目的 构建plenti-Crispr V2 ZNF703 sgRNA质粒。方法 根据人和鼠ZNF703基因序列中的外显子区设计sgRNA的靶向序列，并在靶序列的两端加上plenti-Crisprselleck化学 V2质粒构建所要求的黏性末端，得到并合成ZNF703sgRNA的引物；对合成的引物进行退火得到ZNF703 sgRNA双链寡核苷酸片段；将plenti-V2质粒进行BsmB I酶切、胶回收；将ZNF703 sgRNA双链寡核苷酸片selleckchem D-Lin-MC3-DMA段和酶切后胶回收的plenti-Crispr V2骨架片段（12 988 bp）进行连接、转化感受态细胞、挑取阳性克隆、菌落PCR鉴定和酶切鉴定，并进行测序验证。结果 成功构建plenti-Crispr V2ZNF703 sgRNA质粒，并利用plenti-Crispr V2 ZNF703 sgRNA成功构建了ZNF703敲除的结肠癌细胞系HCT-116。结论 构建了plenti-Crispr V2immunoaffinity clean-up ZNF703 sgRNA质粒，并在HCT-116细胞系中验证其敲除效果，为在人源肿瘤细胞中、鼠源细胞系中敲除ZNF703，以及为深入研究ZNF703的生物功能打下基础。