ALK抑制剂

目前研究表明产生自由基NO的一氧化氮合酶(NOS)和产生超氧阴离子(O_2~-)的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(NOX)在脊椎动物与无脊椎动物免疫中发挥重要作用,但尚无中华绒螯蟹中有关于NOS与NOX基因结构及其作用机制的研究报道。本研究主要开展了NOS与NOX基因的全长克隆、原核表达获得其重组蛋白,并通过细菌侵染、体外细菌结合与siRNA干扰等实验探究NOS与NOX基因与蛋白在中华绒螯蟹抗菌免疫中的作用机制。结果如下:1.通过RACE技术克隆得到NOS与NOX基因的全长。NOS基因全长5900 bp,包括一个3627 bp的开放阅读框(ORF),编码1208个氨基酸,蛋白理论分子量为136.7 k Da,p I为7.079。NOX基因全长4504 bp,包括3891 bp的开放阅读框(ORF),编码1296个氨基酸,蛋白理论分子量为146.1 k Da,p I为7.18。NOS氨基酸主要含有四个保守结构域,分别为NO合酶结构域,黄素氧还蛋白1结构域,黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)结合域,以及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)结合域。NOX氨基酸含有三个保守结构域,分别为Ferric-reduct结构域,黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)结合域,以及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)结合域,除此之外还有5个EF-hand结构,以及一个跨膜结构域。BLASTp同源性分析发现,NOS与NOX在不同物种中有高保守性。系统发育分析表明,NOS/NOX与甲壳类动物的NOS/NOX聚集在一起Colforsin核磁,但在系统发育树中与其他CL13900价格无脊椎动物或脊椎动物的NOS/NOX分开。2.构建NOS-p ET-32a~+与NOX-p ET-32a~+重组质粒,并诱导与纯化NOS-HIS与NOX-HIS重组蛋白。进一步对NOS-HIS与NOX-HIS细菌免疫功能研究发现,将NOS-HIS和NOX-HIS分别与四种不同的细菌(包括两种革兰氏阳性菌和两种革兰氏阴性菌)进行体外孵育后,两种重组蛋白分别能以不同的结合能力与细菌结合。其中,NOS-HIS蛋白与枯草芽孢杆菌的结合能力最强,其次是金黄色葡萄球菌和嗜水气单胞菌,与副溶血弧菌的结合能力最弱;而金黄色葡萄球菌与NOX-HIS蛋白的结合能力最强,其次是枯草芽孢杆菌,与副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的结合能力较弱。说明重组蛋白NOS-HIS和NOX-HIS是具有细菌结合能力的,而且其与革兰氏阳性菌的结合能力优于革兰氏阴性菌。3.嗜水气单胞菌刺激后检测血细胞中NOS与NOX基因的表达及血清中相关酶活性和含量的变化。嗜水气单胞菌刺激后中华绒螯蟹NOS的基因表达与酶活性变化都显著上调,其中NOS表达在3 h与6 h发生极显著上调(P<0.01),酶活性在6 h显著上调(P<0.05)。中华绒螯蟹NOX的基因表达与酶活性变化都显著下调,NOX表达在24 h发生极显著下调(P<0.01),NOX酶活性在12-48 h酶活性在12 h发生显著下调(P<0.05)。细菌刺激后血清NO、H_2O_2与O_2~-都出现开始显著下降再显著增加的变化趋势。说明机体在细菌侵染后引起NOS基因表达及酶活性的上调,以及引起NOX基因表达与酶活性的下调,使其发生一系列作用产生自由基分子(NO,O_2~-与H_2O_2),进而发挥抗菌免疫。4.Peroxinectin siRNA干扰后检测血细胞中NOS与NOX基因的表达。Peroxinectin siRNA干扰后,在嗜水气单胞菌刺激的第0 h(即Peroxinectin siRNA干扰的第48 h),中华绒螯蟹血细胞中NOS与NOX基因的表达也发生极显著下调(P<0.001)。随着嗜水气单胞菌侵染时间的增加,血细胞中NOS基因的表达也增加,24 h升至最高(P<0.05)Direct genetic effects。NOX基因的表达在12 h实验组(PXN siRNA+嗜水气单胞菌组)显著高于(P<0.05)阴性对照组(NC+嗜水气单胞菌组),在24 h实验组极显著高于(P<0.01)阴性对照组。这说明NOS与NOX基因发挥抗菌功能会受到上游Peroxinectin调控。综上所述,本研究表明中华绒螯蟹NOS与NOX在进化过程中相对保守,NOS-HIS与NOX-HIS重组蛋白能与不同的细菌以不同的结合能力进行结合。在机体受病原体刺激时,可以通过Peroxinectin形成的复合物调控,引起NOS与NOX基因表达变化,从而影响其酶活性变化,使其发生一系列作用产生自由基分子(NO,O_2~-与H_2O_2),进而发挥抗菌免疫。

非小细胞肺癌(NSCLC)中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的异常激活与远端转移、耐药、肿瘤免疫逃逸和低生存率密切相关。该研究报道了白桦酸(BA)是一种有效的mTOR信号通路抑制剂，在体外和体内对NSCLC细胞表现出有效的抗肿瘤活性。CCK-8和集落形成结果表明，BA可显著抑制H1299、A549和LLC细胞的活力和克隆生成能力。BA处理可诱导线粒体介导的H1299和LLC细胞凋亡；通过VX-765分子量下调MMP-2forensic medical examination的表达和损害上皮-间质转化，明显抑制H1299和LLC细胞的移动性和侵袭能力。研究结果表明，BA处理可抑PR-171生产商制mTOR信号通路，从而抑制M2表型（CD206阳性）巨噬细胞的某些方面。随后，为了评估白桦酸在LLC体内的抗肿瘤作用，利用LLC细胞建立小鼠异种移植肿瘤模型。结果表明，BA能显著延缓肿瘤的生长，抑制肿瘤细胞的增殖。更重要的是，给药BA后，肿瘤组织中M1/M2肿瘤相关巨噬细胞的比例显著升高，表明抗肿瘤免疫能力增强。综上所述，该研究结果表明，BA可通过mTOR信号通路使肿瘤相关巨噬细胞复极化，从而对NSCLC细胞具有抗肿瘤作用。

NK细胞免疫疗法是肿瘤免疫治疗手段当中的一个重要分类。由于NK细胞具有强大的肿瘤杀伤功能和免疫调节作用,NK细胞免疫疗法在抗肿瘤领域显现出巨大潜力和广阔前景。目前,针对NK细胞免疫疗法的新药研发工作仍持续开selleck激酶抑制剂展,并取得了许多具有实用价值的成果,但药物研发难度巨大,研发周期长达10余年且失败率高达97%。老药新用可以规避新药研发中艰巨且耗时的流程,提高研发成功率。随着新药研发风险的不断加大,老药新用逐渐成为了药物研发领域最为关注的话题之一。因此,将老药新用贯彻到NK细胞免疫疗法具有强烈的现实意义。NK细胞的杀伤活性是抗肿瘤的重要效应机制,对其标志物的监测是了解NK细胞抗肿瘤效果并促进NK细胞免疫疗法高效开发的一个重要途径。综上,本研究着重探讨了常见药物对NK细胞杀伤功能的影响并将其用于NK细胞免疫疗法,且构建了一种荧光探针用于监测药物对NK细胞杀伤活性标志物的影响。具体研究内容分述如下:1.研究常见的血脂、血压、血糖相关药物和具有抗癌功效的药物以及抗生素、抗病毒药物对NK细胞杀伤功能的影响。在此基础上,筛选出可增强NK细胞杀伤效果的药物,如阿莫西林、紫杉醇、阿司匹林、阿托伐他汀、阿卡波糖和青蒿素。这些细胞层面的研究不仅可以挖掘传统药物的新用途,还可以为寻找增强NK细胞杀伤功能的新方法奠定基础。2.研究阿莫西林增强NK细胞杀伤效果的机制并将其用于辅助NK细胞免疫治疗。阿莫西林可通过促进靶细胞缺失的NK-92mi细胞的溶细胞程序的启动,提高NK-92mi细胞在靶细胞存在下的脱颗粒水平,从而有效地增强NK-92mi细胞对MCF-7细胞的裂解作用。并且,在该过程中,阿莫西林对MCF-7细胞没有显著杀伤。在构建的小鼠乳腺癌模型中,应用阿莫西林辅助NK细胞免疫治疗,实验结果证明阿莫西林能够促进NK细胞免疫治疗的抗肿瘤效果。上述研究表明,阿莫西林用于辅助NK细胞免疫治疗的这一个策略在肿瘤治疗领域具有潜在的应用价值。3.为Barasertib采购了监测NK-92mi细胞的细胞毒性胞内活化标志物穿孔素和颗粒酶B m RNA的表达,设计并组装了一种基于poly A的纳米金球荧光探针。该探针具有良好的胞内成像效果和生物相容性。经验证,基于poly A的纳米金球荧光探针可以用于评估阿莫西林或IL-2对NK-92mi细胞的穿孔素和颗粒酶B m RNA表达的诱导作用。该探针可为NK细胞的胞内目标检测和成像提供一个有效的工具,辅助NK细animal component-free medium胞免疫疗法的研究和临床应用评估。

禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padi)是我国麦类作物上的优势种群,主要危害小麦的穗部和旗叶,导致小麦减产,并且在其远距离迁移中,能够传播病毒,影响小麦的光合呼吸作用,致作物受害。蚜虫的翅型分化是为了适应环境的变化,但与之相关机制的研究仍需进一步拓展。对禾谷缢管蚜翅型分化机理的研究,不仅能从分子水平上了解它的迁移机制,为精准测报和综合防治提供理论基础,同时对其他昆虫翅型的分化研究提供参考。本研究通过设置不同的外界环境条件来研究禾谷缢管蚜翅型分化的生态学;用酶联免疫分析法研究保幼激素、胰岛素等滴度的变化;用RT-qpcr技术研究胰岛素信号通路等基因表达水平以及差异分析。具体结果如下:1、外界环境因子对禾谷缢管蚜翅型分化的影响通过设定不同温度(10℃、20℃、25℃、30℃)、不同光周期(L/D=8 h/16、L/D=10h/14h、L/D=12h/12h、L/D=14h/10h)、不同拥挤度(5 头/皿、10头/皿、20头/皿、40头/皿、60头/皿)、不同饥饿胁迫(0h、24h、48 h、72 h)以及两种外源激素浓度(0%、1%、10%、100%)等条件,研究环境因子对禾谷缢管蚜翅型分化的影响。结果表明:在10℃、30℃胁迫条件下,有蚜翅率分别为34.0%和41.1%,与20℃、25℃二个处理间均存在显著差异;较长光照(L/D=10h/4h)和较短光照(L/D=8h/16h)均有利于有翅蚜的形成,在光周期为L/D=8 h/16 h以及L/D=10 h/14 h处理下,有翅蚜率分别达到21.6%和 25.3%,L/D=8h/16 h 与 L/D=10 h/14h,L/D=12h/12h与L/D=14h/10 h 处理间差异不显著,而L/D=8 h/16 h和L/D=10 h/14 h处理均与L/D=12 h/12 h、L/D=14h/10h处理之间差异极显著;对于初产若蚜,如果其拥挤度大,则有助于有翅个体的形成,如60头/皿处理,有翅蚜率达44.5%。5/皿与1 0/皿处理之间差异不显著,5头/皿和10头/皿与其他处理之间差异极显著,20头/皿、40头/皿和60头/皿之间差异也显著;饥饿处理后,不仅对当代若蚜的表型产生影响,同时还影响第二代蚜虫的表性变化。如饥饿处理24 h,母代蚜虫有翅率仅11.3%,有翅成蚜二代的有翅率为56.3%,无翅成蚜二代的有翅率达79.6%,饥饿处理48 h,母代蚜虫有翅率为7.4%,有翅成蚜二代的有翅率为74.0%,无翅成蚜二代的有翅率为41.5%。外源激素保幼激素类似物(ZR515)和蜕皮激素类似物(20E)都对禾谷缢管蚜翅型分化有着明显的抑制作用。2、禾谷缢管蚜不同翅型体内激素滴度的变化通过酶联免疫分析法测定了有翅蚜和无翅蚜体内不同激素滴RepSox度的差异PS-341采购。结果表明,有翅蚜虫和无翅蚜虫体内的保幼激素、蜕皮激素和胰岛素滴度差异显著。如有翅成蚜体内保幼激素滴度为76.0897 ng/mg,无翅成蚜体内保幼激素滴度为88.9103 ng/mg,二者间差异显著;有翅成蚜体内蜕皮激素滴度为7.5402 ng/mg,无翅成蚜体内蜕皮激素滴度为11.0772 ng/mg,二者间差异显著;有翅成蚜体内胰岛素滴度仅为12.1028 Hepatitis B chronicng/mg,无翅成蚜体内胰岛素滴度达27.5234 ng/mg,二者间差异也很显著。由此推断,禾谷缢管蚜翅型分化可能与保幼激素、蜕皮激素以及胰岛素信号通路有关。3、激素信号通路相关基因的表达分析通过RT-qpcr技术对禾谷缢管蚜有翅蚜和无翅蚜相关激素通路相关基因进行相关表达量测定分析,8个保幼激素通路相关基因相对表达量均有不同,其中基因FTase在禾谷缢管蚜有翅蚜和无翅蚜中的相对表达量差异显著,且基因FNTA、IDS、JHAMT1、JHAMT2在禾谷缢管蚜有翅蚜和无翅蚜中的相对表达量差异极显著;6个蜕皮激素通路相关基因相对表达量均有不同,其中基因Hr39和CBWD表达量在有翅蚜和无翅蚜中差异显著,基因lola2、CYP450和lola3表达量在有翅蚜和无翅蚜中差异极显著;6个胰岛素激素通路相关基因相对表达量均有不同,因KCNN和FOX2在有翅蚜和无翅蚜中的相对表达量差异显著,基因FOXD1和FOXD3在有翅蚜和无翅蚜中的相对表达量差异极显著。可见禾谷缢管蚜的翅型分化与蚜虫体内的激素变化以及相关基因的参与有关。

禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padi)是我国麦类作物上的优势种群,主要危害小麦的穗部和旗叶,导致小麦减产,并且在其远距离迁移中,能够传播病毒,影响小麦的光合呼吸作用,致作物受害。蚜虫的翅型分化是为了适应环境的变化,但与之相关机制的研究仍需进一步拓展。对禾谷缢管蚜翅型分化机理的研究,不仅能从分子水平上了解它的迁移机制,为精准测报和综合防治提供理论基础,同时对其他昆虫翅型的分化研究提供参考。本研究通过设置不同的外界环境条件来研究禾谷缢管蚜翅型分化的生态学;用酶联免疫分析法研究保幼激素、胰岛素等滴度的变化;用RT-qpcr技术研究胰岛素信号通路等基因表达水平以及差异分析。具体结果如下:1、外界环境因子对禾谷缢管蚜翅型分化的影响通过设定不同温度(10℃、20℃、25℃、30℃)、不同光周期(L/D=8 h/16、L/D=10h/14h、L/D=12h/12h、L/D=14h/10h)、不同拥挤度(5 头/皿、10头/皿、20头/皿、40头/皿、60头/皿)、不同饥饿胁迫(0h、24h、48 h、72 h)以及两种外源激素浓度(0%、1%、10%、100%)等条件,研究环境因子对禾谷缢管蚜翅型分化的影响。结果表明:在10℃、30℃胁迫条件下,有蚜翅率分别为34.0%和41.1%,与20℃、25℃二个处理间均存在显著差异;较长光照(L/D=10h/4h)和较短光照(L/D=8h/16h)均有利于有翅蚜的形成,在光周期为L/D=8 h/16 h以及L/D=10 h/14 h处理下,有翅蚜率分别达到21.6%和 25.3%,L/D=8h/16 h 与 L/D=10 h/14h,L/D=12h/12h与L/D=14h/10 h 处理间差异不显著,而L/D=8 h/16 h和L/D=10 h/14 h处理均与L/D=12 h/12 h、L/D=14h/10h处理之间差异极显著;对于初产若蚜,如果其拥挤度大,则有助于有翅个体的形成,如60头/皿处理,有翅蚜率达44.5%。5/皿与1 0/皿处理之间差异不显著,5头/皿和10头/皿与其他处理之间差异极显著,20头/皿、40头/皿和60头/皿之间差异也显著;饥饿处理后,不仅对当代若蚜的表型产生影响,同时还影响第二代蚜虫的表性变化。如饥饿处理24 h,母代蚜虫有翅率仅11.3%,有翅成蚜二代的有翅率为56.3%,无翅成蚜二代的有翅率达79.6%,饥饿处理48 h,母代蚜虫有翅率为7.4%,有翅成蚜二代的有翅率为74.0%,无翅成蚜二代的有翅率为41.5%。外源激素保幼激素类似物(ZR515)和蜕皮激素类似物(20E)都对禾谷缢管蚜翅型分化有着明显的抑制作用。2、禾谷缢管蚜不同翅型体内激素滴度的变化通过酶联免疫分析法测定了有翅蚜和无翅蚜体内不同激素滴RepSox度的差异PS-341采购。结果表明,有翅蚜虫和无翅蚜虫体内的保幼激素、蜕皮激素和胰岛素滴度差异显著。如有翅成蚜体内保幼激素滴度为76.0897 ng/mg,无翅成蚜体内保幼激素滴度为88.9103 ng/mg,二者间差异显著;有翅成蚜体内蜕皮激素滴度为7.5402 ng/mg,无翅成蚜体内蜕皮激素滴度为11.0772 ng/mg,二者间差异显著;有翅成蚜体内胰岛素滴度仅为12.1028 Hepatitis B chronicng/mg,无翅成蚜体内胰岛素滴度达27.5234 ng/mg,二者间差异也很显著。由此推断,禾谷缢管蚜翅型分化可能与保幼激素、蜕皮激素以及胰岛素信号通路有关。3、激素信号通路相关基因的表达分析通过RT-qpcr技术对禾谷缢管蚜有翅蚜和无翅蚜相关激素通路相关基因进行相关表达量测定分析,8个保幼激素通路相关基因相对表达量均有不同,其中基因FTase在禾谷缢管蚜有翅蚜和无翅蚜中的相对表达量差异显著,且基因FNTA、IDS、JHAMT1、JHAMT2在禾谷缢管蚜有翅蚜和无翅蚜中的相对表达量差异极显著;6个蜕皮激素通路相关基因相对表达量均有不同,其中基因Hr39和CBWD表达量在有翅蚜和无翅蚜中差异显著,基因lola2、CYP450和lola3表达量在有翅蚜和无翅蚜中差异极显著;6个胰岛素激素通路相关基因相对表达量均有不同,因KCNN和FOX2在有翅蚜和无翅蚜中的相对表达量差异显著,基因FOXD1和FOXD3在有翅蚜和无翅蚜中的相对表达量差异极显著。可见禾谷缢管蚜的翅型分化与蚜虫体内的激素变化以及相关基因的参与有关。

糖尿病治疗的进展期于找到能够实时监测机体血糖水平并精确释放所需剂量胰岛素的载体材料，因此开发可根据葡萄糖浓度变化情况而AZD6738供应商进行自我调节的智能胰岛素控释载体具有重要的临床应用价值。鉴于此，本工作创建了一种可用于胰岛素控制释放的温度和葡萄Taurine糖双重响应性共聚物微囊的制备策略。首先采Medical honey用自由基聚合法合成以N-异丙基丙烯酰胺（NIPAAm）和3-丙烯酰胺基苯硼酸（AAPBA）为主要成分的无规共聚物，运用底喷包衣技术在玻璃微球表面包覆共聚物涂层，然后通过加热退火使共聚物固定接枝于微球表面，利用氢氟酸溶解模板，从而形成共聚物微囊，同时对其化学组成、尺寸分布、平衡溶胀率、表面形貌、稳定性能、细胞毒性及胰岛素控释能力进行测试分析。结果表明该共聚物微囊尺寸分布相对均匀，稳定性良好，无细胞毒性，具有显著的温敏性和糖敏性，且可利用其双重响应特性进行胰岛素瘤细胞的固定负载和分泌胰岛素的控制释放。此智能响应性胰岛素控释载体的制备方案可为人工胰腺的构建提供崭新思路及技术支持。

【研究背景】纯系选育是作物育种的核心内容,传统选系过程需要漫长的连续多代自交才能达到育种要求,而单倍体育种技术能够实现育种材料的快速纯合,大大加快选系进程,是现代育种的关键技术。经过二十多年的连续研究,以杂交诱导为特点的玉米单倍体育种技术已在关键诱导基因克隆、高频诱导、精准鉴别和高效加倍及产业应用等方面取得突破性进展,促进了玉米育种技术的转型升级。【材料与方法】为进一步玉米单倍体技术研发和应用的成功模式拓展至其他作物,本团队在已克隆的单倍体诱导关键基因ZmPLA1和Zm DMP基础上,通过蛋白序列和同源基因的比对,在小麦、水稻等单子叶作物及和番EPZ-6438抑制剂茄、油菜、烟草等双子叶作物中发现了相关基因。进一步利用基因编辑技术创制相关材料的诱导基因突变体,验证其单倍体诱导效果。同时,引入胚特异表达的单倍体鉴别标记系统,实现单倍体和二倍体种子的直接鉴别,期望以此建立不同物种通用的单倍体育种技术体系。【结果与分析】研究发现,两个关键单倍体诱导基因具有不同的序列特点,其中ZmPLA1在单子叶作物中较为保守,小麦、水稻等作物的ZmPLA1同源基因蛋白序列的保守性达70%以上。而ZmDMP在双子叶植物中表现较高的保守性,如在番茄、烟草、拟南芥和油菜的同源蛋白序列保守性达70%以上。在创制的Rural medical educationZm PLA1同源基因突变体测试中,小麦Tapla-A Tapla-D双突变体诱导效率达10%左右,水稻OsPLA1基因的突变体诱导效率为1%～2%。在番茄、油菜和拟南芥中通过编辑ZmDMP同源基因,获得的突变体材料均能够有效诱导获得单倍体种子,三www.selleck.cn/products/mrtx1133个物种的单倍体诱导效率均能达2%左右。结果证明了基于诱导基因Zm PLA1和Zm DMP信息有可能创建跨作物的通用单倍体诱导系统。为实现低频条件下双子叶作物单倍体的高效鉴别,利用胚特异启动子驱动的RFP荧光蛋白在双子叶作物单倍体种子鉴别过程中具有良好的效果,在油菜和拟南芥的单倍体籽粒鉴别准确率可达85%以上,在番茄上的准确率更接近100%;另外,基于高通量单倍体和DH纯系筛选的需要,提出了全息选择和组配技术策略,旨在通过多维度的单倍体和DH系的工程化方法研究,进一步促进快速育种技术的精准高效应用。【结论】上述研究结果进展有望开辟多作物单倍体快速育种技术体系的新路径,为作物育种产业技术发展提供有力支撑。

目的 探讨滑胎安胎协定方促进滋养细胞迁移侵袭治疗复发性流产（RSA）的作用机制。方法 体外培养蜕膜巨噬细胞（DM）并分为中药干预组（加入滑胎安胎协定方含药血清）、IL-4诱导组和空白对照组；采用流式细胞术检测DM分型，ELISA法检测DM中粒细胞集落因子（G-CSF）含量。共培养DM与滋养细胞HTR-8/SVneo细胞，分为DM组、DM+中药组、G-CSF组和空白对照组；采用细胞计数试剂盒-8法检测细胞存活率，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，Western blot检测磷脂酰肌醇三羟基激Crizotinib酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)/细胞外调节蛋白激酶（ERK）和上皮间质转化（EMT）相关因子蛋白表达水平。结果 DM实验显示，与空白对照组比较，中药干预组、INVP-TNKS656配制L-4诱导组DM数量均明retina—medical therapies显减少（均P<0.05）,M2型DM数量均明显增加（均P<0.05），而M1型DM数量比较差异均无统计学意义（均P>0.05）;DM中G-CSF含量均明显升高（均P<0.05）。滋养细胞实验显示，与空白对照组比较，DM组、DM+中药组、G-CSF组滋养细胞存活率、迁移率均明显升高（均P<0.05），滋养细胞侵袭数量均明显增多（均P<0.05）;DM组、DM+中药组、G-CSF组滋养细胞p-AKT/AKT、p-ERK1/2/ERK1/2、波形蛋白表达水平均明显升高（均P<0.05）,DM+中药组、G-CSF组上皮细胞钙黏蛋白表达水平均明显降低（均P<0.05）。结论滑胎安胎协定方可通过促进DM分泌G-CSF来激活PI3K/AKT/ERK信号通路和EMT进程，进而调控滋养细胞增殖、迁移和侵袭，从而防止RSA的发生。

目的 探讨血管生成素(ANG)及其突变体对膀胱癌血管生成的影响及作用机制。方法 构建ANG突变质粒(BIU87-ANG~(H13R)、BIU87-ANG~(H114R)),与BIU87-ANG组成实验组，BIU87-C1为对照组。采用pEGFP-C1-ANG~(H13R)、pEGFP-C1-ANG~(H114R)、pEGFP-C1-ANG及pEGFP-C1稳定转染膀胱癌BIU87细胞，构建稳定转染细胞系；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉Elexacaftor试剂素靶蛋白(mTOR)通路中的相关靶蛋白；采用鸡胚尿囊绒NSC 127716毛膜(CAM)血管生成实验和小管形成实验检测ANG及其突变体对膀胱癌血管生成的影响；采用双荧光素酶报告基因系统检测过表达核糖核酸酶抑制因子时核糖体RNA(rRNA)的转录活性。结果 稳定转染ANG及其突变体的膀胱癌BIU87细胞系构建成功；当ANG及突变体过表达时，磷酸化PI3K、磷酸化GSK3(α/β)、磷酸化AKT、磷酸化mTOR、磷酸化PTEN水平增加；CAM血管生成实验和小管形成实验结果表明，实验组(BIU87-ANG~(H13R)、BIU87-ANG~(H114R)、BIU87-ANG)CAM血管生成及小管形成均明显多于对照组(BIU87-C1),差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果表Biological pacemaker明过表达核糖核酸酶抑制因子抑制rRNA的转录活性。结论 ANG及其突变体可能通过PI3K/AKT/mTOR信号通路促进膀胱癌肿瘤血管生成。

背景:前列腺癌的发病率及致死率逐年升高,雄激素剥夺疗法(Androgen Deprivation Therapy,ADT)是前列腺癌的常见疗法之一,ADT虽有一定疗效,但是病情在短暂控制后常会发生恶化,并逐步演变为去势抵抗性前列腺癌(Castration-Resistant Prostate Cancer,CRPC)。研究表明在ADT治疗后肾上腺雄激素—硫酸脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone,DHEAS)由有机阴离子转运多肽2B1(Organic Anion Transporting Polypeptides 2B1,OATP2B1)转运进入癌细胞内转化为强效雄激素二氢睾酮,进一步激活雄激素受体(Androgen receptor,AR)并促进增殖,产生去势抵抗。许多中药活性组分如18β-甘草次酸(18β-Glycyrrhizic acid,18β-GA)等能抑制OATP2B1的转运功能。恩杂鲁胺(Enzalutamide,ENZ)是一种AR拮抗剂,能阻断雄激素与AR结合,但部分患者最终在ENZ治疗过程中产生耐药性。因此,研究中药活性组分18β-GA阻断OATP2B1摄取DHEAS这一途径减少雄激素生成,并与雄激素受体抑制剂ENZ协同延缓肿瘤进展,将为CRPC的防治提供新方法、新思路。目的:研究18β-GA通过抑制OATP2B1摄取DHEAS减少细胞内雄激素生成进而与雄激素受体拮抗剂ENZ协同对抗去势抵抗性前列腺癌的作用机制,为CRPC的防治探寻新方法、新策略。方法:1、使用RT-q PCR和Western blotting技术研究雄激素剥夺培养条件下前列腺癌LNCap和22RV1细胞中转运体OATP2B1的表达情况,细胞毒性实验和克隆形成实验探究DHEAS对细胞增殖情况的影响。2、利用三重四极杆串联质谱技术(LC-MS/MS),建立HEK293细胞中DHEAS浓度的检测方法。3、使用LC-MS/MS分析方法研究OATP2B1-HEK293细胞模型中18β-GA对OATP2B1介导的DHEAS摄取的抑制作用及其抑制模式。4、使用LC-STM2457价格MS/MS分析方法研究雄激素剥夺培养条件下前列腺癌22RV1细胞中18β-GA对OATP2B1介导的DHEAS摄取的抑制作用,使用Western blotting实验、细胞毒性实验、克隆形成实验、Transwell及划痕实验、TUNEL实验验证18β-GA联合雄激素受体拮抗剂ENZ协同对抗肿瘤细胞的生物学活性作用。5、使用裸鼠异种移植模型,考察去势条件下18β-GA对体内肿瘤细胞摄取DHEAS的影响,通过生化指标检测、苏木精-伊红染色、免疫组化等方法揭示18β-GA基于OATP2B1介导DHEAS摄取抑制与ENZ协同抗去势抵抗性前列腺癌的作用机制。结果:1、在雄激素剥夺培养条件下,LNCap和22RV1细胞中OATP2B1的m RNA水平分别上调458.74%和108.48%,蛋白水平分别上调89.51%和68.89%。DHEAS会促进细Colforsin体内胞的增殖,与正常组相比,LNCap和22RV1细胞组的细胞活力分别增加了21.78%和20.79%。2、本实验建立的检测DHEAS浓度的LC-MS/MS定量分析方法灵敏、稳定、可靠,其特异性、线性范围、提取回收率、基质效应、批内批间精密度和准确度均符合相应接受标准。3、在OATP2B1-HEK293细胞中,环孢菌素A(OATP2B1的经典抑制剂)可明显抑制DHEAS的摄取转运,进一步证明DHEAS是OATP2B1的底物,其摄取动力学参数Km(μM)为10.393±2.33,Vmax(pmol/mg protein/min)为24.25±2.03。18β-GA显著抑制OATP2B1对DHEAS的摄取,其IC50值为3.51±1.19μM。在系列浓度DHEAS的基础上外加18β-GA(100μM)后,发现DHEAS的摄取动力学参数Vmax值明显减小(从44.82±1.28减少至34.87±0.74 pmol/mg protein/min),但是Km值几乎不变,提示18β-GA可能是通过非竞争性抑制模式,对OATP2B1摄取DHEAS产生抑制。4、在雄激素剥夺培养条件下,DHEAS(10μM)会促进前列腺癌细胞22RV1增殖,18β-GA(40μM)可对抗DHEAS引起的细胞增殖效应。18β-GA联用ENZ可协同对去势抵抗前列腺癌,在增殖、迁移、凋亡方面都表现出一定的协同对抗作用。5、在异种移植裸鼠体内,去势条件下腹horizontal histopathology腔注射DHEAS可促进肿瘤的生长,在给DHEAS的基础上,18β-GA可抵消其促进作用;18β-GA和ENZ联用可以显著抑制肿瘤生长,抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。结论:1、18β-GA能明显抑制OATP2B1介导的DHEAS摄取转运,是OATP2B1的抑制剂,在去势抵抗前列腺癌中可能发生基于OATP2B1介导的相互作用。2、18β-GA抑制DHEAS经OATP2B1的摄取转运,进而减少雄激素的生成,18β-GA与雄激素受体拮抗剂ENZ联用通过减少配体的生成和抑制雄激素受体共同抵抗去势抵抗前列腺癌进展。