ALK抑制剂

【目的】研究硒蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidases 4,GPX4)失活如何参与调控脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应及其潜在的分子机制。【方法】体外培养RAW264.7巨噬细胞，以DMSO为对照，使用0.1～5.0μmol/L GPX4抑制剂FIN56处理，通过CCK-8法检测细胞活力和Western blotting检测GPX4蛋白表达水平，确定抑制剂最适浓度。将RAW264.7巨噬细胞分为4组：对照组，添加DMSO培养24 h; FIN56(GPX4抑制剂)组，添加0.5μmol/L FIN56培养24 h; DMSO-LPS组，DMSO培养24 h后使用LPS(100 ng/mL)刺激3 h; FIN56-LPS组，FIN56培养24 h后使用LPS刺激3 h。各组细胞经培养后，利用荧光探针2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2′,7′-dichlorodi-hydrofluorescein diacetate, H_2DCFDA)检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平，使用试剂盒法检测细胞内丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平，分别使用ELISA和荧光定量PCRMolecular Diagnostics检测促炎细胞因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌水平和基因表达量，使用Western blotting法检测Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)信号通路相关蛋白表达水平。【结果】与DMSO处理相比，0.5μmol/L FIN56处理巨噬细胞24 h对细胞活性无显著影响(P>0.05),且显著降低GPX4蛋白表达水平(P<0.05),故选用0.5μmol/L FIN56用于后续实验。与对照组相比，FIN56和LPS均显著增加了ROS积累(P<0.05),而与DMSO-LPS组相比，FIN56-LPS组ROS水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比，LPS可显著增加小鼠巨噬细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达量和IL-6含量，以及c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-JunNirogacestat细胞培养 N-terminal protein kinase, JNK)和c-Jun磷酸化水平(P<0.05),而FIN56可显著下调LPS诱导的IL-6的mRNA表达量和含量及JNK和c-Jun磷酸化水平(P<0.05),但对p38蛋白(p38 MAPK,p38)、细胞外调节蛋白激酶(phosphorylate extracellular regulated protein kinselleck BAY 73-4506ases1/2,Erk1/2)蛋白表达水平无显著影响(P>0.05)。【结论】GPX4失活可有效阻断JNK和c-Jun磷酸化，从而特异性抑制LPS诱导的巨噬细胞的炎症反应。该结果可为以GPX4为靶点研发抗炎治疗策略提供理论依据。

目的了解自噬在糖尿病肾病大鼠肾小球的表达情况,观察胰岛素降糖治疗对糖尿病肾病大鼠足细胞自噬的影响,探讨自噬在糖尿病Tamoxifen分子量肾病进程中的作用。方法选择50只雄性wistar大鼠,适应性喂养1周后随机选cancer biology10只作为空白对照组(A组),另外40只大鼠进行链脲佐菌素(streptoEpigenetics抑制剂zotocin,STZ)诱导,腹腔注射STZ制备糖尿病动物模型。造模成功后将40只糖尿病大鼠随机分为2组(B组和C组),每组各20只;B组给予等量柠檬酸缓冲液皮下注射,C组每天根据血糖水平给予胰岛素1.5 U/kg皮下注射,连续注射4周。4周后收集24 h血、尿标本查尿素氮、肌酐、血糖,肾脏组织送病理PAS染色观察肾组织病理改变,透射电镜观察肾小球足细胞足突改变,Western blot检测自噬标志物LC3I/H表达。结果与A组相比,B、C组大鼠24 h尿白蛋白、血糖均升高明显(P<0.01),PAS染色发现肾小球基膜增厚,系膜区增宽,基质增多,电镜下足细胞足突增宽、融合,自噬活化标志物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值明显下降(P<0.01)。与B组比,C组大鼠肾小球病理变化有所改善,足细胞和自噬体数量增多,细胞器损伤减轻,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值上调(P<0.01)。结论糖尿病肾病大鼠肾小球自噬水平降低,胰岛素处理糖尿病肾病大鼠可上调自噬水平,并可减轻肾小球病理改变和足细胞损伤,提示自噬水平增强可能有益于延缓糖尿病肾病进展。

目的 探究急性心肌梗死(AMI)患者血清长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(lncRNA MALAT1)表达与心肌损伤、凝血功能的相关性。方法 将2020年1月—2021年1月广元市中心医院确诊的313例冠心病患者分为冠心病组(n=163)和AMI组(n=150)。收集患者一般资料；采用实时荧光定量PCR法测定血清lncRNA MALAT1水平；采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清心肌损伤指标肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)水平；采用全自动血凝仪检测凝血功能指标活化部分凝血酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)、血浆凝血酶时间(TT)水平；采用Pearson法分析血清lncRNA MALAT1水平与心肌损伤、凝血功能指标相关性；采用多因素Logistic回归分析影响冠心病患者发生AMI的影响因素。结果 与冠心病组患者比较，AMI组患者实验室指标Hs-CRP、高密度脂蛋白及血清lncRNA MALAT1水平均升高(P<0.05)，其余资料比较差异无统计学意义(P>0.PLX4032配制05)；血清lncRNA MALAT1水平高表达是冠心病患者发生AMI的独立危险因素(P<0.05)；与冠心病组比较，AMI组心肌损伤指标CK-MBGestational biology、H-FABP水平及凝血功能指标APTProtein Tyrosine Kinase抑制剂T、PT、TT水平均降低(P<0.05)；患者血清lncRNA MALAT1水平与心肌损伤指标CK-MB、H-FABP水平及凝血功能指标APTT、PT、TT水平均呈负相关(P<0.05)。结论 lncRNA MALAT1在急性心肌梗死患者血清中异常高表达，可能与患者心肌损伤及凝血功能异常有关。

随着分子生物学的发展,分子诊断已经成为生物学的基本技术之一,在传染病防控、恶性疾病的预防和诊断、物种鉴定等领域发挥的作用日益突出。分子诊断主要包括核酸提取、核酸扩增和核酸杂交reduce medicinal waste,其首要任务便是核酸提取。2020年突发新冠疫情大大刺激了分子诊断的发展和应用,迫切需要大通量、快速、高效的核酸提取技术。本文结合生物、机械、电子、计算机等多项技术https://www.selleck.cn/products/canagliflozin.html,为解决大通量待测样本快速处理和提取的需求,对全自动核酸提取系统所涉及的样本转移、核酸提取两方面功能进行了研究。在移液功能方面,基于直角坐标系搭建了运动平台,设计了能自由变换间距的取样机械臂、步进电机驱动的注射泵等功能机构,同时根据各个功能机构的需求,采用STM32为主控芯片设计了硬件电路,采用C/C++语言编写了基于STM32的嵌入式软件并设计了相应的人机交互界面,实现了样本在不同规格容器之间的快速转移。提取装置方面,利用磁珠法核酸提取原理,基于柱坐标系搭建了运动平台,设计了水平的旋转上料机构、垂直的提取机构以及位于下方的恒温裂解机构,同时根据功能需求设计了以STM32为主控芯片硬件电路,采用C/C++语言编写了基于STM32的嵌入式软件并设计了相应的人机交互界面,实现了96样本的快速提取。结合生物检测操作要求,对本研究搭建的核酸提取系统的原理样机进行性能测试和生物学测试。其中,长距离直线运动的重复定位精度为±0.11mm,圆周运动精度为±0.035°,移液误差低于5%,裂解机构表面温度最大差值为0.9℃。利用实验室保存的血样对核酸提取装置进行了核酸提取测试,并对提取结果进行荧光定量PCR检测,Cq值均在11-14之间,CV值为3.2%。测试结果表明系统各项性能指标符合设计和使用要求,且核酸提取测试中通过与人工以及市场上已有仪器的对比,表明提取质量与人工以及市场现有产品基本一致,且满足荧Enasidenib生产商光定量PCR的检测要求。本文通过全自动核酸提取系统包括的移液、提取两方面功能进行研究,实现了核酸提取流程的自动化操作,为分子诊断设备的一体化提供了理论和实践依据。

【目的】中波紫外（UVB）照射是导致皮肤光老化形成和色素沉着的主要环境原因之一。植物乳杆菌是一种广泛研究的益生菌菌种。本研究利用UVB照射皮肤细胞（正常人皮肤成纤维细胞（NHDF）和小鼠B16F10黑色素瘤细胞），探讨了热灭活植物乳杆菌ATCC 8014（LP）的抗光老化和抗黑色素生成作用。【方法】以暴露于UVB的正常人皮肤成纤维细胞（NHDF）和小鼠B16F10黑色素瘤细胞为研GSK J4研究购买究对象，用MTT法、TUNEL染色分析和DCFH-DA染色分析实验检测了两组细胞的细胞活力、DNA损伤及相对ROS水平；利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测了NHDF细胞中的I型胶原蛋白水平；通过NaOH裂解法和多巴氧化法对B16F10细胞黑色素生成和酪氨酸酶活性进行测定；通过qRT-PCR分析和Western blotting分析检测光老化和黑色素生成相关基因和蛋白表达水平变化。【结果】（1）LP抑制UVB诱导的NHDF和B16F10细胞毒性，这与减少ROS介导的细胞DNA损伤有关；（2）LP下调基质金属蛋白酶GW-572016纯度-1（MMP-1）、MMP-3和MMP-9（而不是MMP-2）mRNA水平[与抑制（ERK，p38）（而不是JNK）/c-Fos（而不是c-Jun）信号通路有关]，增加I型前胶原（COL1A1）蛋白水平，从而提高I型胶原蛋白含量；（3）LP作为自噬诱导剂（增加LC3-II和Beclin 1蛋白水平以及LC3-II/LC3-I比率）抑制酪氨酸酶、酪氨酸相关蛋白-1（TYRPnursing medical service-1）和TYRP-2活性和/或表达（与压制PKA/CREB/MITF信号通路有关），从而降低黑色素含量。【结论】LP在UVB暴露的皮肤细胞中具有潜在的抗光老化和抗黑色素生成作用。

目的：评价小剂量胰岛素联合电解质补充治疗儿童糖尿病酮症酸中毒的临床疗效。方法：收集2018-09～2020-12在阜阳市人民医院儿科住院治疗的Ⅰ型糖尿病酮症酸中毒患儿55例，按照简单随机抽样法分为观察组与对照组，观察组36例给予小剂量胰岛素0.05U·kg~(-1)·h~(-1)联合电解质补充治疗，对照组19例给予标准量胰岛素0.1U·kg~(-1)·h~(-1)及电解质补充联合治疗。比较两组临床症状纠正时间及电解质、二氧化碳结合力、血糖、血气、阴离子间隙及肾功能改善情况。结果：观察组临床症状纠正时间均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05),治疗前，观察组与对照组电解质、二氧化碳结合力、血糖、血气、阴离子间隙及肾功能指标差异无统计学意义(P>0.05),治疗后，观察组二氧化碳结合力(23.01±3.91)mmol/selleck产品L、血气pH值(7.42±0.06)高于对照组分别为(17.66±5.61)mmol/L、(7.34±0.07Quantitative Assays),观察组血糖(5.84±1.88)mmol/L、尿素氮(4.61±1.78)mmol/L、阴离子间隙(12.90±6.46)mmol/L,低于对照组的(7.46±2.76)mmol/L、(4.91±2.06)mmol/L、(17.02±6.84)mmol/L,差异有统计学意义(均P<0.05),电解质差异无统计学意义。结论：小剂量胰岛素联Transmembrane Transporters抑制剂合电解质补充治疗儿童糖尿病酮症酸中毒的疗效显著，能够尽快改善临床症状，纠正内环境紊乱，减少并发症的发生，低血糖发生率低。

首先利用间接免疫荧光方法、Wesselleck合成tern blot及Image J灰度值分析，研究猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)感染细胞后及通过紫外线灭活后的病毒对自噬相关蛋白LC3的蛋白表达及转化水平的影响；其次利用自噬促进剂雷帕霉素及BIBW2992供应商自噬抑制剂3-MA对PK-15细胞进行处理，通过qRT-PCR及病毒滴度测定研究细胞自噬在其病毒增殖过程中所产生的影响；最后通过qRT-PCR对自噬关键基因在病毒感染细胞时的动态变化及影响进行分析。结果显示，随着病毒感染时间的增加，细胞内的LC3-Ⅰ逐渐向LC3-Ⅱ转化，其LC3-Ⅱ/β-actin的比值明显增加；结合雷帕霉素作用后，细胞自噬极显著上调了TGEV mRNA转录水平及病毒滴度(P<0.01);与自噬抑制剂3-MA结合后，随病毒感染时间的不同，极显著下调了其病毒的mRNA转录量及病毒滴度(P<0.01)。而TGEV在感染细胞后极显著诱导了自噬关键基因(ATG-5及Beclin-1)mRNA转录水平的提升(P<0.01),并结合病毒增殖情况印证了细胞在受到TGEV感染后，其病毒增殖与自噬程度呈正向作用，说明病毒感染可诱导细胞自噬，促physiopathology [Subheading]进细胞自噬会增加分离株的病毒滴度。结果表明，TGEV感染PK-15细胞后可诱导细胞自噬，并确定了自噬在TGEV感染中的重要作用。

目的 探讨力生长因子（mechano-growth factor,MGF）对牙周膜干细胞增殖、分化的影响及其作用的分子机制。方法 采用免疫磁珠法分选人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs），流式细胞仪检测表面标志物，并观察分选细胞的克隆形成能力及多向分化能力；CCK8法检测不同浓度MGF功能肽段（MGDibutyryl-cAMP使用方法FCt24E肽）作用下PDLSCs的增殖活性；Western blot检测MGF-Ct24E肽作用下PDLSCs中的增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、碱性螺旋环螺旋转录因子Scleraxis、Ⅰ型胶原ɑ1(collagen type Ⅰ alpha 1,COL1A1)、成骨细胞特异性转录因子Osterix、Yes相关蛋白DNA Sequencing（Yes-associated protein,YAP）、磷酸化YAP(phosphorylation yes-associated protein,P-YAP)蛋白表达量；免疫荧光观察YAP的表达情况；siRNA干扰YAP表达后，观察PDLSCs中MGF-Ct24E作用下PCNA、Scleraxis和COL1A1的表达。结果 免疫磁珠分选的PDLSCs高表达干细胞表面标志物CD29、CD90、CD105，低表达造血细胞表面标志物CD34、CD45；细胞具有较强的克隆形成能力，成骨诱导茜素红染色后可见红色钙结节，成脂诱导油红O染色后可见红色脂滴；50 ng/mL和100 ng/mL MGF-Ct24E肽作用24 h后，PDLSCs的增殖活性增强（P<0.05）；细胞中PCNA、Scleraxis和COL1A1蛋白表达上调，而Osterix蛋白表达量下调（P<0.05）;50 ng/mL MG点击此处F-Ct24E肽作用24 h后，YAP蛋白357位点磷酸化水平增强（P<0.05），免疫荧光染色观察发现，YAP蛋白在胞核聚集；MGF-Ct24E肽作用下，siRNA抑制YAP表达后，细胞中PCNA、Scleraxis蛋白表达量下调（P<0.05）。结论 MGF通过激活YAP促进PDLSCs增殖及成纤维分化。

目的 探讨PI3K抑制剂联合溶瘤病毒是否对骨肉瘤具有溶瘤作用。方法 通过MTT法检测细胞活性，寻找可以增强水泡性口炎病毒Δ51(VSVΔ51)抗肿瘤活性的抑制剂；通过电子显微镜观察内质网肿胀以及Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达情况，探讨其增强溶瘤活性的机制；通过裸鼠移植瘤模型抑瘤实验验证PI3K抑制剂ZSTK474联合溶瘤病毒VSVΔ51疗法的肿瘤清除能力，并通过免疫组织化学实验验证肿瘤细胞凋亡情况。结果 PI3K抑制剂可以作为溶瘤病毒VNoninfectious uveitisSVΔ51的增效剂，其通过加强肿瘤细胞内质网应激促进骨肉瘤细胞凋亡(P<确认细节0.01)。体内实验也表明，PI3K抑制剂联合溶瘤病毒VSVΔ51可以显著增加对骨肉瘤的溶瘤效果(P<0.001),而且这种联合疗法增强了肿瘤中免HDAC抑制剂疫细胞的浸润(P<0.001)。结论 PI3K抑制剂联合溶瘤病毒是一种潜在的骨肉瘤治疗方法。

目的 探讨辛温通阳中药葱白提取物对高脂血症大鼠腺苷5′-单磷酸激活的蛋白激酶/雷帕霉素的哺乳动物靶标(Adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase/mammalian target of rapamycin,AMPK/mTOR)信号通路表达的影响。方法 将30只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、葱白低剂量组、葱白中剂量组、葱白高剂量组与辛伐他丁组，除对照组外，其他组均通过脂肪乳灌胃法构建高脂血症模型。对照组与高脂血症模型组每天灌喂生理盐水，葱白低、中、高剂量组分别按照25 mg·kg~(-1)、50 mg·kg~(-1)、70 mg·kg~(-1)灌喂葱白提取物，辛伐他丁组灌喂100 mg·kg~(-1)辛伐他丁；造模成功后生化检测血清中甘油三酯(Triglyceride,TG)、胆固醇(Total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(High-density lipoprotein,HDL-C)；采用生化方法检测肝脏组织中TC、TG超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase,SDH)、及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量；采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosinstaining,HE)与油红O染色法对肝组织进行病理切片观察；Western blot法检测肝脏组织中AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果 连续给药4周后，与模型组相比，葱白低、中、高剂量组与辛伐他丁组均能降低TC、TG、LDL-C,MDA水平，升高HDL-C,SDH,SOD水平，其中，葱白高剂量组的TC、TG、LDL-C、MDA水平显著降低，而HDL-C、SDH、SOD水平则显著上升(P<0.05)www.selleck.cn/products/Lapatinib-Ditosylate。HE染色与油红“O”染色结果显示，模型组大鼠肝脏细胞脂质严重蓄积，高度脂肪变性，葱白高剂量组在不同程度上改善脂肪蓄积及变periprosthetic joint infection性情况。Western blot结果显示，与模型组相比，葱白低、中、高剂量组与辛伐他丁组均能降低mTOR蛋白磷酸化水平，升高AMPK蛋白与ACC蛋白磷酸化水平。结论 中药葱白提取物对高脂血IACS-10759分子式症大鼠有明显的降血脂作用，能通过影响AMPK/mTOR通路来促进脂质代谢。