【目的】建立QuEChERS超高效液相色谱串联质谱法测定淡水鱼中地西泮、奥沙西泮和MS-222三种镇静剂残留的方法。采用单因素实验和五因素四水平的正交试验优化淡水鱼产品中3种镇静剂的QuEChERS提取方法。对云南省各地的淡水鱼市场中常见的淡水鱼中的三种镇静剂进行检测分析。针对检测结果进行讨论分析。【方法】使用高效液相色谱四级杆飞行时间串联质谱仪,建立了三种镇静剂的QuEChERS前处理法,并优化质谱条件,通过比较色谱柱、柱温、流速、流动相及其洗脱梯度优化色谱条件,建立检测方法。在单因素的基础上,通过极差法选定5因素,利用正交表对料液比、PSA粉末的量、C8粉末的量、超声时间、超声温度等因素设计正交试验,以回收率的高低为评价指标进行综合评分,确定样品最佳的提取方法。使用建立的检测方法对云南省各地州淡水鱼样品中3种镇静剂进行了定性定量的检测。【结果】1.建立了QuEChERS样品前处理结合超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定淡水鱼中地西泮、奥沙西泮和MS-222三种镇静剂残留的方法。方法可在8分钟内完成检测,3种目标化合物在线性范围AY-22989细胞培养内线性关系良好,地西泮的线性相关系数(r2)为0.9986,检出限和定量限分别是0.24、0.81μg/kg,奥沙西泮的线性相关系数(r2)为0.9990,检出限和定量biogas slurry限分别是0.27、0.91μg/kg,MS-222的线性相关系数(r2)为0.9989,检出限和定量限分别是0.03、0.12μg/kg,机制效应ME绝对值(%)分别为10.1,12.3和8.6。仪器的精密度良好,三种化合物低中高三种浓度的相对标准偏差分别为1.AZD9291体外28%、2.13%、4.02%;1.39%、1.97%、3.88%和1.18%、2.09%、3.83%。该方法快速、稳定、可靠,并且相对传统方法,其检出限更低更精确。2.利用单因素实验和正交试验比较不同称样量和提取试剂体积比例、不同PSA粉末的量、不同的C18粉末的量、不同超声时间和不同超声温度的提取效率,确定样品最佳条件为:称样量和提取试剂的体积比例为2:5,PSA粉末量为0.1g、C18粉末的量为0.1g、超声温度为50℃和、超声时间为10min,提取上清液过聚四氟乙烯(PTFE,直径13mm,孔径0.2μm)的滤膜。3.采集了云南省各地州淡水鱼市场共40样品,检测结果表明,从云南省各地州采集的40份样品中三种镇静剂的检测结果均为未检出。【结论】1.本文建立的QuEChERS液相色谱串联质谱法灵敏度高,稳定性好,检测线低,更为精确,可同时检测地西泮、奥沙西泮和MS-222三种镇静剂,且回收率实验中其目标物质的损失更少,能够满足大批量淡水鱼产品中三种目标镇静剂的检测要求。2.本实验确定三种镇静剂检测的最佳前处理条件为:称样量和提取试剂的体积比例为2:5,PSA粉末量为0.1g、C18粉末的量为0.1g、超声温度为50℃和、超声时间为10min,提取上清液过聚四氟乙烯的滤膜。3.对云南各地州淡水鱼市场中三种镇静剂进行了检测,从云南省各地州采集的40份样品中三种镇静剂的检测结果均为未检出。