鸡皮肤组织的冷冻保存以及复苏后成纤维细胞的培养

试验旨在探究程序化低温保存时两种渗透性冷冻保护剂对鸡皮肤组织保存的影响。从孵化9 d的鸡胚中分离皮肤组织,剪碎为1 mm~3大小的组织块,对组织块冷冻保存后复苏培养并统计复苏率,通过CCK8试验、EDU试验检测冻存复苏后细胞的增殖能力、PI染色检测细胞周期分selleck布、JC-1检测线粒体膜电位检测,qRT-PCR检测标记基因的差异表达。结果显示:使用15%二甲基亚砜和20%甘油冻存的组织块复苏效率分别为(95.8±1.4)%和(92.5±2.5)%,显著高于其他冷冻保护剂组合(P<0.05)。CCK8和EDU试验中,15%的二甲基亚砜和20%甘油冻融组织块培养的细胞与对照组相比细胞增殖速度无显著性差异(P>0.05);与对照组比较,15%二甲基亚砜和20%甘油冻融组织块培养的成纤维细胞G1、G2、S期都未有显著差异(P>0.05);线粒体膜电位检测显示20%甘MFI Median fluorescence intensity油保存的组织块培养的成纤维细胞其膜电位与对照组相比出现了显著下Tezacaftor采购降(P<0.05),15%二甲基亚砜和20%甘油冻融组织块培养的成纤维细胞标记基因的表达水平与对照组相比较无显著差异(P>0.05)。结果表明,15%二甲基亚砜和20%甘油冻存的鸡皮肤组织块复苏效率无显著差异,但是15%二甲基亚砜的冻存效果要优于20%甘油。

构建“图灵图案”和纳米颗粒组成的智能水凝胶用于循环肿瘤细胞的捕获、培养和分析鉴定

目的:本文构建”图灵图案”和纳米颗粒协同作用的智能水凝胶微流体界面用于高效捕获、培养和临床药物分析循环肿瘤细胞。通过调控”图灵图案”中峰-谷相对高度、峰-峰宽度以及表面粗糙度探GNE-140究其结构尺度与CTCs捕获效率和培养稳定传代的细胞株之间的关系,建立对乳腺癌、肝癌、食道癌动物和患者外周血中CTCs的捕获、培养进行细胞迁移、细胞侵袭、细胞状态、细胞蛋白分泌量和临床药敏性分析等研究,探讨疾病状态下CTCs与实体瘤各种临床指标及疾病转归的关系,为病人进行个体化的治疗提供理论和实验依据。材料与方法:1、构建”图灵图案”与纳米颗粒协同作用智能水凝胶界面的微流体及其表征;2、未改性水凝胶表面、改性水凝胶表面、微流体界面对细胞的生物相容性、贴附和生长增殖研究;3、微流体界面对外周血中活体CTCs的高效捕获及培养。收集乳腺infectious endocarditis癌、宫颈癌、肺癌动物和患者的外周血,并对外周血梯度离心后取中间带有CTCs的液体,将悬液滴加在4.5cm2的水微流体界面上。对比全自动CTCs扫描仪上检测CTCs的数量来确定微流体界面捕获效率;4、将培养成功的CTCs细胞株和实体瘤细胞株进行临床药敏性分析。捕获和培养乳腺癌、宫颈癌、肺癌动物和患者的外周血中CTCs进行生物学研究(细胞计selleckchem数、细胞迁移、细胞侵染、细胞状态、细胞蛋白分泌含量等)和临床药敏性分析,发现疾病状态下CTCs与实体瘤发生变化的重要参数,如分子分型、免疫原性、耐药性等,探讨疾病状态下CTCs与实体瘤各种临床指标及疾病转归的关系。结果:1、构建”图灵图案”与纳米颗粒协同作用智能水凝胶界面的微流体;2、通过聚合物的摩尔比和含水量调控水凝胶力学性能,包括应力-应变与韧性;3、对比未改性水凝胶表面、改性水凝胶表面、微流体界面上MCF-7、HeLa、HCC827细胞的贴附态;4、水凝胶微流体界面可高效捕获外周血中CTCs。结论:1、运用化学交联和梯度脱水的方法成功构建”图灵图案”与纳米颗粒协同作用智能水凝胶界面的微流体;2、在应力-应变与韧性表征中当摩尔比(nAc/nAM)为0.2时,应力达到最大为130KPa,韧性达到510KJ/m3。含水量(ms/m)为0.5时,应力达到最大248KPa,韧性达到698KJ/m3;3、MCF-7、HeLa、HCC827细胞成功在水凝胶微流体界面贴附;4、水凝胶微流体界面捕获外周血中CTCs的效率大于90%。

Smad2基因在肺癌组织和细胞中的表达特点

目的 探讨Smad2基因在肺癌组织和细胞中的表达特点.方法 分析Smad2的mRNA和蛋白在肺癌组织和癌旁正常组织中的表达情况;收集患者的临床病理指标,并进行5 a随访,记录患者生存情况,分析与Smad2基因表达的关系.培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B、人肺癌细胞A549,检测Smad2的mRNA和蛋白表达水平;使用10μg/L的3-甲基胆蒽连续染毒培养至第10代、第20代、第30代、第40代,检测Smad2基因表达变化;使用Smad2过表达质粒、Anti-Smad2质粒分别转染A549细胞,比较细胞增殖、迁移和侵袭能力.结果 肺癌组织中Smad2的mRNA和Watch group antibiotics蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.01).人Y-27632浓度肺癌细胞A549中Smad2的mRNA和蛋白表达水平明显高于人正常肺上皮细胞BEAS-2B(P<0.05).随着3-甲基胆蒽诱导人正常肺上皮细胞BEAS-2B恶性转化传代数的增加,Smad2的mRNA和蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05).N2~N3期的肺癌患者Smad2基因低表达率明显高于N0~N1期的患者,肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期的肺癌患者Smad2基因低表达率明显高于Ⅰ~Ⅱ期的患者(P<0.01).Smad2基因低表达肺癌患者术后生存时间、3 a生存率、5 a生存率均明显短于Smad2基因过表达患者(P<0.01).Smad2过表达组人肺癌细胞A549增殖能力、迁移细胞数、侵袭细胞数明显低于对照组,Smad2低表达组细胞增殖能力、迁移细胞数、侵袭细胞数明显高于对照组和Smad2过表达组(P<0.01).结论 Smad2基Tofacitinib因在肺癌组织和细胞中表达下调,可提升肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,进而参与肺上皮细胞癌变过程,且与患者肿瘤分期和术后生存时间密切相关.

热疗通过靶向HOXB1诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨热疗调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的潜在机制。方法 在37、40、43、46℃的温度下处理NSCLC细胞系A549、HCC827、NCI-H1299,并分析热疗对NSCLC细胞活力和凋亡水平的影响。将37、43℃处理的NSCLC细胞系进行转录组高通量测序并分析3种细胞系中同时被调控的基因。通过遗传学筛选鉴定热疗调控NSCLC细胞凋亡的关键分子同源盒结构基因B1(HOXB1)。siGFP或siHOXB1敲低后检测NSCLC细胞系在43℃下的凋亡水平。过表达Vector或HOXB1后检测NSCLC细胞系在37℃下的凋亡水平。siGFP或siHOXB1敲低后采用荧光素酶报告实验检测NF-κB的活性。结果 相比于37℃,NSCLC细胞系在40、43、46℃下的活力均显著降低(P<0.05),凋亡水平Trichostatin A均显著上升(P<0.05)。相比于37、40、46℃下,NSCLCQ-VD-Oph细胞系在43℃的凋亡水平显著上升(P<0.05)。与siGFP组比较,敲低HOXB1后,43℃时NSCLC细胞系A549、HCC827、NCI-H1299的凋亡水平下降(P<0.05BioMark HD microfluidic system)。与Vector组比较,过表达HOXB1后,37℃时NSCLC细胞系A549、HCC827、NCI-H1299的凋亡水平上升(P<0.05)。与siGFP组比较,敲低HOXB1后,43℃时NSCLC细胞系中荧光素酶活性上升(P<0.05)。43℃条件下,免疫共沉淀通过HOXB1抗体能够结合NSCLC细胞系A549、HCC827、NCI-H1299的NF-κB。结论 热疗处理NSCLC细胞后,HOXB1表达水平上升,HOXB1可与NF-κB结合并抑制NF-κB的活性,促进了NSCLC细胞凋亡。

健康人群恶性肿瘤的检出分布对肿瘤筛检策略的警示

selleck PF-03084014景我国恶性肿瘤的发病率总体呈现上升趋势,早发现、早治疗是改善恶性肿瘤患者预后甚至是根治恶性肿瘤的先决条件。然而,如何在肿瘤筛检项目中找到可靠、低成本的肿瘤筛检方法值得临床探究。目的了解恶性肿瘤在健康体检人群中的检出分布及其检出方法,以利于今后更好地进行肿瘤筛查工作。方法回顾性分析2016年1月—2018年12月在航天中心医院健康管理部健康体检者共185 938例(已排除既往有恶性肿瘤者)的体检结果(男性105 204例,女性80 734例),根据年龄分为≤29岁、30~44岁、45~59岁、60~74岁、≥75岁五个年龄组,筛选出各检查方法提示恶性肿瘤高风险者,追踪随访其进一步检查诊断结果,统计其中确诊恶性肿瘤病例数。结果确诊为恶性肿瘤患者153例,检出前5位PCI-32765的恶性肿瘤依次为肺癌(0.21‰)、甲状腺癌(0.12‰)、乳腺癌(0.11‰)、肝癌(0.09‰)、宫颈癌(0.06‰)。60~74岁年龄组恶性肿瘤检出率最高(2.30‰),其他组肿瘤检出率依次由高到低为≥75岁年龄组(1.75‰),45~59岁年龄组(1.46‰),30~44岁年龄组(0.38‰),≤29岁年龄组(0.15‰)。男性肺癌和肝癌检出率(分别为0.28‰、0.13‰)高于女性(分别为0.12‰、0.02‰)(χ~2=4.318,χ~2=5.032,P均<0.05)。女性乳腺癌、甲状腺癌检出率(Fecal immunochemical test分别为0.26‰、0.22‰)高于男性(分别为0、0.05‰)(χ~2=27.368,χ~2=9.989,P均<0.01)。检出方法主要为胸部CT或数字X线摄影技术(DR)、超声、肿瘤标志物、宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)。肺癌主要由胸部CT/DR检出,超声是盆腹腔及腺体肿瘤筛检的主要手段,肿瘤标志物是肝癌、胰腺癌、胃癌、结直肠癌、前列腺癌的灵敏度及特异度高的检出方法。结论在健康体检人群中进行恶性肿瘤筛查意义重大,恶性肿瘤高发年龄段为60~74岁,主要检出方法为胸部CT或DR、超声、肿瘤标志物、TCT,对高发病率的恶性肿瘤进行早筛尤为重要。体检中心应设立切实可靠的肿瘤早筛方法。

电针对急性心肌缺血大鼠铁死亡-脂质代谢通路调控机制研究

目的 观察电针对急性心肌缺血(AMI)大鼠铁死亡-脂质代谢通路的影响,探讨电针保护心肌细胞的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为伪手术组、模型组和电针组,每组15只。结扎冠状动脉复制AMI模型,电针组给予电针神门-通里段,每日1次,每次30 min,连续3 d,剩余两组不予治疗。电针结束后采集大鼠腹主动脉血液和心肌组织。用Powerlab记录大鼠心电图;ELISA法检测大鼠血清肌钙蛋白I(cTn-I)含量;HE染色对心肌组织做病理观察;化学荧光法检测心肌组织活性氧(ROS)水平;Western blot检测心肌组织长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSBMS-907351试剂L4)、磷脂胆碱酰基转移酶3(LPCAT3)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX-4)蛋白表达;RT-PCR检测ACSL4、LPCAT3、GPX-4 mRNA的表达;比色法检测心肌组织谷胱甘肽(GSH)水平。结果 与伪手术组比,模型组大鼠心电图ST段抬高;血清cTn-I上升(P<0.05);心肌纤维排列紊乱,纤维间隙增宽,细胞肿胀明显;心肌组织中ROS水平升高(P<0.05);ACSL4、LPCAT3蛋白及mRNA表达升高(P<0.05),GPX-4蛋白及mRNA表达降低(P<0.05);确认细节GHS水平降低(P<0.05)。与模型组相比,电microbial symbiosis针组大鼠心电图ST段下降;血清cTn-I降低(P<0.05);心肌纤维间隙缩小,细胞肿胀减轻;心肌组织中ROS水平降低(P<0.05);ACSL4、LPCAT3蛋白及mRNA表达降低(P<0.05),GPX-4蛋白和mRNA表达升高(P<0.05);GHS水平升高(P<0.05)。结论 电针可能通过升高细胞内GSH水平,激活GPX-4系统,抑制铁死亡脂质代谢通路中ROS水平以及ACSL4、LPCAT3活性,发挥保护心肌细胞作用。

加味温胆汤联合氯沙坦钾治疗原发性高血压的疗效及对血清MMP9、NO、ET-1水平的影响

目的:探讨加味温胆汤联合氯沙坦钾治疗原发性高血压(EH)的疗效及对血清基质金属蛋白酶9(MMPBMS-3548259)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)水平的影响。方法:选取2018年1月~2020年1月泸州市中医医院收治的原发性高血压患者100例,随机数字表法分为对照组和观察组,各50例。对照组接受氯沙坦钾治疗,观察组接受加味温胆汤联合氯沙坦钾治疗。对比两组患者临床疗效和治疗后中医证状积分、血压水平、血清指标水平和不良反应发生情况。结果:观察组临床治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05);治疗后观察组中医证状积分、收缩压、舒张压和血清MMP9、ET-1水平明显低于对照组,血清NO水平明显高于对照组(P<0.05);本组患者均未出现明显不良反应。购买Ceralasertib结论:加味温胆汤联合氯沙坦钾治疗EH疗效确切,可有效改善Tibiofemoral joint中医症状,控制血压水平,调节血清MMP9、NO、ET-1水平,且安全性高,值得推广。

紫云英还田对黄泥田土壤理化和微生物特性及水稻产量的影响

为探明紫云英连年还田化肥减施单季稻田土壤性质及水稻产量的变化规律,依托位于福建省东部12年黄泥田紫云英-单季稻轮作定位试验,研究了不施肥(C_0)、单施化肥(C_(100))、紫云英还田(M)、紫云英还田+全量化肥(MC_(100))及紫云英还田+减量20%化肥(MC_(80))处理的土壤理化性状、微生物群落结构和功能及稻谷产量的变化。结果表明:C_(100)、M、MC_(100)、MC_(80)处理土壤有机碳含量比C_0分别提高6.97%、15.05%、10.38%、11.15%,全氮分别提高9.52%、18.25%、15.87%、15.87%,硝Dibutyryl-cAMP浓度态氮分别提高6.51%、69.52%、66.87%、78.19%(P<0.05)。冗余分析表明,土壤有机碳、全氮、硝态氮含量对细菌和古菌群落结构和功能有显著的影响。与C_0相比,C_(100)、M、MC_(100)和MC_(80)处理土壤慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)丰度分别增加0.52%、24.30%、7.59%、11.93%,其中M处理增加达显著水平(P<0.05);分枝杆菌属(Mycobacterium)分别增加5.51%、21.58%、10.00%、14.74%,其中M处理增加显著(P<0.05);亚硝化杆菌属(Candidatus_Nitrosotalea)分别增加22.93%、17.21%、65.39%、89.89%,其中MC_(100)和MC_(80)处理增加均达显著水平(P<0.05)。相比C_0,M、MC_(100)和MC_(80)处理土壤链霉菌属(Streptomyces)分别增加6.76%、16.89%、12.16%,其中MC_(100)处理增加显著(P<0.05),而C_(100)却减少2.50%。物种贡献度分析发现,土壤碳代谢和氨基酸合成的主要功能微生物为细菌慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、链霉菌属(Streptomyces)和古菌亚硝化杆菌属(Candidatus_Nitrosotalea)。Mmedium-sized ring、MC_(100)、MC_(80)处理稻谷产量比C_0分别增加9.68%、19.16%、18.72%。阐明selleck化学紫云英培肥处理能提升单季稻黄泥田土壤肥力水平,调节土壤微生物群落结构,促进土壤碳水化合物和氨基酸代谢。

不同二代ALK-TKIs二线治疗ALK阳性晚期非小细胞肺癌的耐药基因变异分子图谱差异

目的 比较和探索不同二代间变性淋巴瘤激酶-酪氨酸激酶抑制剂(anaplastic lymphoma kinase-tyrosine kinase inhibitors,ALK-TKIs)获得性耐药基selleck激酶抑制剂因变异图谱差异,为ALK阳性晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的全程管理提供依据。方法 本研究为观察性研究,Biogeophysical parameters纳入2014年至2020年共计103例ALK阳性晚期NSCLC患者,在一线克唑替尼治疗和二线二代ALK-TKIs治疗发生耐药后,通过组织样本或液体样本行下一代测序(next generation sequencing, NGS)检测,分析不同的二代靶向药物发生获得性耐药的基因变异分子图谱的异同。结果 二代TKIs获得性耐药以ALK激酶结构selleck化学域突变为主(66.7%),发生率V3型显著高于V1型(85.7%vs. 55.6%,P=0.003 9);最常见G1202R/K和L1196M,前者多见于V3型(57.1%vs.4.4%,P<0.000 1),后者在V1型相对多见(31.1%vs. 14.3%,P=0.079 4)。阿来替尼耐药以ALK继发突变发生率最高,常见G1202R(31.6%)和G1269A(12.3%);色瑞替尼G1202R、L1196M、F1174X和C1156Y发生率较高;而布加替尼F1174X、D1203N、E1210K发生率较高。D1203N(0 vs. 6.7%vs. 20%,P=0.000 2)和E1210K(1.8%vs. 0 vs.15%,P=0.003 5)主要发生在布加替尼耐药后。ALK-TKIs的序贯应用可引起ALK基因的复合突变。结论 二代ALK-TKIs二线治疗耐药后基因变异图谱复杂多样,不同药物、不同ALK变体之间差异较大,且存在复合突变,增加后线治疗难度,因此ALK阳性晚期NSCLC的临床治疗决策需充分考虑耐药分子机制后进行全局化管理。

核磁共振扩散加权成像在胰腺肿瘤定性诊断中的应用

目的探讨核磁共振(MR)扩散加权成像(DWI)在胰腺肿瘤定性诊断中的应用价值。方法选取2018年1月至2019年12月在河南宏力医院就诊的76例胰腺肿瘤患者为研究对象,对所有患者均行MR、DWI等检查,以穿刺活检结果为”金标准”,分析MR、DWI单一检查与联合检查灵敏度、特异度、准确度、恶性预测值、良性预购买Dibutyryl-cAMP测值。结果经穿刺活检结果得知,入选76例胰腺肿瘤患者中34例诊断为恶性,占44.74%,42例为良性,占55.26%; MR、DWI联合检查的准确度(94.74%)、灵敏度(94.12%)、特异度(95.24%)、恶性预测值(94.12%)、良性预测值(95.24%)均高于MR检查(81.58%、82.35%、80.95%、77.78%、85.00%)及DWI检查(88.16%、88.24%、Properdin-mediated immune ring88.10%、85.71%、90.24%);且MR诊断与穿刺活检结果具有理想一致性(Kappa=0.630),DWI诊断与穿刺活检结果具有极好的一致性(Kappa=0.761),MR、DWI联合诊断与穿刺活检结果具有极好的一致性(Kappa=0.894)。结论胰腺肿瘤患MEK抑制剂者应用MR联合DWI诊断具有较高灵敏度、特异度及准确度,可为临床早期判断胰腺良恶肿瘤提供可靠依据,为患者制定治疗方案提供指导依据,值得临床推广应用。