高1.74倍。(4)对性能最优的重组菌株ZY17,在摇瓶水平进行全细胞催化条件优化。最优的催化条件为:pH 8.0、催化温度35℃、摇床转速200 r·min~(-1)、Mg~(2+)6 mmol·L~(-1)。重组菌株ZY17在最优Gefitinib-based PROTAC 3价格条件下生物转化12 h,共产生NMN 2.37±0.03 g·L~(-1),是优化前的1.47倍。对反应体系进行放大试验,在2 L生物反应器内,NMN产量达到13.3±0.35 g·L~(-1),烟酰胺摩尔转化率为85.3%。

猪气喘病是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)感染引起的猪的呼吸道疾病。虽然其致死率低且常被养殖户所忽视,但会引起猪群生产性能的降低,导致猪只的饲料转化率升高、日增重减少、出栏时间延长、养殖成本大大增加,给养户造成重大经济损失,逐渐引起生猪养殖业的重视。猪肺炎支原体的感染普遍,临床兽医通常采集病死猪或屠宰猪肺脏进行肺部病变评估或病原学检测,目前国内外有关其在大规模猪群中流行率的报道较少。此外猪肺炎支原体临床菌株的分离培养困难,迄今为止已公布基因组序列的菌株仅有7株,对于流行菌株的遗传变异研究有限。目前规模化猪场以疫苗免疫为控制猪肺炎支原体感染的主要手段,但是商品化疫苗仅提供部分保护,且在临床实践中疫苗普及率有限、接种策略单一。受各种因素限制,猪肺炎支原体的根除净化工作十分困难,探寻行之有效的防控策略具有重要意义。广西某农牧公司拥有21个规模化种猪场,各场猪群存在不同程度的咳嗽、气喘等呼吸道症状,怀疑猪场存在猪肺炎支原体感染。为掌握该公司种猪场猪肺炎支原体的流行情况和分子流行病学特征,给猪肺炎支原体感染的防控和净化工作提供理论基础,并结合猪场实际提出防控建议,本研究进行了猪肺炎支原体的流行病学调查和猪肺炎支原体灭活疫苗的跟胎免疫效果评估。主要结果如下:1.猪肺炎支原体的流行病学调查本研究探索了猪https://www.selleck.cn/products/peg300.html肺炎支原体的活体采样方法,对同一批后备猪采集鼻拭子和喉拭子,通过荧光定量PCR检测比较二者的采样效果。鼻拭子样品的阳性检出率为16.67%;喉拭子样品的阳性检出率为56.67%,且Ct值更低。结果表明喉拭子是更适用于猪肺炎支原体流行病学调查的活体样本类型。通过简单随机抽样,定点采集了21个种猪场共1478份喉拭子样品,进行荧光定量PCR检测,结果显示猪肺炎支原体的感染普遍,场阳性率为66.67%;但是各场感染压力较小,阳性率为1.39%～18.57%。为了解猪肺炎支原体的流行特点,结合分层抽样的方式将所采样本按照胎次分为“0～1胎母猪”和“≥2胎母猪”两个层次,结果显示0～1胎母猪的阳性率高于2胎以上母猪,表明低胎次母猪更易感染猪肺炎支原体。从病原学检测结果为阳性的样品中筛选了来自其中7个猪场的12份样品,进行分子流行病学分析。结果显示,这7个猪场流行菌株的多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)均为序列类型(sequence type,ST)128。进一步对保守的p36基因及非保守的p97和p146基因进行核苷酸和氨基酸序列分析,发现不同猪场间的流行菌株遗传变异差异很小且高度同源,为猪肺炎支原体随生猪调运的跨场、跨区域传播提供有力证据。2.猪肺炎支原体灭活疫苗的跟胎免疫效果评估根据国内外有关猪肺炎支原体的疫苗免疫和防控工作的经验,本研究选择母猪跟胎免疫策略作为Roxadustat浓度猪场的改进防控措施,并选取两个具有相似背景的阳性猪场,分别对母猪妊娠末期进行1次跟胎免疫和2次跟胎免疫的实际效果进行评估。1次跟胎免疫的结果显示,在分娩时,母猪的抗体平均滴度为4433、抗体离散度73.6Functional Aspects of Cell Biology3%;在仔猪断奶时,母猪的抗体平均滴度为3912、抗体离散度77.77%,仔猪的抗体平均滴度为672、抗体阳转率为25.00%、病原阳性率为18.75%。2次跟胎免疫的结果显示,在分娩时,母猪的抗体平均滴度为8253,抗体离散度30.35%;在仔猪断奶时,母猪的抗体平均滴度为6707、抗体离散度35.85%,仔猪的抗体平均滴度为2314、抗体阳转率为70.37%、病原阳性率为0.00%。本研究表明,进行1次跟胎免疫可能不足以让母猪产生较高水平的抗体并为仔猪提供母源免疫保护;进行2次跟胎免疫可使母猪在哺乳期维持较高的抗体水平,为仔猪提供足够的母源抗体,从而降低断奶仔猪的病原感染率。在流行病学调查及免疫效果评估的基础上,结合猪场实际情况,提出猪肺炎支原体的防控建议。

目的 探讨糖尿病合并尿道感染患者尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)毒力因子特点和耐药性，并分析UPEC对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达的影响。方法 选取2019年1月-2021年5月海口市骨科与selleckchem MS-275糖尿病医院105例糖尿病合并UPEC感染患者为感染组，46例无泌尿系统感染的糖尿病患者为非感染组。收集感染组尿液分离UPEC以及非感染组粪便分离大肠埃希菌。检测大肠埃希菌毒力因子，并进行药敏试验。检测NLRP3 mRNA及NLRP3蛋白表达量、血清半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-1、核转录因子(NF)-κB、白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平。结果 感染组UPEC毒力因子相关基因papC、fimH、hly、cnf1、aer的检出率分别为100.00%、51.43%、60.00%、35.24%、62.86%,非感染组检出率为0.00%、15.22%、10.87%、6.52%、28.26%(P<0.05)。感染组NLRP3 mRNA及NLRP3蛋白表达量均高于非感染组(P<0.05)。感染组血清CaspasHIV infectione-1、NF-κB、IL-1β和IL-18水平均高于非感染组(P<0.05)。结论 UPEC毒力因子相关基因papC、fimH、hly、cnf1、aer检出率较高，多药耐药严重，糖此网站尿病患者UPEC感染的机制可能与NLRP3炎症小体激活有关。

目的：羟考酮与苯二氮?类药物、抗抑郁药及抗惊厥药联用时，会出现中枢神经系统不良事件(adverse events,AEs)。本研究基于美国BYL719使用方法食品药品监督管理局不良事件报告系统(Food and Drug Administration Adverse Event Reporting System,FAERS)数据，挖掘羟考酮单用及联用苯二氮?类药物、抗抑郁药和抗惊厥药的中枢神经系统AEs的风险信号，为该药的安全合理使用提供参考。方法：提取FAERS中2004年第1季度至2021年第2季度的单用羟考酮及联用苯二氮?类药物、抗抑郁药及抗惊厥药的AEs数据，采用比例失衡法及贝叶斯法进行AEs风险信号挖掘分析。报告数≥3且报告比值比(reporting odds ratio,ROR) 95%CI下限>1；报告数≥3，比例报告比值比(proportional reporting ratio,PRR)≥2且χ~2值≥4；信息成分(information components,IC)95%CI下限(IC025)>0；经验贝叶斯几何平均数(empirical Bayes geometric mean,EBGM)95%CI下限(EBGM05)>2,N>0被定义为阳性信号。结果：共挖掘到单用羟考酮中枢神经系统AEs报告数为5 793例，合用苯二氮?类药物、抗抑郁药、抗惊厥药报告数分别为366、622、740例。消费者和医师是主要上报人群。单用羟考酮的年龄主要分布在61～80岁。羟考酮联用相关药物年龄主要分布在46～60岁。女性发生AEs的风险大于男性，报告国家以美国为主。单用羟考酮与肌阵挛[ROR=2.92,95%CI 2.28～3.76;PRR=2.92，χ~2(77.49);IC=1.52,IC025(0.65);EBGM=2.89,EBGM05(2.33)]、谵妄[ROR=4.69,95%CI 4.24～5.21;PRR=4.66，χ~2(1052.64);IC=2.17,IC025(1.81);EBGM=4.50,EBGM05(4.13)]、精神异常[ROR=2.95,95%CI2.53～3.44;PRR=2.94，χ~2(206.93);IC=1.56,IC025(0.96),EBGM=2.95,EBGM05(2.58)]、急性中枢性呼吸抑制[ROR=2.87,95%CI 2.68～3.08;PRR=2.82，χ~2(971.62);IC=1.52,IC025(1.33);EBGM=2.87,EBGM05(2.76)]的关联性强；联用苯二氮?类药物与精神异常[ROR=10.08,95%CI 9.38～10.78;PRR=9.90，χ~2(64.06);IC=Berzosertib小鼠3.33,IC025(1.65);EBGM=10.08,EBGM05(5.61)]、震颤[ROR=3.09,95%CI 2.76～3.42;PRR=3.08，χ~2(48.93);IC=1.63,IC025(1.17);EBGM=3.09,EBGM05(2.34)]的关联性最强；联用抗抑郁药与谵妄[ROR=13.23,95%CI 12.23～14.23;PRR=12.87，χ~2(43.86);IC=3.69,IC025(1.36);EBGM=12.23,EBGM05(5.32)]、嗜睡[ROR=6.74,95%CI 6.15～7.33;PRR=6.73，χ~2(53.42);IC=2.75,IC025(1.52);EBGM=6.73,EBGM05(4.10)]的关联性最强；联用抗惊厥药与肌阵挛[ROR=17.89,95%CI 17.46～18.32;PRR=17.72，χ~2(971.39);IC=4.16,IC025(2.70);EBGM=17.89,EBGM05(12.46)]、谵妄[ROR=4.86,95%CI 4.45～5.27;PRR=4.82，χ~2(69.49);IC=2.28,IC025(1.51);EBGM=4.86,EBGM05(3.44)]的关联性最强。结论：基于对FAERS数据Isolated hepatocytes库的药物警戒研究，应加强羟考酮单用及联用苯二氮?类药物、抗抑郁药、抗惊厥药的临床用药监测，警惕中枢神经系统相关AEs的发生。

目的 探讨芍药苷(paeoniflorin, PF)对转化生长因子-β1(trans-forming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞HK-2的纤维化作用及磷酸酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(phosphoinositol 3 kinase and serine-threonine protein kinase, PI3K/AKT)信号通路的影响，并分析其可能的作用机制。方法 将HK-2细胞分为对照组、模型组(10μg·L~(-1) TGF-β1)、PF低剂量组(20μMPF+10μg·L~(-1)TGF-β1)、PF高剂量组(80μM PF+10μg·L~(-1) TGF-β1)。细胞毒性实验(cell counting kit-8,CCK-8)检测TGF-β1和PF对HK-2细胞活力的影响。蛋白免疫印迹(Western blot)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、上皮钙黏素(epithelial cadherin, E-cad)及通路相关蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT的Nutrient addition bioassay表达AZD1152-HQPA分子式。结果 与对照组比较，模型组细胞α-SMA、p-PI3K、p-AKT蛋白表达升高(P<0.05或<0.01),E-cad表达降低(P<0.05);与模型组比较，PF组E-cad表达升高(P<0.05),α-SMA、p-PI3K、p-AKT表达降低(P<0.05或<0.01)。结论 PF可减轻TGF-β1诱导的肾纤寻找更多维化，其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

BCAAs(Branched-chain amino acids)是指Leu、Ile和Val三种必需氨基酸,其中Val和Ile经过分解代谢可以生成丙酰辅酶A,Leu和Ile经过personalised mediations分解代谢则可以生成乙酰辅酶A,这些可以为体内丙酰化、乙酰化的修饰提供原料。近年来大量研究表明2型糖尿病患者以及2型糖尿病模型小鼠血浆中BCAAs含量明显升高,并且肝脏糖异生代谢的紊乱是2型糖尿病发病的一个重要原因,本课题主要是为了探究高浓度的BCAAs在糖异生代谢过程中的作用及分子机制。我们的实验结果表明高脂和高BCAAs共同饲喂条件下可以明显提高小鼠的禁食血糖、糖异生能力、脂肪重量和脂滴积累,促进小鼠2型糖尿病的发selleckchem MK-4827生,但不影响小鼠肝脏糖异生相关基因的转录水平以及糖异生关键酶PCK1、PC的蛋白水平。高脂和高BCAAs共同饲喂的小鼠肝脏组织中非组蛋白的丙酰化修饰水平有明显的升高,这表明饮食中过量的BCAAs可能通过肝脏代谢后产生的丙酰辅酶A而促进肝脏组织的丙酰化修饰。细胞系的研究结果与小鼠中的结果一致,培养液中高浓度的BCAAs可以促进非组蛋白的丙酰化修饰。针对高浓度的BCAAs如何促进肝脏糖异生的分子机制的研究表明,BCAAs可以明显促进糖异生关键酶PCK1的丙酰化修饰,实验室前期研究证明GCN5是细胞内主要的丙酰转移酶,我们进一步发现GCN5与糖异生关键酶PCK1之间存在相互作用,并且GCN5能够催化PCK1的丙酰化修饰,PCK1的丙酰化修饰可以促进其糖异生活性。综上所述,本课题的研究结果表明高浓度的BCAAsApoptosis抑制剂可以增强糖异生关键酶PCK1的丙酰化修饰进而促进糖异生,而丙酰转移酶GCN5能够催化PCK1发生丙酰化修饰,这些结果有望为2型糖尿病的治疗提供新的理论支持与作用靶点。