ALK抑制剂

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)是牛病毒性腹泻病(Bovine viral diarrhea,BVD)的病原体,属于黄病毒科的瘟病毒属。BVDV不仅感染牛、羊、猪,还感染鹿、骆驼等动物。真核细胞mRNA中,5’端非编码区(5’untranslated region,5’UTR)可与RNA结合蛋白(RNA binding protein,RBP)一起调控mRNA的翻译;BVDV基因组中的5’UTR在病毒的转录、翻译过程中具有重要作用。但目前有关BVDV 5’UTR的研究较少,哪些蛋白可以和BVDV 5’UTR发生相互作用并且如何影响BVDV复制过程?尚不清楚,亟待研究阐明。本研究利用RNA-蛋白质相互作用检测(RNA-protein interaction detection,Ra PID)技术,筛选与BVDV 5’UTR互作的蛋白;si RNA敲低互作蛋白,探究互作蛋白对BVDV复制的影响,为进一步阐明BVDV感染的分子机制提供依据。1.BVDV 5’UTR基因的扩增以及真核表达载体的构建根据Gen Bank数据库中BVDV基因组序列,设计BVDV 5’UTR基因的扩增引物,PCR扩增BVDV 5’UTR基因。将扩增的BVDV 5’UTR基因克隆至RNA motif载体中,菌液PCR鉴定后进行测序分析。试验结果表明:成功扩增出BVDV 5’UTR基因,并将其插入到酶切后RNA motif载体中,成功构建RNA motif-BVDV 5’UTR真核表达载体,为进一步探究BVDV 5’UTR的功能奠定基础。2.Ra PID技术筛选与BVDV 5’UTR互作的蛋白将构建的RNA motif-BVDV 5’UTR的质粒和BASU质粒转染至HEK-293T细胞中包装慢病毒,收集慢病毒感染MDBK细胞后用嘌呤霉素和潮霉素B筛选阳性细胞;利用RT-PCR检测BVDV5’UTR在细胞系中是否稳定表达;用不同浓度的Biotin、不同时间处理上述细胞系,Western blot确定Biotin处理的最适浓度和时间;扩大培养RNA motif-BASU和RNA motif-BVDV 5’UTR-BASU细胞系并用已确定最佳浓度的Biotin处理,提取蛋白用DynabMLN4924体外eads?My One?Streptavidin T1磁珠亲和层析后进行蛋白质谱分析。试验结果表明:成功构建RNA motif-BASU和RNA motif-BVDV 5’UTR-BASU稳定表达细胞系;200μΜBiotin处理细胞18 h时效果最佳;将对照组RNA motif-BASU与实验组RNA motif-BVDV5’UTR-BASU的蛋白质谱结果进行对比分析,最后筛选出11种差异蛋白。3.BVDV 5’UTR互作蛋白的功能研究对筛选的差异蛋白medicinal plant进行生物信息学分析以及查阅相关研究文献,最终筛选出2个候选因子TRAF2和SNED1进行后续功能研究。设计si RNA敲低MDBK细胞中TRAF2和SNED1基因表达,RT-q PCR检测TRAF2和SNED1基因表达的情况;BVDV感染TRAF2和SNED1敲低细胞系不同时间后,RT-q PCR检测BVDV 5’UTR mRNA的水平;免疫荧光检测BVDV双链RNA(Double-stranded,ds RNA)的积累,在倒置显ZD1839半抑制浓度微镜观察BVDV致细胞病变(Cytopathic effect,CPE)情况,根据Kaber方法测定病毒滴度变化情况。试验结果表明:BVDV感染TRAF2和SNED1敲低细胞系后,显著性降低BVDV 5’UTR mRNA水平,细胞中绿色荧光标记的BVDV ds RNA积累减少,同时CPE现象减弱,子代病毒滴度降低。本研究成功构建出RNA motif-BVDV 5’UTR真核表达载体,利用Ra PID技术筛选获得与BVDV 5’UTR互作的蛋白,si RNA敲低TRAF2和SNED1基因显著性阻止BVDV复制,为探究BVDV感染机制提供理论依据。

目的 探讨乳腺癌新辅助化疗(NAC)对前哨淋巴结（SLN）与非前此网站哨淋巴结（NSLN）的影响及前哨淋巴结活检（SLNB）的可行性。方法 对2019年1月-2021年12月在天水市第一人民医院治疗的155例原发性乳腺癌患者进行6周期NAC，选取NAC后临床检查腋窝淋巴结无肿大的患者25例，行腋窝SLNB后再行改良根治术，分析原发肿瘤、腋窝淋巴结变化、雌激素受体（ER）、细胞增殖相关抗原（Ki-67）表达及淋巴结转移情况。结果 25例患者中SLN转移9例，原发肿瘤缩小率、MP分级、Ki-67表达情况均与SLN转移相关（P<0.05）;SLN转移和ER表达情况不相关（P=0.229）。NSLN转移与化疗及肿瘤分子特征不相关。结论 临床评价腋窝淋巴结阴性（cN0）患greenhouse bio-test者NAC后行SLNB安全，cN1患者NAC后行SLNB需谨慎，NAC对淋巴结跳跃式转移作用有限，对于ER和Ki-67同时高表达、化疗疗效确认细节差的患者全腋窝清扫是最佳方法。

研究背景及目的我国是出生缺陷高发国家之一,染色体异常是出生缺陷最主要的遗传学因素,包括染色体数目和结构异常,最常见的是染色体非整倍体和致病性的拷贝数变异(Copy number variation,CNV)。产前诊断是染色体异常最有效的预防手段。基于高通量测序(next-generation sequencing,NGS)技术的染色体非整倍体无创产前检测(Noninvasive prenatal testing,NIPT)已在临床常规应用,但目前NIPT仅应用于21、18、13三体综合征的产前诊断,仍未达到对致病性CNV检测的性能要求。母体外周血中胎儿游离DNA(cell-free fetal DNA,cffDNA)比例不足是造成NIPT假阳性的主要影响因素和无创检测胎儿CNV的主要限制因素。因此,对现有NIPT流程进行优化,通过富集cffDNA片段和对胎儿浓度准确定量可一定程度上降低NIPT假阳性,而且在cffDNA富集的基础上开发无创检测胎儿CNV的方法,可以拓展NIPT的临床应用范围。方法1.基于孕妇外周血中cffDNA长度较短的特征,富集cffDNA,使用94例孕有男胎样本进行基于胎儿DNA浓度定量方法FFy的性能验证和更大样本量的基于定量方法FFy和SeqFF进行富集效果的验证。2.选择NIPT结果为三体阳性并有穿刺检测结果的的303例临床样本测序数据进行回顾性分析,建立区分NIPT三体真阳性和假阳性的方法。3.在cffDNA富集和现有NIPT的基础上,建立无创检测CNV的方法,分别使用人工模拟胎儿CNV样本和穿刺后经CGH确诊的40例孕low-density bioinks妇血浆样本进行性能验证。结果1.建立了基于凝胶电泳回收富集cffDNA片段方法,该方法能平均增加2.3倍的胎儿浓度,平均为26.5%,而且在94例男胎样本的验证中,成功将1例假阴性样本检测为阳性。2.基于胎儿浓度定量方法建立了胎儿染色体倍性异常拟合比例模型,利用303C59价格例(200例真阳性和103例假阳性)原NIPT判定三体的数据,得到了区分真阳性和假阳性的阈值函数,在经过此阈值函数进行判定后,303例样本中21、18和13三体的假阳性率分别降低82.6%、80.0%和86.7%。3.在cffDNA富集和现有NIPT的基础上,基于500例男胎和500例女胎的测序数据建立参考数据集,建立基于母体血浆游离DNA高通量测序对胎儿CNV的无创检测方法及CNV分析流程。在人工模拟样本的验证中显示,20%的胎儿浓度可以检出3～5 Mb CNV;在40例临床样本的验证中,对大于5Mb的CNV,灵敏度为87.5%,阳性预测值为87.5%;对1-5Mb的CNV,灵敏度为93.8%,Dinaciclib阳性预测值为93.8%;对小于1Mb的CNV,灵敏度为56.3%,阳性预测值为75%。结论在现有NIPT技术流程的基础上,建立了 cffDNA富集方法,基于胎儿浓度定量开发出倍性异常比例函数降低了 NIPT检测结果的假阳性,同时在拓展了适用于临床的无创CNV检测。

肝癌是临床常见的高致死率恶性肿瘤，目前虽在肝癌的porous medium诊断和治疗上取得了较大进展，但仍存在患者预后不佳等问题。近年来研究表明，中药活性成分在肝癌的治疗中发MDV3100纯度挥积极作用，其机制可能与中药活性成分靶向调节细胞自噬有关。自噬作为细胞分解代谢途径之一，通过溶酶体降解细胞内潜在的有害物质，发挥保护细胞内环境稳更多态作用，是防治肝癌研究领域的热点问题。大量研究表明，中药活性成分可通过靶向细胞自噬途径诱导肝癌细胞凋亡、抑制肝癌细胞侵袭与转移、降低肝癌细胞耐药性。中药活性成分来源广泛，积极探寻在肝癌进展过程中具有调控细胞自噬作用的中药活性成分，对肝癌预防和治疗具有一定的应用前景及重要的科学意义。本文对近年来国内外研究现状进行分析，综述了中药活性成分调控自噬防治肝癌的临床前研究进展，以期为开发潜在的抗肝癌创新中药提供参考。

目的：乳腺癌是女性高发的恶性肿瘤之一。枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide,LBP）作为我国传统名贵中药材枸杞子的主要活性成分，因其高活性和低毒性逐渐Naporafenib抑制剂成为抗癌药物的新选择。已有研究表明LBP对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用，但机制尚不明确。铁死亡是一种新的细胞死亡方式，主要依赖铁的脂质过氧化，引发细Staurosporine纯度胞死亡，而LBP与铁死亡的关系尚未见明确报道。因此，本研究旨在探索LBP是否通过诱导铁死亡发挥抗癌作用。创新点：我们首次发现LBP通过蛋白溶质载体家族7成员11和谷胱甘肽过氧化酶4(x CT/GPX4)途径介导乳腺癌细胞铁死亡，这对深入理解LBP治疗乳腺癌的中药药理机制具有重要意义，也为乳腺癌的中药抗癌研究提供了新思路。方法：通过细胞活性检测，确定LBP可抑制人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的存活与增殖。为了探索其作用机制，本研究利用转录组测序（RNA-seq）检测LBP处理前后对MCF-7细胞的影响，结果发现LBP处理后，差异基因富集到铁死亡信号通路。后续通过对LBP处理后铁死亡标志物（线粒体形态、线粒体膜电位和脂质过氧化水平等）的检测进一步验证转录组结果。通过加入铁死亡抑制剂Fer-1，研究LBP对两种乳腺癌的细胞存活率、氧化应激水平和胞内自由二价铁的影响，探究LBP是否通过诱导铁死亡介导抗癌作用，最后，通过检测两种乳腺癌细胞中铁死亡调控蛋白x CT/GPX4的表达水平明确具体其作用机制。结论：LBP通过x CT/GPX4信号通路诱导铁死亡，并降低乳腺癌细胞的存活与增殖。研究结果揭hereditary hemochromatosis示LBP通过铁死亡途径展现出新的抗癌特性，可能成为乳腺癌的潜在治疗选择。

对广州管圆线虫的病原生物学、流行病学、发病机理、免疫机制及诊断技术的研究进展进行了概述。广州管圆线虫（Angiostrongylus cantonensis, A. cantonensis）是一种食源性人兽共患寄生虫，在热带及亚热带地区的许多国家引起重大的公共卫生问题。人作为其非适宜宿主，通过摄入感染性幼虫污染的食物而发生感染，引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎（eosinophilic meningitis, EM）。广州管圆线虫病的范围正在不断扩大，以前认为无A. cantonensis的地区也出现了感染病例。我国广州管圆线虫病流行情况显示我国广州管圆线虫病相对罕见，但2022年最新流行病学数据显示广州管圆线虫中间宿主的感染率相对较高。通常根据食用软体动物Captisol采购史、临床特征及实验室检selleck HPLC查做出transpedicular core needle biopsy推定诊断。目前已开发出多种针对广州管圆线虫病的血清学检测方法，但许多诊断方法的灵敏度及特异性仍有待提高。增加对广州管圆线虫病的认识将有助于快速诊断并改善临床结果。

目的 探究薯蓣丸联LY294002合紫杉醇抗三阴性乳腺癌侵袭转移的作用机制。方法 分别制备大鼠空白血清和薯蓣丸含药血清，体外培养MDA-MB-231细胞，设置空白组，紫杉醇组，薯蓣丸低、中、高剂量联合紫杉醇组（10%、20%、30%含药血清）。Transwell小室实验检测细胞侵袭及迁移能力。将4T1细胞荷瘤BALB/c小鼠随机分为模型组、薯蓣丸组（0.024g/kg）、紫杉醇组（10mg/kg）、薯蓣丸联合紫杉醇组，每组12只，治疗期间记录小鼠一般状况及肿瘤大小，4周后处死小鼠，获取肿瘤组织。Western-blot检测PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达；RT-qPCR、Western-blot、免疫组织化学染色法检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2mRNA及蛋白表达。结果 与空白组比较，紫杉醇组与薯蓣丸各剂量联合紫杉醇组MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力降低，其中薯蓣丸各剂量联合紫杉醇组降低更明显（P＜0.05）。荷瘤小鼠治疗4周后，与模型组比较，紫杉醇组、薯蓣丸联合紫杉醇组小鼠肿瘤Belumosudil分子量体积减小（P＜0.05，P＜0.01），PI3K、pDigital histopathology-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达降低（P＜0.05，P＜0.01）；与模型组比较，薯蓣丸组、紫杉醇组、薯蓣丸联合紫杉醇组荷瘤小鼠E-cadherin表达升高，Vimentin、N-cadherin、MMP2表达降低（P＜0.05，P＜0.01），其中薯蓣丸联合紫杉醇组效果最佳（P＜0.05）。结论 薯蓣丸联合紫杉醇能抑制三阴性乳腺癌的生长及侵袭转移，其机制可能与下调PI3K/Akt/mTOR信号通路，抑制上皮-间质转化有关。

目的·研究低剂量地西他滨对原发免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患者来源的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法·纳入2020年4月—202VX-661 NMR1年10月上海交通大学医学院附属仁济医院血液科门诊或住院的ITP发病期患者10例,以及10例无骨髓异常的非ITP患者作为对照(normal codilatation pathologicntrol,NC),收集骨髓穿刺标本,分离MSC,流式细胞术检测其表面抗原标志物。使用CCK-8试剂盒和EdU细胞增殖检测试剂盒检测及比较ITP患者来源(MSC-ITP)和对照组来源(MSC-NC)的MSC增殖水GSI-IX分子式平差异,并使用微管荧光探针检测细胞形态的变化。使用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡情况,采用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒检测细胞凋亡水平。通过不同浓度的地西他滨以不同的时长处理MSC-ITP,探索地西他滨促其增殖的最佳浓度及处理时间。以最佳浓度的地西他滨处理MSC-ITP,观察其对细胞凋亡水平的影响。Western blotting检测细胞凋亡相关通路蛋白的表达,以及地西他滨的影响。结果·与MSC-NC相比,MSC-ITP细胞形态异常,细胞核碎裂、皱缩较多,体外增殖水平减弱,基础凋亡率增加。地西他滨刺激MSC-ITP增殖的最佳工作浓度为2.5μmol/L,最佳处理时间为24 h。2.5μmol/L地西他滨处理MSC-ITP 24 h后细胞核形态得到改善,细胞核的碎裂和凝聚减少,凋亡率显著降低(P<0.05)。Western blotting结果表明,地西他滨处理后,MSC-ITP中线粒体凋亡通路相关蛋白BAX降低,胱天蛋白酶(caspase3)和cleaved-caspase3减少(均P<0.05)。结论·ITP患者骨髓来源的MSC形态异常,体外增殖水平减弱,基础凋亡率增加;低剂量地西他滨可以促进该细胞增殖,抑制其凋亡;该作用可能是通过线粒体凋亡途径介导的。

目的：探讨基于赋能授权理论的多维化教育对乳腺癌外周静脉置入中心静脉导管（PICC）化疗患者癌痛程度、疾病不确定感水平及自我效能的影响。方法：回顾性选取我科2020年2月至2022年AM-2282体内实验剂量4月期间107例行PICC置管并化疗的乳腺癌患者按照干预方法的不同分成两组，对照组53例给予常规护理干预结合人文关怀护理干预，观察组54例联合赋能授权理论的多维化护理，对比两组患者癌痛程度，疾病不确定感水平，自我效能。结果：两组干预后癌性爆发痛发生率均降低，但观察组低于对照组（P<0.05）；两组干预后癌痛控制障碍得分均降低、疼痛应对策略得分均升高，但观察组得分变化幅度高于对照组（P <0.05）；两组干预后Mishel疾病不确定感量表(MUIS)分值均降低，但观察组降低幅度高于对照组（P<0.05）；两组干预前GSES评分比较无明显差异（P> 0.05)；观察组出院前、LEE011第2次化疗前和第3次化疗前GSES评分均高于对照组（P <0.05）。结论：基medial migration于赋能授权理论的多维化教育能够有效缓解乳腺癌PICC化疗患者的癌痛程度，改善疾病不确定感水平，提高自我效能。

目的 观察不同部位皮瓣移植对乳腺癌保乳术患者肿瘤学安全性及乳房缺损修复效果的影响。方法 选取2018年6月至2020年6月云南省第三人民医院收治的76例乳BMN 673试剂腺癌保乳术患者作为研究对象，根据乳房修复方式的不同分为胸外侧组(n=39)、背阔肌组(n=37)。胸外侧组行胸外侧筋膜皮瓣移植，背阔肌组行背阔肌肌皮瓣移植。比较两组手术情况、术后并发症、术前及术后1年乳房外观指标(乳头至胸骨上窝距离、乳头至中线距离)和术后1年乳房优良率、乳腺癌复发率及远处转移率。结果 胸外侧组手术时间较背阔肌组短，术中出血量较点击此处背阔肌组少(P<0.05);胸外侧组术后并发症发生率(5.13%)低于背阔肌组(24.32%)(P<0.05);两组术后1年乳头至胸骨上窝距离、乳头至中线距离比较，差异无统计学意义(P>0.05);两组术后1年乳房优良率infant microbiome、乳腺癌复发率及远处转移率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 胸外侧筋膜皮瓣移植与背阔肌肌皮瓣移植应用于乳腺癌保乳术患者的乳房缺损修复效果及肿瘤学安全性均较好，但前者具有手术时间短、创伤轻、并发症少等优势，临床价值更高。