ALK抑制剂

寻找具有显著生物活性的新化学实体是现代药物研发的主要目标。高盐高渗、低温、低氧、低光照、寡营养的海洋环境造就了海洋微生物的生物多样性和特殊性,其结构新颖复杂、作用独特的次生代谢产物具有极大的药用价值。海洋微生物种类繁多、数量庞大,还具有生长繁殖快、代谢易于调控的优势,可大规模培养实现工业化生产。随着海洋微生物培养和提取新技术的发展,人们对海洋微生物天然产物的兴趣与日俱增,从海洋微生物次生代谢产物中挖掘新药或先导化合物成为现代医药领域一个前景广阔的策略和发展趋势。海洋共附生微生物是海洋微生物的重要类群,具有产生新生物活性物质的巨大潜力。Talaromyces sp.ML-3是从青岛海域的牡蛎中分离得到的一株共生真菌,本学位论文对其发酵产物的化学成分进行了研究。首先采用大米、SWS、GPY、PDB、真菌1号这5种培养基分别对菌株ML-3进行小量发酵,筛选确定较优的培养基;对菌株ML-3进行大量发酵,发酵液经乙酸乙酯提取、减压去除溶剂得到粗浸膏。发酵液粗浸膏经硅胶柱初步分离,得到各极性组分;再以1H-NMR谱和TLC示踪,综合采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、高效液相色谱等方法进行化合物的追踪分离纯化,并采用HR-ESI-MS、1D和2D NMR谱等现代波谱技术及文献比对的方法鉴定化合物的结构。1H-NMR谱和TLC显示,真菌1号培养基发酵有利于菌株ML-3产生较为丰富的次生代谢产物;采用真菌1号培养基对ML-3进行大量发酵,发酵液经乙酸乙酯提取、减压去除溶剂得到发酵液粗浸膏约44 g,经分离纯化最终从ML-3发酵液粗浸膏中得到6个化合物,它们分别被鉴定为emodin(1)、3-indolethanol(2)、ω-hydroxy-emodin(3)、(22E,24R)-8,14-epoxyergosta-4,22-diene-3,6-dione(4)和4-hydroxy-4-(4-methyl-5-oxocyclohex-3-en-1-yl)pentanoic acid(5)。其中,化合物1和3是蒽醌类化合物,化合物2是吲哚类生物碱,化合物4是麦角甾醇类化合物,化合物5是未见文献报道的新倍半萜烯类化合物,化合物6的结构有待进一步确定。微生物在常规培养条件下存在许多未被表达的生物合成基因簇,而改变发酵培养基是激活沉默基因最简单有效的方法。为更好地挖掘Talaromyces sp.ML-3VE-822采购产生新和/或活性次生代谢产物的潜力,本学位论文利用基于LC-MS/MS的GNPS分子网络技术构建菌株ML-3的5种培养基小量发酵产物和真菌1号培养基大量发酵液的常规分子网络和特征峰分子网络,进一步分析ML-3发酵产物的化学成分。结果显示,真菌1号培养基小量发酵产物的节点分布广泛、且节点数最多,说明真菌1号培养基确实有利于菌株ML-3产生较为丰富的次生代谢产物,这与前期1H-NMR谱结果一致;一些节点簇为某种培养基所特有,表明培养基的变化确实对菌株ML-3次生代谢产物的类型产生较大影响;利用“种子”节点及GNPS平台的搜库功能,从菌株发酵产物中共识别出10类66个化学成分Fungal bioaerosols,包括:蒽醌类、脂肪酸类、生物碱类、黄酮类、多元醇类、聚酮类、萜类、环肽、甾体、苯甲酸衍生物。该研究结果为发现菌株的较优培养基、并揭示其次生代谢产物谱奠定了良好基础。从菌株ML-3的真菌1号培养基大量发酵液中识别出9个蒽醌类化合物(含3个二蒽醌,6个单蒽核蒽醌),3个麦角甾醇类化合物以及其它多种结构类型的化合物,该结果为后续的导向分离提供了理论依据。Talaromyces sp.ML-3能产生多种结构类型的次生代谢产物,其中的蒽醌和二蒽醌类化合物、环肽化合物、甾体类化合物等都是极具潜力的药物先导化Baricitinib价格合物。由于GNPS光谱库数据有限及“种子”化合物较少,目前从ML-3发酵产物中只识别出少量的化合物,后续将以已识别出的化合物以及文献报道的Talaromyces属真菌的次生代谢产物作“种子”继续进行化学成分的识别,以期更全面地揭示菌株ML-3的次生代谢产物谱。GNPS分子网络不仅可以比较微生物不同发酵条件下次生代谢产物的差异,筛选发现最优发酵条件;还可以实现天然产物分离的去重复化,后续将基于ML-3的真菌1号培养基大量发酵液粗浸膏的GNPS分子网络分析结果,进行目标化合物的定向分离。

目的 探讨中青年PCI-32765溶解度乳腺癌患者根治术后病耻感的影响因素。方法 选择2017年8月～2019年8月100例中青年乳腺癌患者为研究对象，采用《LINK病耻感系列量表S63845小鼠》调查病耻感，收集手术方式、应对方式、婚姻状况等病历资料，通过单因素分析以及多元逐步回归分析调查中青年乳腺癌根治术后病耻感的相关因素。结果 100例患者共回收有效问卷92份，问卷有效率92.00%，病耻感总得分为118.92±10.76分；不同婚姻状况、是否乳房重建、居住地、受教育程度、应对方式患者病耻感评分具有统计学差异（P<0.05），有无子女、主要照顾者无统计学差异（P>0.05），家庭月收入、社会支持评分与病耻感评分呈负相关，年龄与病耻感评分呈正相关（P<0.05）；多元逐步回归分析显示，是否乳房重建、婚姻状况、居住地、受教育程度、应对方式、家庭月收入、社会支持评分（SSRS）是中青年乳腺癌根治术后病耻感的影响因素。结论 中青年乳Modern biotechnology腺癌根治术后具有中度病耻感，受到是否乳房重建、婚姻状况、居住地等因素的影响。

目的观察益肝明目汤对糖尿病视网膜水肿模型大鼠NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 (NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1 (cysteine aspartate-specific proteinase-1,Caspase-1)信号通路的影响,从细胞焦亡的角度探讨其治疗糖尿病视网膜水肿的作用机制。方法将36只SD大鼠随机分为空白组(6只)和造模组(30只)。采用Tetracycline antibiotics一次性腹腔注射40 mg/kg链脲佐菌素(GW4869streptozocin,STZ)溶液联合高糖高脂饲料喂养建立糖尿病视网膜水肿大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组,安多明组,低、中、高剂量组,每组6只,分别予以蒸馏水、羟苯磺酸钙胶囊(0.09 g/kg)、益肝明目汤(2.8、5.6、11.2 g/kg)进行灌胃,每日2次,连续4周。观察大鼠一般生物学特征,监测不同时期血糖、体质量变化;采用眼底荧光血管造影(fundus fluorescence angiography,FFA)和光学相关断层扫描技术(optical correlation tomography,OCT)观测各阶段视网膜血管渗漏及视网膜厚度的变化;HE染色检测视网膜组织病理变化;免疫组化法检测视网膜组织NLRP3与衔接蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)表达水平;Western blot检测视网膜组织Caspase-1与NLRP3表达水平;ELISA检测血清炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)含量。结果与空白组比较,模型组大鼠一般生物学特征出现较明显的改变;血糖显著升高(P<0.01);体质量显著降低(P<0.01);视网膜厚度增加(P<0.01);FFA可见视网膜血管走行迂曲,散在微血管瘤及少许点状强荧光;病理形态见各层细胞排列紊乱、稀疏,内丛状层、内外核层松散,结构紊乱,视网Navitoclax细胞培养膜厚度增加;视网膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达及炎症因子IL-1β、IL-18含量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,中剂量组、高剂量组大鼠血糖均降低(P<0.05);安多明组、低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠体质量均升高(P<0.01);各给药组大鼠视网膜厚度呈不同程度减少(P<0.01);FFA见微血管瘤及点状强荧光减少;病理形态见视网膜各层结构基本完整,排列规整,厚度减少;视网膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达及炎症因子IL-1β、IL-18含量显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论以疏肝健脾、活血利水为治法的益肝明目汤可能通过干预NLRP3/Caspase-1介导的细胞焦亡,进而减轻炎症因子的释放,减轻视网膜水肿,从而改善视网膜功能。

目的 探讨基于GRACE评分的分层护理路径在冠心病经皮冠状动脉介入术(PCI)患者中的应用效果。方法 选取2019年1月—BMS-907351临床试验2020年12月本院收治的90例冠心病患者为研究对象，根据患者的入院时间，将患者分forensic medical examination为对照组(2019年1月—2019年12月，n=45)及观察组(2020年1月—2020年12月，n=45),对照组采用心外科常规护理，观察组采用基于GRACE评分的分层护理路径干预，比较两组患者术后康复情况。结果 干预后，观察组的6 min步行试验(6MWT)、左心室射血分数(LVEF)、正常R-R间期标准差(SDNN)、24 h全程5 min段R-R间期平均值的标准差(SDANN)优于对照组，观察组的CCU入住时间、住院总时间短于对照组，而观察组的不良心血管事件(MACE)发生率、心绞痛发作频次低于对照组，满意度评分高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 基于GRACE评S63845溶解度分的分层护理路径能有效促进冠心病PCI患者术后的心功能恢复，改善患者的预后，提高患者的满意度。

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)抑制剂Glycyrrhiz购买MG132in(Gly)对白蛋白结合型紫杉醇导致的神经病理性疼痛的抑制作用及其机制。方法 雄性SD大鼠共54只，分为对照组、紫杉醇组、紫杉醇+Gly组，每组18只。紫杉醇组大鼠实验第1,3,5,7天腹腔注射白蛋白结合型紫杉醇(2.47 mg/kg)建立神经病理性疼痛模型，紫杉醇+Gly组在注射白蛋白结合型紫杉醇(2.47 mg/kg)后，第1～7天每日腹腔注射Glycyrrhizin(50 mg/kg),两种药物间隔30 min。对照Supplies & Consumables组给予等剂量生理盐水。实验第4,8天检测大鼠的机械刺激缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL)。所有大鼠实验第8天处死，取L_(4-6)脊髓，免疫组化染色检测HMGB1、细胞骨架蛋白[神经微丝蛋白轻链(NF-L)、神经微丝蛋白中链(NF-M)]、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及离子钙接头蛋白抗体(Iba-1)的表达变化，WeAZD6738小鼠stern blot检测Toll样受体4(TLR4)及核因子κB(NF-κB)的表达变化，ELISA检测TNF-α、IL-1β和IL-6的水平。结果 与对照组相比，紫杉醇组MWT、TWL均降低，提示神经病理性疼痛模型构建成功；与紫杉醇组相比，紫杉醇+Gly组MWT、TWL均升高(P<0.05)。紫杉醇组大鼠L_(4-6)脊髓组织中HMGB1、NF-L、NF-M、GFAP、Iba-1、TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平均高于对照组(均P<0.05),而紫杉醇+Gly组以上指标的表达均低于紫杉醇组(均P<0.05)。结论 HMGB1抑制剂Glycyrrhizin可通过抑制TLR4/NF-κB通路，减少炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6的释放，减轻细胞骨架结构紊乱，进而缓解白蛋白结合型紫杉醇导致的神经病理性疼痛。

微小隐孢子虫是一种人兽共患的顶复门寄生虫,其具有结构特殊的分Berzosertib说明书泌型细胞器(例如:微线体、棒状体和致密颗粒),这些细胞器在虫体入侵过程中将其内容物释放,其中微线体在顶复门寄生虫入侵宿主细胞过程中发挥重要的功能。GP900蛋白作为一个具有单个跨膜结构域的粘蛋白样糖蛋白,前期被文献报道为微线体蛋白,且在分泌的过程中由微线体转移到子孢子表面并释放形成滑行轨迹。但是,目前有关该蛋白转移到子孢子表面和释放的生物学过程仍不清楚。本研究的主要目的是确定GP900蛋白是否作为跨膜蛋白锚定在子孢子表面的质膜上,或其是否在子孢子释放到表膜之前就已被切割。本研究制备了两种抗GP900蛋白的抗体,一种是针对跨膜区N端的小鼠单克隆抗体(GP900-N),一种是针对跨膜区C端的兔多克隆抗体(GP900-C),用于区分完整的蛋白和切割后的蛋白。通过间接免疫荧光和免疫电镜方法验证GP900蛋白在子孢子和不同胞内发育阶段的定位情况及GP900蛋白的分泌切割情况,并通过酶联免疫吸附实验检测GP900蛋白的分泌情况。微小隐孢子虫GP900蛋白的亚细胞定位通过间接免疫荧光和免疫电镜发现:两种抗GP900蛋白的抗体均能标记未脱囊和脱囊后的子孢子的顶端区域,但在脱囊和入侵进入分泌途径中,只有抗GP900-N(不是抗GP900-C)能标记脱囊子孢子的表膜和滑行子孢子的滑行轨迹,且两种抗GP900蛋白的抗体都能标记细胞内无性生殖阶段的成熟和未成熟的裂殖子,但不能标记配母细胞和配子细胞。同时,只有抗GP900-N(不是抗GP900-C)能够识别子孢子和细胞内寄生虫分泌到培养基中的GP900蛋白。综上所述,GP900蛋白存在于子孢子和细胞内裂BAY 73-4506价格殖体的微线体上,但不存在于有性阶段。在从子孢子微线体上分泌出来的过程中,该蛋白被切割释放其胞内部分,在其转移到细胞biomarkers definition外之前切割已完成。基于GP900蛋白的分子特征,包括具有简单的N和C连接的糖基化和缺乏必需黏附结构域,以及GP900蛋白作为未锚定到寄生虫质膜的切割蛋白分泌的事实,推测GP900蛋白在子孢子滑行、入侵和细胞内发育过程中可能起润滑作用。

为了确定近年来国内主要流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like谱系与猪2型圆环病毒(PCV2d亚型)共感染与继发感染后对猪的致病作用，使用本实验室分离的NADC30-like谱系PRRSV与PCV2d毒株感染PCV2抗体阳性断奶仔猪。选取3Scabiosa comosa Fisch ex Roem et Schult0只5周龄PCV2抗体阳性断奶仔猪，随机均分为6组，分别为PBS、PCV2、PRRSV、PCV2-PRRSV、PRRSV-PCV2和Co-PRRSV-PCV2感染组。记录各组临床指征(体温、体质量、临床症状和存活率);检测特异性抗体及TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10共4种细胞因子的变化；并Cobimetinib对主要组织脏器的病理变化进行分析。结果显示，各感染组在感染PRRSV后均出现体温升高Torin 1配制、体质量减轻、咳喘、腹泻、精神沉郁等临床症状；Co-PRRSV-PCV2、PRRSV-PCV2和PRRSV组表现出更为严重的肉样变和淋巴细胞浸润；先感染PCV2可以延迟PRRSV特异性抗体的产生；PRRSV组表现出高水平的TNF-α和IL-10;NADC30-like PRRSV与PCV2d共感染与继发感染PCV2抗体阳性仔猪会出现严重的临床症状和病理变化，PRRSV单感染同样表现出严重的临床症状但病理变化相对较轻。

目的 系统总结不同驱动基因阳性非小细胞肺癌的免疫治疗现状，并阐述其与程序性细胞死亡配体1(PD-L1)表达水平的相关性。方法 应用PubMed及中国知网数据库检索系统，以“非小细胞肺癌、免疫治疗、驱动基因、PD-L1”为中文关键词，“Non-small cell lung cancer、immunity therapy、driven gene、PD-L1”为英文关键词，系统检索2010-01conservation biocontrol-01-2020-12-31相关文献。纳入标准：(1)非小细胞肺癌免疫治疗相关研究；(2)驱动基因阳性非小细胞肺癌相关研究。排除标准：数据陈旧的相关研究。最终纳入52篇文献进行分析。结果KPT-330体内实验剂量 免疫治疗对驱动基因阴性晚期非小细胞肺癌患者具有显著疗效，但其对驱动基因阳性患者的疗效仍有争议，在表皮生长因子受体(EGFR)阳性/间变性淋巴瘤激酶(PidnarulexALK)阳性患者中，众多研究显示出联合治疗的获益可能，在Kirsten大鼠肉瘤原癌基因(KRAS)、BRAF突变患者中，免疫治疗也有一定疗效，而在其余罕见突变患者中，免疫治疗疗效往往不佳。这种疗效差异可能与不同的驱动基因类型、PD-L1表达水平等有关。结论 携带基因突变的非小细胞肺癌患者免疫治疗疗效有限，未来需要进一步探索针对这些基因突变患者更为有效的治疗策略。

目的 探讨黄芪多糖在体内外通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对糖皮质激素诱导的骨质疏松症(glucocorticoid-induced JNJ-42756493抑制剂osteoporosis, GIOP)的保护作用。方法 从分化的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BM-MSCs)中培养成骨细胞，分为PBS组、模型组、LY294002组、黄芪多糖组和LY294002+黄芪多糖干预组。通过CCK-8法和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色检测细胞增殖和分化。MDC染BIBW2992化学结构色观察自噬体的形成。Western blot检测Beclin-1、p62等信号通路及自噬相关因子biomedical optics的蛋白表达。大鼠分为对照组、模型组、LY294002组、黄芪多糖组和LY294002+黄芪多糖组。比较各组大鼠的骨密度、骨组织形态学参数、组织中通路和自噬相关因子的表达。结果 黄芪多糖促进成骨细胞的增殖和分化能力(P<0.05)。与模型组相比，黄芪多糖组PI3K/AKT/mTOR通路相关磷酸化蛋白的表达、成骨细胞的增殖分化能力、自噬体及自噬相关因子的表达均升高，但在LY294002组中发现了相反的结果(P<0.05)。在体内实验中，与模型组相比，GIOP大鼠通过黄芪多糖干预改善了骨密度和骨形态参数，并提高了软骨组织中自噬相关因子的表达，而LY294002干预则表现出相反的结果(P<0.05)。LY294002部分逆转了黄芪多糖对GIOP中成骨分化和骨形态参数的影响。结论 黄芪多糖通过PI3K/AKT/mTOR通路对GIOP发挥保护作用，可能与诱导自噬和促进成骨细胞增殖有关。

目的 探讨养阴清肺汤加味（Yangyin Qingfei decoction plus，YQDP）对肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，MP）感染小鼠炎症反small- and medium-sized enterprises应及Toll样受体2（Toll-like receptor 2， TLR-2）/髓样分化因子88（Myeloid differentiation factor 88，MyD88）/核转录因子-κB（Nuclear factor-κB，NF-κB）信LY2835219号通路的影响。方法 选取BALB/c小鼠60只，随机分为正常组、模型组、阿奇霉素组、YQDP低、中、高剂量组，每组10只，除正常组外均建立MP感染小鼠模型，模型建立成功后开始给药治疗并于第7天取材。采用HE染色法观察小鼠的肺部病理改变情况，ELISA法检测血清中白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、IL-8（Interleukin-8）、IL-17（Interleukin-17）水平，RT-PCR法、Western blot法检测TLR-2、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠大部分肺泡结构破坏严重，完整肺泡较少，肺泡间隔明显增厚并可见大量炎性细胞，血清中IL-6、IL-8、IL-17含量明显升高Canagliflozin（P＜0.05），肺组织中TLR-2、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达量升高（P＜0.05）。与模型组比较，给予阿奇霉素、YQDP治疗后，小鼠肺组织病理显示肺泡结构有明显恢复，肺泡周围存在的炎性细胞浸润均有不同程度减少，血清中IL-6、IL-8、IL-17含量明显降低（P＜0.05），肺组织中TLR-2、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达量降低（P＜0.05），并且YQDP治疗组的降低趋势与其低、中、高剂量呈现依赖性。结论 YQDP可能通过调控TLR-2/MyD88/NF-κB信号通路，起到减轻MP感染小鼠肺部炎症作用。